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新型番鸭呼肠孤病毒σC蛋白的原核表达及其抗原特性 被引量:11
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作者 陈海鹏 云涛 +4 位作者 张存 余斌 倪征 华炯钢 崔言顺 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第6期1448-1452,共5页
新型番鸭呼肠孤病毒是近年来新发现的一种引起鸭严重疾病的病原,该病毒与经典MDRV主要在病毒宿主范围、体外培养特性、临床致病性和免疫保护特性上存在显著的差异。通过RT-PCR扩增新型呼肠孤病毒σC基因,经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切处理,插入... 新型番鸭呼肠孤病毒是近年来新发现的一种引起鸭严重疾病的病原,该病毒与经典MDRV主要在病毒宿主范围、体外培养特性、临床致病性和免疫保护特性上存在显著的差异。通过RT-PCR扩增新型呼肠孤病毒σC基因,经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切处理,插入到p ET-28a(+)原核表达载体,获得重组质粒p ET-28a(+)-σC。将重组阳性质粒转化至BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达后经SDS-PAGE电泳对σC蛋白进行初步分析,蛋白分子量约为36 k Da。重组蛋白经纯化后免疫实验兔,获得抗σC蛋白的高效免疫血清。通过Western Blot与间接免疫荧光实验初步表明,新型鸭呼肠孤病毒σC蛋白具有良好的反应活性。 展开更多
关键词 新型呼肠病毒 σC基因 原核表达 兔抗血清
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山东地区新型鸭呼肠孤病毒的分离与鉴定 被引量:9
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作者 高绪慧 吴海洋 +14 位作者 孙吉谦 魏笑笑 李志中 孙伟 王晓茹 徐腾飞 刁秀国 马芹 武梅 韩姗姗 张民霞 党喜唯 段欣强 张秀美 秦立廷 《中国家禽》 北大核心 2018年第20期61-63,共3页
为了解山东地区肉鸭呼肠孤病毒的流行情况,从山东地区收集肉鸭坏死脾脏病料,经研磨处理,接种鸭胚,对分离病毒进行PCR扩增和σC基因测序分析。PCR扩增结果显示共分离得到6株病毒,测序结果显示,6株病毒σC基因核苷酸同源性为99.0%~100.0%... 为了解山东地区肉鸭呼肠孤病毒的流行情况,从山东地区收集肉鸭坏死脾脏病料,经研磨处理,接种鸭胚,对分离病毒进行PCR扩增和σC基因测序分析。PCR扩增结果显示共分离得到6株病毒,测序结果显示,6株病毒σC基因核苷酸同源性为99.0%~100.0%,与新型呼肠孤病毒毒株核苷酸同源性为93.7%~99.3%。由此确定,分离的6株病毒均为新型呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)。该研究为山东地区NDRV的防控提供一定参考依据。 展开更多
关键词 新型呼肠病毒 分离 鉴定 σC基因
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新型鸭呼肠孤病毒和鸭肝炎病毒混合感染的诊断及病原分离 被引量:8
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作者 刘伟 崔国杰 陈少莺 《畜牧与兽医》 北大核心 2014年第5期92-95,共4页
广东某养鸭场番鸭发生疑似雏鸭肝炎急性死亡病例。为了确诊病因,取病鸭肝脾等组织进行实验室检测和病原分离鉴定,结果显示:病鸭肝脾组织,冰冻切片免疫荧光检测番鸭源鹅细小病毒(MDGPV)和番鸭细小病毒(MPV)阴性;RT-PCR检测鸭肝炎病毒(DHV... 广东某养鸭场番鸭发生疑似雏鸭肝炎急性死亡病例。为了确诊病因,取病鸭肝脾等组织进行实验室检测和病原分离鉴定,结果显示:病鸭肝脾组织,冰冻切片免疫荧光检测番鸭源鹅细小病毒(MDGPV)和番鸭细小病毒(MPV)阴性;RT-PCR检测鸭肝炎病毒(DHV)和新型番鸭呼肠孤病毒(NDRV)为阳性。将肝脾匀浆上清接种12日龄番鸭胚后3日死亡,进一步应用RT-PCR和免疫荧光法检测胚液和死胚胚心,结合扩增基因的测序、动物回归试验等,确诊发病鸭为NDRV和DHV的混合感染。 展开更多
关键词 番鸭 鸭肝炎病毒 新型呼肠病毒 混合感染
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广东新型鸭呼肠孤病毒σB蛋白基因克隆及序列分析 被引量:5
