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罗非鱼无乳链球菌环介导等温扩增(LAMP)检测技术的建立及应用 被引量：7
1
作者 余艳玲 彭昊 +3 位作者 冯世文 张永德 罗洪林 李军 《江苏农业科学》 2019年第13期200-200,201-203,共4页
针对罗非鱼无乳链球菌Sip基因建立了LAMP检测方法,并对野外样本进行了无乳链球菌的调查研究。结果表明,目标Sip基因可在63℃40min内被LAMP检测到,比PCR快约2h,其DNA检测最低浓度为3.55×10^-5ng/μL,灵敏度比PCR高100倍,且对参考细... 针对罗非鱼无乳链球菌Sip基因建立了LAMP检测方法,并对野外样本进行了无乳链球菌的调查研究。结果表明,目标Sip基因可在63℃40min内被LAMP检测到,比PCR快约2h,其DNA检测最低浓度为3.55×10^-5ng/μL,灵敏度比PCR高100倍,且对参考细菌无扩增。野外样品检测结果表明,运用LAMP检测技术对GBS的检出率为81.3%,比PCR高约20.0%。应用LAMP和PCR分别检测健康罗非鱼GBS检出率4.4%和2.2%,检测池塘水样品GBS检出率分别为10.0%和6.7%。 展开更多
关键词 罗非鱼 无乳链球菌(gbs) 环介导等温扩增(LAMP)
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奶牛乳房炎无乳链球菌的分离鉴定 被引量：4
2
作者 时永强 祝宇 +3 位作者 王奇惠 张赛飞 叶妍琳 曲伟杰 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第8期163-165,293,共4页
为了能及时准确鉴定出奶牛乳房炎的病原,试验对规模化牛场的奶样进行细菌分离培养,从细菌的形态、生化特性、PCR扩增、动物回归试验等方面进行鉴定。结果表明:分离的菌株在形态、生化特性等方面疑似为无乳链球菌(GBS),PCR扩增及基因比对... 为了能及时准确鉴定出奶牛乳房炎的病原,试验对规模化牛场的奶样进行细菌分离培养,从细菌的形态、生化特性、PCR扩增、动物回归试验等方面进行鉴定。结果表明:分离的菌株在形态、生化特性等方面疑似为无乳链球菌(GBS),PCR扩增及基因比对与GBS的同源性高达97%~98%,动物回归试验结果显示可引起动物乳房炎。说明分离的菌株为GBS。 展开更多
关键词 奶牛乳房炎 无乳链球菌(gbs) 聚合酶链式反应 细菌生化鉴定 CAMP
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尼罗罗非鱼无乳链球菌荚膜多糖合成基因的表达及其与荚膜唾液酸含量、菌株致病性的关系 被引量：1
3
作者 师红亚 董浚键 +4 位作者 张德锋 孙成飞 田园园 卢迈新 叶星 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期291-302,共12页
为了解尼罗罗非鱼无乳链球菌(GBS)荚膜多糖合成基因的表达及其与荚膜唾液酸含量、菌株致病性的关系,本实验克隆了尼罗罗非鱼荚膜多糖合成基因cps E、cps K和neu A,通过q RT-PCR方法分析了这3个基因在不同培养温度下表达水平的变化,同时... 为了解尼罗罗非鱼无乳链球菌(GBS)荚膜多糖合成基因的表达及其与荚膜唾液酸含量、菌株致病性的关系,本实验克隆了尼罗罗非鱼荚膜多糖合成基因cps E、cps K和neu A,通过q RT-PCR方法分析了这3个基因在不同培养温度下表达水平的变化,同时通过比色法测定了不同培养温度下GBS荚膜唾液酸含量的变化,通过人工感染实验分析了不同水温条件下GBS对罗非鱼的致病性。结果显示,cps E、cps K和neu A编码的氨基酸序列均具有保守的与荚膜多糖合成相关的酶活性位点,Cps E、Neu A与已知鱼源GBS(Ia和Ib型)和人源GBS(Ia、Ib和II^IX型)相应序列的同源性均达到97%以上,而Cps K与鱼源、人源的序列同源性则分别为56%~100%和27%~100%。在不同培养温度下GBS cps K和neu A基因表达水平的变化与荚膜唾液酸含量的变化一致;在较高温度(28和34°C)下培养的GBS荚膜唾液酸含量及菌株攻毒后罗非鱼的死亡率均随温度的升高而递增,而在22°C下培养的GBS唾液酸含量最高,攻毒后罗非鱼的死亡率却最低。本研究结果表明,GBS Cps K和Neu A在GBS荚膜多糖的唾液酸化中起重要作用,较低温度下GBS荚膜唾液酸的高含量有助于其在宿主体内的潜伏,而较高水温条件下细菌的强致病性可能还与除荚膜唾液酸外的某些重要的毒力因子的表达有关。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 无乳链球菌(gbs) 温度 荚膜多糖合成基因 荚膜唾液酸 致病力
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尼罗罗非鱼Siglec-4b like基因的克隆与表达特性分析 被引量：2
4
作者 杜娟娟 董浚键 +3 位作者 叶星 孙成飞 田园园 卢迈新 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期67-76,共10页
从尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)嗜中性粒细胞中克隆了唾液酸结合型免疫球蛋白凝集素Siglec-4b like基因,对其进行生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR检测:1)早期胚胎发育过程的表达;2)成鱼组织中的分布;3)人工感染无乳链球菌(S... 从尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)嗜中性粒细胞中克隆了唾液酸结合型免疫球蛋白凝集素Siglec-4b like基因,对其进行生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR检测:1)早期胚胎发育过程的表达;2)成鱼组织中的分布;3)人工感染无乳链球菌(Streptococcus agalactiae,GBS)后组织表达的变化。结果表明,尼罗罗非鱼Siglec-4b like具有与哺乳类Siglec-4相似的特异性结构域及保守氨基酸残基;早期胚胎发育Siglec-4b like基因在卵子中有一定表达量,受精后7 h即卵裂期表达上调,随后表达下降;Siglec-4b like基因在所检测的各组织中均有表达,鳃的表达量最高,其次是肌肉、皮肤、头肾和肠,其他组织的表达量较低;人工感染无乳链球菌后,Siglec-4b like在鳃、肾与肠等多个组织的表达均呈下调趋势。研究结果为进一步开展Siglec-4b like对罗非鱼免疫系统的调控作用及其与无乳链球菌免疫逃逸机制关系的研究奠定基础。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 唾液酸结合型免疫球蛋白凝集素Siglec-4b LIKE 组织表达 胚胎发育 无乳链球菌gbs
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