纤维素降解菌L-06的筛选、鉴定及其产酶条件的分析 被引量：44

1

作者 刘韫滔 淑霞 +2 位作者 龙传南 龙敏南 胡忠 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期1112-1116,共5页

从用于堆肥的水稻秸秆中初筛出一株高效纤维素降解菌L-06,根据18SrRNA基因序列和菌株形态分析,初步鉴定该菌为斜卧青霉(Penicillium decumbens)。研究了液体发酵培养基中氮源、碳源、表面活性剂、培养温度、起始pH以及接种量对该菌株各... 从用于堆肥的水稻秸秆中初筛出一株高效纤维素降解菌L-06,根据18SrRNA基因序列和菌株形态分析,初步鉴定该菌为斜卧青霉(Penicillium decumbens)。研究了液体发酵培养基中氮源、碳源、表面活性剂、培养温度、起始pH以及接种量对该菌株各纤维素酶活力的影响。在最适条件下,该菌的β-葡萄糖苷酶(BGL)、外切纤维素酶(CBH)于培养第3天酶活力分别达到1662u/mL和2770u/mL;内切纤维素酶(EG)、滤纸糖化力(FPase)于培养第4天酶活力分别达到18064u/mL和4035u/mL。在产酶优化实验中,该菌的EG和CBH在pH10的培养条件下分别保持了70%和43%的酶活性;在50oC培养条件下EG和CBH分别保持了68%和59%的酶活性。表现出了耐热,耐碱的特性。 展开更多

关键词 纤维素酶 斜卧青霉 培养条件优化

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木质纤维素降解酶系的基础和技术研究进展 被引量：22

2

作者 曲音波 《山东大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期160-170,共11页

山东大学微生物学科从事纤维素降解研究已有50多年的历史。在木质纤维素微生物降解机理研究的基础上,从自然界中筛选到一株能高效降解植物纤维类生物质的斜卧青霉菌株,并获得该菌的多株抗降解物阻遏纤维素酶高产突变菌株。最近,已完成... 山东大学微生物学科从事纤维素降解研究已有50多年的历史。在木质纤维素微生物降解机理研究的基础上,从自然界中筛选到一株能高效降解植物纤维类生物质的斜卧青霉菌株,并获得该菌的多株抗降解物阻遏纤维素酶高产突变菌株。最近,已完成了对多株斜卧青霉菌株的全基因组测序,正在利用系统生物学技术深入探讨其酶系组成和酶合成调控机理。选育出的高产突变株,已用于规模化生产工业用酶,并开发出玉米芯生物炼制生产纤维素乙醇技术。 展开更多

关键词 纤维素酶系 斜卧青霉 纤维素乙醇 生物炼制

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固态发酵的参数周期变化及对微生物发酵的影响 被引量：9

3

作者 李宏强 陈洪章 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期440-445,共6页

研究了压力脉动固态发酵反应器内环境参数的周期性变化以及这些周期性的环境刺激对于固态培养的斜卧青霉发酵的影响。研究结果显示:在这种反应器中,在空气压力脉动的带动下,反应器内的温度和空气湿度也会发生较大幅度的周期性变化,变化... 研究了压力脉动固态发酵反应器内环境参数的周期性变化以及这些周期性的环境刺激对于固态培养的斜卧青霉发酵的影响。研究结果显示:在这种反应器中,在空气压力脉动的带动下,反应器内的温度和空气湿度也会发生较大幅度的周期性变化,变化的周期和空气压力脉动的周期相同,变化的幅度随着压力脉动的幅度增大而增加;在外界周期刺激的条件下,较未加外界周期刺激斜卧青霉的生物量增加了10 4 % ,二氧化碳的产生总量增加了2 2 9%和纤维素酶的产量增加了32 0 % ,数据显示外界周期刺激不仅增加了菌体的生物量同时增加了其代谢活性。 展开更多

关键词 微生物发酵 周期变化 固态发酵反应器 周期性变化 压力脉动 斜卧青霉 内环境参数 固态培养 环境刺激 研究结果 空气湿度 纤维素酶 二氧化碳 代谢活性 数据显示 生物量 大幅度 外界

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响应面法优化斜卧青霉Ju-A_(10)产CMCase的条件 被引量：8

4

作者 董锡文 杜春梅 +1 位作者 林建强 曲音波 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期31-35,共5页