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作者 黄雯晶 梁国智 +2 位作者 梅敏敏 李晓文 黄淑坚 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第2期327-335,共9页
为研究广东新型呼肠孤病毒(NDRV)的基因变异及遗传演化情况,本试验从广东不同鸭场病死鸭肝脏、脾脏等组织脏器中分离到8株流行毒株,用RT-PCR方法进行σB蛋白基因扩增、克隆与序列分析,并与其他毒株σB蛋白的氨基酸特性、蛋白抗原和蛋白... 为研究广东新型呼肠孤病毒(NDRV)的基因变异及遗传演化情况,本试验从广东不同鸭场病死鸭肝脏、脾脏等组织脏器中分离到8株流行毒株,用RT-PCR方法进行σB蛋白基因扩增、克隆与序列分析,并与其他毒株σB蛋白的氨基酸特性、蛋白抗原和蛋白基因进行系统进化比对分析。结果表明,广东省鸭群中感染的NDRV与国内其他地区报道的DRV核苷酸序列同源性很高,达96.6%~99.5%,而与禽呼肠孤病毒(ARV)和番鸭呼肠孤病毒(MDRV)的同源性则较低,分别为64.6%~66.5%和66.2%~67.1%;8株NDRV之间的核苷酸序列同源性高达97.7%~99.7%。与其他毒株比较结果显示,本试验分离的NDRV毒株磷酸化位点均比参考毒株ARV和MDRV少,且大多数区域的抗原指数都较高,抗原性与MDRV较为接近,遗传进化分析结果表明,NDRV和国内其他DRV处于独立的进化分支,ARV和MDRV则处于不同分支。结果表明,广东省流行的NDRV毒株σB蛋白基因序列高度保守,且广东地区分离的NDRV与国内其他地区分离的DRV没有明显的地域差异。 展开更多
关键词 新型呼肠病毒 σB蛋白 克隆 序列分析
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芪芩汤治疗新型呼肠孤病毒感染雏鸭的效果分析
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作者 杨珊珊 《家禽科学》 2024年第11期11-15,共5页
探讨和分析芪芩汤治疗新型呼肠孤病毒感染雏鸭的效果。选择山西地区某规模化大型养鸭场150只患新型呼肠孤病毒病的雏鸭作为试验动物,按照随机数字表法,分为3个试验组,每组有50只病鸭。试验1组未给予任何药物治疗作为对照组,试验2组雏鸭... 探讨和分析芪芩汤治疗新型呼肠孤病毒感染雏鸭的效果。选择山西地区某规模化大型养鸭场150只患新型呼肠孤病毒病的雏鸭作为试验动物,按照随机数字表法,分为3个试验组,每组有50只病鸭。试验1组未给予任何药物治疗作为对照组,试验2组雏鸭皮下注射0.5 mL/只NDRV卵黄抗体治疗,试验3组雏鸭皮下注射0.5 mL/只NDRV卵黄抗体+口服1.0 g/mL芪芩汤,每天上、下午各给药1次,连续治疗一周,观察、比较各组的治疗有效率、雏鸭血清中IFN-α、IFN-β、IFN-γ水平变化。试验3组在卵黄抗体治疗的基础上额外给予芪芩汤治疗一周后,其雏鸭痊愈数达到41只,治疗有效率显著高于试验1组、2组(P<0.05)。试验结果显示,在卵黄抗体治疗的基础上额外给予芪芩汤的试验3组雏鸭血清中IFN-α、IFN-β、IFN-γ水平显著高于仅给予卵黄抗体治疗的试验2组和作为对照的试验1组,差异具有统计学意义(P<0.05)。本研究表明,应用芪芩汤治疗新型呼肠孤病毒感染雏鸭具有良好的效果,这为今后兽医临床上应用芪芩汤治疗和预防NDRV感染雏鸭提供了科学合理的参考依据。 展开更多
关键词 芪芩汤 新型呼肠病毒 雏鸭 卵黄抗体
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一例樱桃谷鸭脾坏死症的诊断
6
作者 付环茹 赵敏 万春和 《福建畜牧兽医》 2023年第3期77-78,共2页
2023年2月,福建三明某樱桃谷鸭养殖场约70%鸭出现脾坏死症,剖检可见肝脏表现为多发黄白色坏死灶(或出血灶),脾脏肿大成大理石样等典型“脾坏死症”症状。为明确病原,采用肝脾混合物制备悬液接种番鸭胚,将死亡胚经RT-PCR对常规病原检测后... 2023年2月,福建三明某樱桃谷鸭养殖场约70%鸭出现脾坏死症,剖检可见肝脏表现为多发黄白色坏死灶(或出血灶),脾脏肿大成大理石样等典型“脾坏死症”症状。为明确病原,采用肝脾混合物制备悬液接种番鸭胚,将死亡胚经RT-PCR对常规病原检测后,明确该病原为新型呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)。 展开更多
关键词 樱桃谷鸭 脾坏死症 新型呼肠病毒 诊断
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新型鸭呼肠孤病毒DRV-XX株全基因组序列测定及分析 被引量:11
