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白喉毒素无毒变异体CRM_(197)的表达及其载体作用 被引量：12
1
作者 王春娥 叶强 李凤祥 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第8期687-691,共5页
目的表达白喉毒素无毒变异体CRM197,并考察其载体作用。方法利用基因工程技术在大肠杆菌BL21(DE3)中表达CRM197,用金属镍离子亲和层析纯化;以重组CRM197为蛋白载体,在EDAC的作用下,与活化的A群脑膜炎球菌荚膜多糖(GAMP)结合,制备GAMP-rC... 目的表达白喉毒素无毒变异体CRM197,并考察其载体作用。方法利用基因工程技术在大肠杆菌BL21(DE3)中表达CRM197,用金属镍离子亲和层析纯化;以重组CRM197为蛋白载体,在EDAC的作用下,与活化的A群脑膜炎球菌荚膜多糖(GAMP)结合,制备GAMP-rCRM197结合物,免疫BALB/c小鼠,间接ELISA法测定血清中A群脑膜炎球菌多糖特异性IgG抗体,并分析其免疫原性。结果重组CRM197在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,表达量占菌体总蛋白的25%左右;Western blot证明重组CRM197具有良好的反应原性;各针接种后,结合物诱生的多糖特异性IgG水平均显著高于GAMP组和GAMP+rCRM197混合物组,具有较强的免疫原性;多次接种产生了免疫增强效应,重组CRM197具有载体蛋白的作用。结论已在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达了重组CRM197,以纯化的重组CRM197作为载体制备的GAMP-rCRM197结合物具有良好的免疫原性,为以重组CRM197为蛋白载体制备其他结合疫苗奠定了实验基础。 展开更多
关键词 白喉毒素 无毒变异体 CRM197 载体蛋白 结合疫苗 A群脑膜炎球菌
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新型ACYW135群脑膜炎球菌-白喉毒素无毒变异体结合疫苗的制备及其免疫原性评价
2
作者 姚永鹏 张子昌 +5 位作者 许可 朱慧 李松 王基宏 魏鑫 黄杰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2024年第7期795-800,共6页
目的 制备新型ACYW135群脑膜炎球菌-白喉毒素无毒变异体(cross-reacting material 197,CRM197)结合疫苗,并评价其免疫原性,以期为流行性脑脊髓膜炎的防控奠定基础。方法 用1-氰基-4-(二甲氨基)吡啶四氟硼酸盐(1-cyano-4-dimethylamino p... 目的 制备新型ACYW135群脑膜炎球菌-白喉毒素无毒变异体(cross-reacting material 197,CRM197)结合疫苗,并评价其免疫原性,以期为流行性脑脊髓膜炎的防控奠定基础。方法 用1-氰基-4-(二甲氨基)吡啶四氟硼酸盐(1-cyano-4-dimethylamino pyridinium tetrafluoroborate,CDAP)分别将A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖羟基活化为氰基,并以己二酸二酰肼(adipic acid dihydrazide,ADH)作为连接剂与活化多糖通过氰酸酯连接,生成裸露酰肼基的多糖-ADH衍生物,再通过4-(4,6-二甲氧基三嗪-2-基)-4-甲基吗啉盐酸盐[4-(4,6-dimethoxy-1,3,5-triazin-2-yl)-4-methyl morpholinium chloride,DMTMM]与CRM197生成酰胺键偶联,得到各单价结合物原液,并进行相关检测。将单价结合物原液按一定比例混合后,分别加入3种冻干保护剂(蔗糖溶液、乳糖溶液及蔗糖+甘露醇溶液),经冻干,制备3种ACYW135-CRM197结合疫苗。将制备的疫苗于0、14 d经雄性NIH小鼠背部皮下注射,0.2 mL/只,每组10只,并于初次免疫后21 d,经小鼠颌下静脉采血,分离血清,ELISA法检测特异性抗体水平。结果 A、C、Y、W135-CRM197单价结合物原液的检测结果均符合质量标准。ACYW135-CRM197疫苗成品可与各群多糖抗血清形成明显沉淀线;平均分子量均在1 680 000~5 230 000范围内。3种ACYW135-CRM197结合疫苗的抗A、C、Y、W135群多糖IgG抗体阳转率均为100%;ACYW135-CRM197(蔗糖)、ACYW135-CRM197(乳糖)和ACYW135-CRM197(蔗糖+甘露醇)组比较,差异均无统计学意义(t=0.249~1.157,P均> 0.05)。结论 本研究制备了新型ACYW135-CRM197结合疫苗,且该疫苗在小鼠体内具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 脑膜炎球菌 白喉毒素无毒变异体 结合疫苗 免疫原性
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冻干b型流感嗜血杆菌荚膜多糖-白喉毒素无毒变异体CRM197结合物的制备及其质量评价
3
作者 马伟 曹方 +4 位作者 胡利平 郭阳漾 王良超 杨欢 王丹雅 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2020年第10期1093-1096,共4页
目的制备冻干b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenza type b,Hib)荚膜多糖-白喉毒素无毒变异体CRM197结合物,并评价其质量。方法发酵培养白喉棒状杆菌C7 M1菌株表达CRM197蛋白,产物经DEAE SFF阴离子层析柱纯化,冻干后获得载体蛋白CRM19... 目的制备冻干b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenza type b,Hib)荚膜多糖-白喉毒素无毒变异体CRM197结合物,并评价其质量。方法发酵培养白喉棒状杆菌C7 M1菌株表达CRM197蛋白,产物经DEAE SFF阴离子层析柱纯化,冻干后获得载体蛋白CRM197。Hib荚膜多糖水解后,采用氧化还原法与CRM197蛋白结合,制备结合物原液,冻干后制备3批成品。按《中国药典》三部(2015版)要求对成品进行各项生化指标检测及鉴别试验,并通过免疫新西兰幼兔,检测结合物的免疫原性。结果3批冻干疫苗成品的各项生化指标及鉴别试验均符合相关规定,免疫后家兔血清中抗体滴度明显升高(P<0.01),且可通过加强免疫提高其免疫效果。结论成功制备了冻干Hib荚膜多糖-白喉毒素无毒变异体CRM197结合物,且具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 B型流感嗜血杆菌 白喉毒素无毒变异体 CRM197蛋白 结合物 免疫原性
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