通过响应面分析法对Ju-A10利用不同植物纤维废弃物为碳源生产CMCase条件进行优化,结果显示碳源分别为谷秸、麦秸和造纸废渣,碳源水平分别在9．77％、8．69％、9．97％,300mL三角瓶装液量分别为64．7 mL、54．2 mL、40．8 mL时,CMCase为... 通过响应面分析法对Ju-A10利用不同植物纤维废弃物为碳源生产CMCase条件进行优化,结果显示碳源分别为谷秸、麦秸和造纸废渣,碳源水平分别在9．77％、8．69％、9．97％,300mL三角瓶装液量分别为64．7 mL、54．2 mL、40．8 mL时,CMCase为最高,分别为29．26 IU／mL、29．14 IU／mL、29．81 IU／mL。R2分别达到了0．9117、0．9246、0．8655,说明发酵预测模型可靠性较高,可应用于培养条件的优化。 展开更多

关键词 响应面分析法 斜卧青霉 优化 CMCASE

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一株纤维素酶酶学特性的研究 被引量：9

5

作者 刘宗林 彭义交 胡阿伟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第3期32-35,共4页

通过对纤维素酶在两种不同底物中的酶解和糖化情况分别进行研究,确定该酶酶活力最高时的温度和pH(最适温度和最适pH),同时对酒精在纤维素降解过程中所产生的阻遏作用进行了初步的探讨。

关键词 纤维素酶 酶学特性 纤维素 斜卧青霉 底物 酶活力 糖化

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斜卧青霉原生质体制备和再生的研究 被引量：9

6

作者 赵晨 易宗春 +1 位作者 荣龙 孙艳 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第1期18-21,共4页

研究了斜卧青霉原生质体制备和再生的条件,确定了培养方式、菌龄、渗透压稳定剂、酶的配比、酶解时间等因素对原生质体制备和再生的影响。最佳条件:菌丝体培养12h,用1%溶壁酶+1%纤维素酶+1%蜗牛酶的混合酶液酶解,将NaCl作为渗透压稳定剂... 研究了斜卧青霉原生质体制备和再生的条件,确定了培养方式、菌龄、渗透压稳定剂、酶的配比、酶解时间等因素对原生质体制备和再生的影响。最佳条件:菌丝体培养12h,用1%溶壁酶+1%纤维素酶+1%蜗牛酶的混合酶液酶解,将NaCl作为渗透压稳定剂,酶解时间为1.5h。在此条件下原生质体的形成量达到5.3×105个/mL,再生率为19.4%。 展开更多

关键词 斜卧青霉 原生质体制备 原生质体再生

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斜卧青霉纤维素酶和木聚糖酶高产菌株的选育 被引量：6

7

作者 刘新育 靖梅贞 +2 位作者 宋安东 刘亮伟 陈红歌 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第3期59-62,共4页

以纤维素酶高产菌株斜卧青霉A50为出发菌株,通过紫外诱变原生质体获得1株木聚糖酶活力提高80%而纤维素酶活力没有改变的6号菌。蛋白质电泳和酶谱检测结果显示,纤维素酶谱基本无差别,而木聚糖酶谱显示6号菌比A50多了一条带。6号菌优化后... 以纤维素酶高产菌株斜卧青霉A50为出发菌株,通过紫外诱变原生质体获得1株木聚糖酶活力提高80%而纤维素酶活力没有改变的6号菌。蛋白质电泳和酶谱检测结果显示,纤维素酶谱基本无差别,而木聚糖酶谱显示6号菌比A50多了一条带。6号菌优化后的产酶培养基组成为：麸皮7%、葡萄糖0.1%,该条件下,纤维素酶活为19.7IU/mL,木聚糖酶活力为215.4IU/mL。 展开更多

关键词 斜卧青霉 纤维素酶 木聚糖酶 诱变

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一株产纤维素酶真菌的筛选、鉴定及降解效果 被引量：6

8

作者 李保深 高大文 张博 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期134-137,共4页

从东北地区自然环境中采集不同区域腐殖质样品,筛选分离得到1株产纤维素酶的真菌C5,经形态学、生理生化特征试验,结合18S rDNA基因序列分析及扫描电镜分析鉴定该菌为斜卧青霉(Penicillium decum-bens),对其产酶能力及其对秸秆降解效果... 从东北地区自然环境中采集不同区域腐殖质样品,筛选分离得到1株产纤维素酶的真菌C5,经形态学、生理生化特征试验,结合18S rDNA基因序列分析及扫描电镜分析鉴定该菌为斜卧青霉(Penicillium decum-bens),对其产酶能力及其对秸秆降解效果的研究结果表明:真菌C5具有较全的纤维素酶系和较高的纤维素酶活力,对秸秆纤维素具有很好的降解效果。该菌株在以玉米秸秆为唯一碳源,28℃、120 r/min的条件下发酵培养至第3天时,滤纸酶活最高为7.085 IU/mL,内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶及β-葡萄糖苷酶最高值分别为3.856、2.681、1.487 IU/mL。 展开更多