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作者 梁国智 卿柯香 +2 位作者 梅敏敏 黄雯晶 黄淑坚 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期24-27,共4页
本研究自广东省新兴地区疑似新型鸭呼肠孤病料样品中分离出一株病毒,命名为DRV-XX株。利用RT-PCR方法对DRV-XX株进行全基因组序列扩增,拼接获得其全基因组(23 419 bp),对其10个基因节段进行分析显示,该分离株与禽呼肠孤病毒(ARV)及番鸭... 本研究自广东省新兴地区疑似新型鸭呼肠孤病料样品中分离出一株病毒,命名为DRV-XX株。利用RT-PCR方法对DRV-XX株进行全基因组序列扩增,拼接获得其全基因组(23 419 bp),对其10个基因节段进行分析显示,该分离株与禽呼肠孤病毒(ARV)及番鸭呼肠孤病毒(MDRV)的相似性较低,而与国内新型鸭呼肠孤病毒(New-type duck reovirus,NDRV)相似性较高(99%),表明该分离株为NDRV。对其10个RNA节段分别进行测序及遗传进化分析,其中S3基因序列分析显示,DRV-XX与MDRV共同构成一主干支,与其S1、S2、S4、M1、M3、L1基因的一致;而M2基因进化树显示,DRV-XX与ARV处于同一主干支;由L2、L3组基因分析显示,DRV-XX与ARV在同一主干支,并有MDRV参与其中,而另一主干支为MDRV。因此,推测DRV-XX株的不同基因组节段来源不同,可能是ARV和MDRV发生同义突变,也可能是基因重组的结果。该研究丰富了NDRV的基因库相关信息,也为广东地区NDRV的防制提供一定参考依据。 展开更多
关键词 新型呼肠病毒广东新兴(DRV-XX)株 全基因组序列 分子进化
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一例鸭新型呼肠孤病毒感染的病原分离鉴定与致病性研究
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作者 孔桂慧 赵艳 唐德宏 《山东畜牧兽医》 2024年第6期19-21,共3页
为了确诊山东济宁某养鸭场14日龄樱桃谷商品肉鸭死亡发病原因,本试验无菌采取病死鸭的肝脏、脾脏和脑等组织,采用病毒分离鉴定、细菌分离纯化并结合特异PCR鉴定等方法确诊病原。结果显示,从樱桃谷肉鸭脾脏组织中分离到1株鸭呼肠孤病毒(D... 为了确诊山东济宁某养鸭场14日龄樱桃谷商品肉鸭死亡发病原因,本试验无菌采取病死鸭的肝脏、脾脏和脑等组织,采用病毒分离鉴定、细菌分离纯化并结合特异PCR鉴定等方法确诊病原。结果显示,从樱桃谷肉鸭脾脏组织中分离到1株鸭呼肠孤病毒(DRV),命名为JNDRV19株;JNDRV19株Sigma C(σC)基因核苷酸序列与其他9株参考毒株存在96%~99%同源,属于鸭新型呼肠孤病毒(NDRV);JNDRV19株可导致雏鸭减重,80%雏鸭出现典型剖检病变。本研究证实该批樱桃谷商品肉鸭的大量死亡是由NDRV感染与某种细菌混合感染导致,对樱桃谷肉鸭科学防控NDRV,保障肉鸭养殖业的健康发展具有一定的指导意义。 展开更多
关键词 新型呼肠病毒(NDRV) 分离鉴定 致病性
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实时荧光定量TaqMan RT-PCR检测鸭新型呼肠孤病毒方法的建立及初步应用
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作者 刘湘 曾小辉 +2 位作者 蔡广娣 熊金光 王友令 《养禽与禽病防治》 2023年第9期12-17,共6页
研究旨在建立一种适用于鸭新型呼肠孤病毒检测的实时荧光定量TaqManRT-PCR技术。以鸭新型呼肠孤病毒(SDDZ株)RNA为模板,建立检测鸭新型呼肠孤病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。制备含有上述NDRV目的片段的RNA作为标准品,以10倍比稀释的标... 研究旨在建立一种适用于鸭新型呼肠孤病毒检测的实时荧光定量TaqManRT-PCR技术。以鸭新型呼肠孤病毒(SDDZ株)RNA为模板,建立检测鸭新型呼肠孤病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。制备含有上述NDRV目的片段的RNA作为标准品,以10倍比稀释的标准品建立标准曲线,测定敏感性。同时采用标准品检测该方法的批内和批间重复性,并与本实验室所保存的多种病毒进行特异性检测。结果:建立的实时荧光定量TaqManRT-PCR方法能在鸭新型呼肠孤病毒(SDDZ株)RNA样本中检出荧光信号。最低检出量为1.77copies/μL;线性范围达10个数量级。该方法重复性良好,批内变异系数不足1.1%;批间变异系数不足1.7%。该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,经体外感染细胞培养物以及临床样品检测证实,该方法可实时反映病毒液中的病毒含量,可在获得样品后3h以内得到检测结果,可用于临床样品中鸭新型呼肠孤病毒的快速检测。 展开更多
关键词 新型呼肠病毒 实时荧光定量PCR TAQMAN 探针
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一种新的鸭病(暂名鸭出血性坏死性肝炎)病原学研究初报 被引量:72
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作者 陈少莺 陈仕龙 +7 位作者 林锋强 江斌 王劭 程晓霞 朱小丽 张世忠 李兆龙 程由铨 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2009年第16期28-31,共4页
【研究目的】分离并初步鉴定鸭出血性坏死性肝炎的病原。【研究方法】番鸭胚尿囊腔接种法分离病原,并通过电镜观察、动物回归、分离毒部分理化生物学特性、核酸节段分析等方法鉴定病原。【研究结果】从临床表现为肝脏不同程度点/斑块状... 【研究目的】分离并初步鉴定鸭出血性坏死性肝炎的病原。【研究方法】番鸭胚尿囊腔接种法分离病原,并通过电镜观察、动物回归、分离毒部分理化生物学特性、核酸节段分析等方法鉴定病原。【研究结果】从临床表现为肝脏不同程度点/斑块状出血和坏死点/灶为主要病变的病死雏番鸭和雏半番鸭肝脾组织中分离到8株病毒。分离毒能致死番鸭胚和鸡胚,胚体充出血、胚肝肿大出血坏死;人工感染1~2日龄雏番鸭、雏半番鸭均能复制出与临床自然发病鸭相同的临床症状和病理变化,并能回收到病毒;分离毒能在番鸭胚成纤维细胞(MDEF)中增殖并产生细胞病变,经电镜观察,病毒在细胞浆中增殖,呈大量散在、成堆和晶格状排列,病毒粒子呈球形、二十面体对称、无囊膜、双层衣壳、直径70nm左右;分离毒不能凝集鸡和鸽红细胞,对乙醚、氯仿、FUDR不敏感;病毒核酸为dsRNA,在SDS-PAGE中具有禽呼肠孤病毒10个RNA片段的特征(L1-3、M1-3和S1-4);应用MDRV特异性引物不能从分离毒中扩增出任何条带。【结论】初步表明分离毒是鸭出血性坏死性肝炎的病原,鉴于分离毒的上述特性,暂将此分离毒归属于呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属新型鸭呼肠孤病毒。 展开更多
关键词 出血性坏死性肝炎 新型呼肠病毒
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新型鸭呼肠孤病毒的分离与鉴定 被引量:59
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作者 陈少莺 陈仕龙 +5 位作者 林锋强 王劭 江斌 程晓霞 朱小丽 李兆龙 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期224-230,共7页
本研究从临床表现为出血性坏死性肝炎的病死鸭肝脾中分离到病毒。病原特性鉴定显示,分离毒能致死番鸭胚和鸡胚;人工感染1日龄雏番鸭、雏半番鸭均能复制出与临床自然发病鸭相同的临床症状和病理变化,并能回收到病毒。分离毒能在MDEF等多... 本研究从临床表现为出血性坏死性肝炎的病死鸭肝脾中分离到病毒。病原特性鉴定显示,分离毒能致死番鸭胚和鸡胚;人工感染1日龄雏番鸭、雏半番鸭均能复制出与临床自然发病鸭相同的临床症状和病理变化,并能回收到病毒。分离毒能在MDEF等多种细胞中增殖并产生细胞病变。电镜下病毒在细胞浆中呈大量散在、成堆和晶格状排列,病毒粒子呈球形、无囊膜、双层衣壳、直径70nm左右。在SDS-PAGE中具有禽呼肠孤病毒10个RNA片段的特征,但M1-3和S1-4片段的迁移率明显不同于番鸭呼肠孤病毒(MDRV)。分离毒S3基因全序列与禽呼肠孤病毒(ARV)、火鸡呼肠孤病毒(TRV)和MDRV的核苷酸同源性分别为60%~60.2%,61.9%,62.3%~62.7%,氨基酸同源性分别为68.2%~69%,68.2%,69.3%~70.1%;S3基因编码的σB蛋白属于单独的进化分支,提示分离毒S3基因具有不同于ARV和MDRV的特征。结果表明鸭出血性坏死性肝炎的病原是一种属于呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属新型鸭呼肠孤病毒。 展开更多
关键词 新型呼肠病毒 出血性坏死性肝炎 分离 鉴定
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新型鸭呼肠孤病毒分离株的致病性研究 被引量:33