关键词 筛选分离 斜卧青霉 18S RDNA 纤维素酶 扫描电镜

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应用响应面法优化去氢表雄酮1α-羟基化的转化培养基 被引量：5

9

作者 刘佩卉 刘新利 +1 位作者 鞠培殿 张海涛 《食品与药品》 CAS 2010年第7期256-261,共6页

目的优化斜卧青霉Penicillium decumbens ph-13转化去氢表雄酮(DHEA)为1α-羟基去氢表雄酮(1α-OH-DHEA)的转化培养基。方法在单因素实验的基础上,采用响应面分析法优化斜卧青霉ph-13转化DHEA的转化培养基,找出主要影响因素,经回归分析... 目的优化斜卧青霉Penicillium decumbens ph-13转化去氢表雄酮(DHEA)为1α-羟基去氢表雄酮(1α-OH-DHEA)的转化培养基。方法在单因素实验的基础上,采用响应面分析法优化斜卧青霉ph-13转化DHEA的转化培养基,找出主要影响因素,经回归分析建立1α-OH-DHEA的转化率对培养基主要成分的二次回归模型。结果其回归方程的决定系数达到98.39%,得到的最佳培养基主要组成为:蔗糖4.75%、硝酸钠3.69%、硫酸镁0.31%、硫酸亚铁0.002%、硫酸锰0.001%。结论优化后的培养基中目标产物1α-OH-DHEA转化率达到18.83%。 展开更多

关键词 斜卧青霉 去氢表雄酮 1α-羟基去氢表雄酮 培养基优化 响应面法

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斜卧青霉去泛素化蛋白酶CREB的缺失提高纤维素酶的生产 被引量：5

10

作者 周广麒 吕晶 +8 位作者 李忠海 李晶晶 王明钰 曲音波 肖林 覃树林 赵海涛 夏蕊蕊 方诩 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期959-972,共14页

斜卧青霉Penicillium decumbens T.是1种重要的产纤维素酶丝状真菌,能有效地降解利用木质纤维素生产第2代生物燃料。为了提高斜卧青霉纤维素酶的产量,构建了去泛素化酶基因creB的敲除盒,并通过同源双交换重组的方法,获得了creB基因缺失... 斜卧青霉Penicillium decumbens T.是1种重要的产纤维素酶丝状真菌,能有效地降解利用木质纤维素生产第2代生物燃料。为了提高斜卧青霉纤维素酶的产量,构建了去泛素化酶基因creB的敲除盒,并通过同源双交换重组的方法,获得了creB基因缺失突变株ΔcreB。该突变株呈现明显的纤维素酶表达分泌抗葡萄糖代谢阻遏效应,ΔcreB菌株的滤纸酶活、内切纤维素酶活、木聚糖酶活以及外切纤维素酶活分别提高1.8倍、1.71倍、2.06倍以及2.04倍,其胞外蛋白质含量提高了2.68倍。确定了creB基因缺失突变株具有抗碳源代谢物阻遏的生理现象,CREB对斜卧青霉生产纤维素酶的能力具有显著影响,为系统改造丝状真菌高产纤维素酶菌株提供了理论指导。 展开更多

关键词 斜卧青霉 去泛素化 CREB 纤维素酶

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斜卧青霉114-2 cbh1基因的TAIL-PCR克隆及与抗阻遏突变株JU-A10的比较 被引量：5