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作者 陈仕龙 陈少莺 +6 位作者 程晓霞 林锋强 江斌 王劭 朱小丽 张世忠 李兆龙 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2010年第4期14-18,共5页
【目的】研究新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)的致病性。【方法】以NDRV分离株NP01、NP03、NPM为供试病毒,分析其对禽胚(番鸭胚、鸡胚)、部分禽类(雏番鸭、雏半番鸭、雏鸡、雏鹅)及细胞的致病性。【结果】NDRV分离株经尿囊腔接种能100%... 【目的】研究新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)的致病性。【方法】以NDRV分离株NP01、NP03、NPM为供试病毒,分析其对禽胚(番鸭胚、鸡胚)、部分禽类(雏番鸭、雏半番鸭、雏鸡、雏鹅)及细胞的致病性。【结果】NDRV分离株经尿囊腔接种能100%致死12日龄番鸭胚和9日龄鸡胚。2Et龄雏番鸭、雏半番鸭经腿肌、口鼻、爪垫等途径人工感染NDRV分离株后,出现了与自然病例相同的病症,NDRV分离株对雏番鸭和雏半番鸭的致死率分别为20%~53%和13%~33%,同时能从病死鸭肝脾中回收到该病毒,耐过鸭大多成为僵鸭;15日龄雏鸡和2日龄雏鹅人工感染NDRV分离株后观察20d,均未表现出NDRV致病的临床症状。NDRV分离株具有较广的细胞亲嗜性,能在MDEF、CEF、AD293、Marc145、Vero、ST、MDCK等细胞中增殖并产生细胞病变,病变细胞呈现巨融合状;但NDRV分离株在PK细胞中盲传3代均未出现病变。【结论】NDRV在致病特性方面明显不同于禽呼肠孤病毒和番鸭呼肠孤病毒。 展开更多
关键词 新型呼肠病毒 致病性 禽胚 禽类 细胞病变
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3种禽类呼肠孤病毒血清学相关性及致细胞病变差异分析 被引量:29
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作者 陈仕龙 陈少莺 +6 位作者 程晓霞 江斌 林锋强 王劭 朱小丽 李兆龙 张世忠 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期533-537,共5页
本研究旨在研究3种不同疾病型禽类呼肠孤病毒间的抗原性关系及病毒的培养特性。作者通过血清中和试验测定了禽呼肠孤病毒(ARV S1133株)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV 9710株)、新型鸭呼肠孤病毒(NDRV NP01株)3种禽类呼肠孤病毒的血清学相关性,... 本研究旨在研究3种不同疾病型禽类呼肠孤病毒间的抗原性关系及病毒的培养特性。作者通过血清中和试验测定了禽呼肠孤病毒(ARV S1133株)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV 9710株)、新型鸭呼肠孤病毒(NDRV NP01株)3种禽类呼肠孤病毒的血清学相关性,统计抗原相关性R值;并应用部分禽胚原代细胞及哺乳动物传代细胞对这3种病毒的培养特性进行了初步研究。结果表明,3种病毒株之间的R值很小,抗原相关性较低;三者具有广泛的细胞亲嗜性,能在多种细胞中增殖,并产生细胞病变,但病毒致细胞病变特征有所差异,ARV和NDRV均以巨融合为主,而MDRV则以细胞圆缩坏死为主。上述结果表明导致禽类不同疾病的ARV、MDRV和NDRV三者之间的抗原相关性较低,病毒的细胞培养特性也不同,细胞病变类型的差别提供了一种初步鉴别禽类呼肠孤病毒的方法。 展开更多
关键词 呼肠病毒 番鸭呼肠病毒 新型呼肠病毒 中和试验 抗原性变异 细胞病变
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山东地区新型鸭呼肠孤病毒致病特点与变异分析 被引量:18
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作者 于可响 路晓 +5 位作者 刘存霞 高月花 亓丽红 宋玲玲 李玉峰 宋敏训 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2018年第4期24-28,共5页
本研究将2011~2018年从山东地区分离到的8株新型鸭呼肠孤病毒进行了毒力和致病性试验,结果显示,8株毒株对鸭胚、鸭胚成纤维细胞、雏鸭的致病性基本一致,鸭胚毒价为10-5.00~10-6.00/0.1 m L,鸭胚成纤维细胞的毒价为10-5.33~10-6.30/0.1 m... 本研究将2011~2018年从山东地区分离到的8株新型鸭呼肠孤病毒进行了毒力和致病性试验,结果显示,8株毒株对鸭胚、鸭胚成纤维细胞、雏鸭的致病性基本一致,鸭胚毒价为10-5.00~10-6.00/0.1 m L,鸭胚成纤维细胞的毒价为10-5.33~10-6.30/0.1 m L;对8株毒株的主要抗原σC蛋白核苷酸和氨基酸序列进行比对分析,结果显示,核苷酸同源性为94.5%~99.6%,氨基酸同源性为95.0%~99.4%;通过绘制遗传进化树发现,与全国其他地区毒株相比,山东地区分离的这8株分离株处于一个独立分支,并且这8株分离株的遗传进化与时间有着密切的相关性,暗示山东地区新型鸭呼肠孤病毒随着时间的推移在不断发生着变异。 展开更多
关键词 新型呼肠病毒 毒力 致病性 遗传变异
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3株樱桃谷肉鸭源和2株番鸭源新型鸭呼肠孤病毒的分离与鉴定 被引量:16
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作者 武鸿 康亚男 +3 位作者 唐荣宏 陈冰 郁宏伟 鲍恩东 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期328-335,共8页
[目的]本文旨在对临床表现为肝、脾坏死的病死鸭进行鸭呼肠孤病毒(NDRV)分离与鉴定。[方法]通过接种10日龄鸭胚进行病毒的初步分离培养,结合PCR检测及σC基因序列分析进行分子生物学鉴定。将NDRV分离毒株接种鸡肝癌细胞(LMH)、鸡胚成纤... [目的]本文旨在对临床表现为肝、脾坏死的病死鸭进行鸭呼肠孤病毒(NDRV)分离与鉴定。[方法]通过接种10日龄鸭胚进行病毒的初步分离培养,结合PCR检测及σC基因序列分析进行分子生物学鉴定。将NDRV分离毒株接种鸡肝癌细胞(LMH)、鸡胚成纤维细胞(CEF)和鸡胚肝细胞(CEL),经绒毛尿囊膜接种11日龄樱桃谷肉鸭胚,经腿部肌肉接种4日龄雏樱桃谷肉鸭进行生物学特性鉴定。通过测定NDRV分离毒株对氯仿和胰蛋白酶的敏感性进行理化特性鉴定。[结果]分离到5株新型鸭呼肠孤病毒(NDRV),分别为RPVA1311、RPVA1312、RPVA1313、RPVA1314和RPVA1315。NDRV分离毒株σC基因序列与新型鸭呼肠孤病毒的核苷酸同源性为94%~98%,与禽呼肠孤病毒(ARV)和番鸭呼肠孤病毒(MDRV)相似性较低,分别为38%~41%和40%~50%; NDRV分离毒株能在LMH、CEF和CEL中增殖并产生细胞融合,形成合胞体的细胞病变,2株番鸭源分离病毒的LMH细胞毒滴度(lg[TCID_(50)]:6.32、6.63)明显高于3株樱桃谷肉鸭源病毒的滴度(lg[TCID_(50)]:5.83、5.68、5.63); NDRV分离毒株能100%致死11日龄樱桃谷肉鸭胚,且2株番鸭源分离病毒的鸭胚组织毒滴度(lg[ELD_(50)]:5.50、5.63)稍高于3株樱桃谷肉鸭源病毒的滴度(lg[ELD_(50)]:5.32、5.17、5.00),主要病变表现为全身性出血; 4日龄雏樱桃谷肉鸭接种NDRV分离毒株后,出现与自然发病鸭相似的病症,发病率为100%,同时能从病死鸭的肝、脾中再次分离到原病毒;病死鸭主要病变为脾脏肿大、坏死,组织病理学观察可见脾脏淋巴细胞数量减少、组织细胞坏死,肝细胞变性、炎性细胞在汇管区周围浸润;理化性质测定结果显示,NDRV分离毒株对氯仿不敏感,对胰蛋白酶具有不同程度的敏感性。[结论]分离的5株病毒是属于呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属的一种新型鸭呼肠孤病毒。 展开更多
关键词 新型呼肠病毒 分离鉴定 σC基因 生物学特性 理化特性
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鸭坦布苏病毒、新型鸭呼肠孤病毒及番鸭呼肠孤病毒多重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立与临床应用 被引量:14
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作者 谢守玉 刘惠心 +7 位作者 尹彦文 施开创 屈素洁 陆文俊 黄小武 廖东安 王露霞 吴双燕 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期952-958,共7页
为建立鉴别检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)、新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)及番鸭呼肠孤病毒(MDRV)的方法,本研究分别针对DTMUV E基因与NDRV、MDRV S3基因,设计特异性引物和Taq Man探针,经优化反应条件,建立了同一体系中同时检测DTMUV、NDRV及MDRV的... 为建立鉴别检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)、新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)及番鸭呼肠孤病毒(MDRV)的方法,本研究分别针对DTMUV E基因与NDRV、MDRV S3基因,设计特异性引物和Taq Man探针,经优化反应条件,建立了同一体系中同时检测DTMUV、NDRV及MDRV的Taq Man荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法仅能扩增DTMUV、NDRV及MDRV,与禽呼肠孤病毒(ARV)、禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、减蛋综合征病毒(EDSV)、鸭瘟病毒(DEV)等主要禽源病毒均无交叉反应,特异性强;对DTMUV、NDRV及MDRV质粒标准品的检测下限均为7.5×10^(1)拷贝/μL,敏感性高;组内与组间重复性试验变异系数均小于2.5%,重复性好。利用该方法与已报道的坦布苏病毒荧光定量RT-PCR方法及NDRV与MDRV双重RTPCR方法同时检测82份临床疑似患病鸭的肝脾组织样品,结果检出阳性样品22份,其中,DTMUV阳性检出率为10.98%(9/82),NDRV阳性检出率为2.44%(2/82),MDRV阳性检出率为13.41%(11/82),检出阴性样品60份。与参考方法的检测结果一致,三者的符合率达100%。本研究建立的方法为临床DTMUV、NDRV及MDRV鉴别检测和流行病学调查提供了特异、敏感、高效的技术支撑。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 新型呼肠病毒 番鸭呼肠病毒 荧光定量RT-PCR 临床应用
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新型鸭呼肠孤病毒在番鸭体内分布和排毒规律 被引量:14
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作者 林锋强 程晓霞 +3 位作者 陈仕龙 王劭 朱小丽 陈少莺 《中国家禽》 北大核心 2018年第3期53-55,共3页
为阐明新型鸭呼肠孤病毒(New-type duck reovirus,NDRV)在体内分布和排毒规律,采用J03C10株攻击1日龄雏鸭,对血液、心、肝、脾、肺、肾、胰腺、脑、胸腺、法氏囊、盲肠扁桃体、喉头和泄殖腔采用RT-PCR检测病毒分布情况。结果显示:NDRV... 为阐明新型鸭呼肠孤病毒(New-type duck reovirus,NDRV)在体内分布和排毒规律,采用J03C10株攻击1日龄雏鸭,对血液、心、肝、脾、肺、肾、胰腺、脑、胸腺、法氏囊、盲肠扁桃体、喉头和泄殖腔采用RT-PCR检测病毒分布情况。结果显示:NDRV在血液中分布时间为攻毒后(PI)12 h^21 d,在脾、胸腺中分布时间为PI 12 h^18 d,在肝、法氏囊中分布时间为PI 12 h^15 d,在胰脏中分布时间为PI 1 d^18 d,在心、肺、肾和盲肠扁桃体中分布时间为PI 1 d^15 d,在脑组织中分布时间为PI 1 d^12 d。攻毒后1 d,即可在喉头和泄殖腔棉拭子中检测到NDRV RNA,而在12 d后已不能检出NDRV RNA。结果表明:番鸭接种NDRV J03C10株后1 d开始向外界排毒,12 d后停止排毒,向外界排毒时间为PI 1 d^9 d。 展开更多
关键词 RT—PCR 新型呼肠病毒 分布 排毒
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新型鸭呼肠孤病毒病研究进展 被引量:14
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作者 袁远华 吴志新 +1 位作者 黄兴国 黄淑坚 《养禽与禽病防治》 2012年第10期18-20,共3页
新型鸭呼肠孤病毒病是我国近年来新出现的,以肝脏不规则坏死、出血斑/点和心肌、腔上囊出血为主要特征的新疫病,俗称"鸭新肝病"、"鸭坏死性肝炎病"等。初步认为其病原为呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属新型鸭呼肠孤病... 新型鸭呼肠孤病毒病是我国近年来新出现的,以肝脏不规则坏死、出血斑/点和心肌、腔上囊出血为主要特征的新疫病,俗称"鸭新肝病"、"鸭坏死性肝炎病"等。初步认为其病原为呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属新型鸭呼肠孤病毒。本文综合了国内近年来对该病的研究成果,从病原学、流行病学、临诊症状、病理变化、鉴别诊断和防制措施等方面对该病进行了较全面的论述,以期对该病的深入研究和防制提供有益的资料。 展开更多
关键词 新型呼肠病毒 病原学 诊断防制
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新型鸭呼肠孤病毒RT-LAMP检测方法的建立 被引量:13
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作者 于可响 马秀丽 +4 位作者 韩宏宇 刘存霞 李玉峰 黄兵 宋敏训 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期71-75,共5页
建立适于基层实验室快速检测新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)的一步反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)方法。基于新型鸭呼肠孤病毒S3基因的6个保守区域设计了4条LAMP引物,利用Bst DNA聚合酶在63℃恒温保持45 min即可完成反转... 建立适于基层实验室快速检测新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)的一步反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)方法。基于新型鸭呼肠孤病毒S3基因的6个保守区域设计了4条LAMP引物,利用Bst DNA聚合酶在63℃恒温保持45 min即可完成反转录和扩增反应,由此建立了RT-LAMP检测方法。该方法具有良好的特异性,除NDRV外对其他6种常见鸭病的检测结果均为阴性。该方法对病毒RNA的最低检出量为0.1 pg,是常规RT-PCR方法的100倍。临床应用结果表明,该方法与病毒分离鉴定方法的符合率为98%,而且对仪器的要求低,适于基层实验室和现场检测。 展开更多
关键词 新型呼肠病毒 S3基因 一步反转录环介导等温扩增
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新型鸭呼肠孤病毒的分离鉴定及其σC基因遗传进化分析 被引量:13
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作者 罗丹 高立 +6 位作者 孟照洁 高玉龙 李凯 祁小乐 刘长军 崔红玉 王笑梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期445-450,共6页
新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)病,是一种以肝脾不规则坏死、出血斑/点和心肌、腔上囊出血为主要特征的新疫病。为研究某养鸭企业不同年份分离的NDRV病株的生物学特性,本研究将2019年从25份樱桃谷鸭脏器组织中分离的3株病毒以及2016年和2017年... 新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)病,是一种以肝脾不规则坏死、出血斑/点和心肌、腔上囊出血为主要特征的新疫病。为研究某养鸭企业不同年份分离的NDRV病株的生物学特性,本研究将2019年从25份樱桃谷鸭脏器组织中分离的3株病毒以及2016年和2017年分离的2株病毒同时进行了生物学特性比较研究。RT-PCR及基因测序结果表明,该5株分离病毒均为NDRV,且纯净性良好。体外复制研究表明,该5株分离病毒均能100%致死鸡胚,且在Vero细胞中增殖良好;除2017年的分离株外,其余4株分离病毒均能在CEF中产生明显的细胞病变。σC基因同源性及遗传进化分析显示,5株NDRV分离株与其它NDRV病毒株之间具有较高的同源性(90.0%~98.2%),而与番鸭呼肠孤病毒(MDRV)同源性较低(29.6%~46.1%),再次证明5株分离病毒均为NDRV,但2017年分离株NDRV-SD19/6202与其余4株病毒的遗传距离稍远。σC基因编码氨基酸序列分析结果显示,以CEF适应病毒为代表的NDRV-SD19/6201株与CEF非适应病毒NDRV-SD19/6202株之间存在13个氨基酸差异位点,但这些差异位点是否是引起两株病毒复制特性差异的关键氨基酸还需要进一步研究。综上,本研究结果表明来源于同一养殖企业不同年份分离的NDRV病毒株之间生物学特性存在一定差异,提示持续开展该病流行病学调查的必要性,同时为了解NDRV的遗传进化特征和基因变异情况提供参考。 展开更多
关键词 新型呼肠病毒 分离鉴定 σC基因 遗传进化
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