11

作者 刘自勇 孙宪昀 曲音波 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期667-671,共5页

【目的】研究斜卧青霉(Penicillium decumbens)114-2与其抗阻遏突变株JU-A10外切酶基因序列的差异。【方法】用热不对称交错PCR(TAIL-PCR)和RT-PCR扩增得到斜卧青霉114-2外切葡聚糖酶Ⅰ(cbh1)基因全长和cDNA全长。【结果】cbh1基因全长... 【目的】研究斜卧青霉(Penicillium decumbens)114-2与其抗阻遏突变株JU-A10外切酶基因序列的差异。【方法】用热不对称交错PCR(TAIL-PCR)和RT-PCR扩增得到斜卧青霉114-2外切葡聚糖酶Ⅰ(cbh1)基因全长和cDNA全长。【结果】cbh1基因全长为1500bp,含有两个内含子,编码453个氨基酸(GenBank,EF397602)。克隆并分析了1.9kb的cbh1基因上游序列,分别发现了葡萄糖代谢抑制因子CREⅠ与纤维素酶转录调控蛋白ACEΙ的两个的潜在结合位点。【结论】在相同的培养条件下,其抗阻遏突变株JU-A10的外切酶活明显高于野生株114-2。两菌株的cbh1基因序列完全一致,说明外切酶活明显提高不是由于cbh1基因发生突变引起的。 展开更多

关键词 斜卧青霉 TAIL-PCR cbh1 抗阻遏突变株

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斜卧青霉P6木素过氧化物酶的褐煤降解活性及cDNA克隆 被引量：4

12

作者 杨金水 袁红莉 陈文新 《北京大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第6期833-839,共7页

对纯化得到的斜卧青霉P6分泌的木素过氧化物酶的褐煤降解活性进行了研究,发现纯酶的褐煤降解活性依赖于H2O2的激活。降解后产物中小分子黄腐酸含量显著提高,褐煤及降解产物的经验分子式分别为C100H86·5O36·5N2·09和C100H... 对纯化得到的斜卧青霉P6分泌的木素过氧化物酶的褐煤降解活性进行了研究,发现纯酶的褐煤降解活性依赖于H2O2的激活。降解后产物中小分子黄腐酸含量显著提高,褐煤及降解产物的经验分子式分别为C100H86·5O36·5N2·09和C100H103·9O48·6N11·4,降解产物比原褐煤具有更高的H、O、N含量,而C含量明显下降。并且降解产物可提高豌豆种子的发芽率并明显缩短发芽时间。根据N末端氨基酸序列设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增得到一条约2000bp的cDNA片段,序列测定的大小为1956bp,通过序列比对,与已报道的Piloderma croceum菌的mnp2基因具有45%的同源性,具有过氧化氢酶的保守氨基酸残基。 展开更多

关键词 褐煤 斜卧青霉 木素过氧化物酶 克隆

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丝状真菌斜卧青霉JUA-10具有启动子功能的DNA片段的克隆与表达 被引量：3

13

作者 汪天虹 汪浩 王一彬 《山东轻工业学院学报（自然科学版）》 CAS 2002年第1期61-65,共5页

　将斜卧青霉JUA - 10染色体DNA的BamHI或PstI片段连接到大肠杆菌的启动子探针型载体pSUPV4上 ,克隆了 7个不同大小的具有启动子功能的DNA片段。卡那霉素抗性试验表明 ,含重组质粒的大肠杆菌均能耐受 10 0 μg/ml以上的卡那霉素 ,最高可... 　将斜卧青霉JUA - 10染色体DNA的BamHI或PstI片段连接到大肠杆菌的启动子探针型载体pSUPV4上 ,克隆了 7个不同大小的具有启动子功能的DNA片段。卡那霉素抗性试验表明 ,含重组质粒的大肠杆菌均能耐受 10 0 μg/ml以上的卡那霉素 ,最高可达 110 0 μg/ml。说明斜卧青霉的某些DNA片段能在大肠杆菌中有效地启动基因表达。取抗性水平最高的 pPdsuI进一步进行限制酶谱分析 ,表明插入片段的分子量为 2 .4Kb。 展开更多

关键词 斜卧青霉 启动子功能 DNA片段 启动子探针型载体 丝状真菌 克隆 基因表达 分子生物学

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斜卧青霉β-半乳糖苷酶产酶条件的优化 被引量：1

14

作者 黎丽 王瑞明 +1 位作者 李丕武 任良栋 《粮油食品科技》 北大核心 2013年第6期95-99,共5页

研究斜卧青霉(Penicillium decumbens)产β-半乳糖苷酶的发酵条件。在单因素实验的基础上,设计正交试验,依据极差分析确定最优产酶条件。结果表明:最佳产酶条件下(乳糖70 g/L,蛋白胨10 g/L,酵母粉10 g/L,K2HPO42.5 g/L,发酵温度30℃,发... 研究斜卧青霉(Penicillium decumbens)产β-半乳糖苷酶的发酵条件。在单因素实验的基础上,设计正交试验,依据极差分析确定最优产酶条件。结果表明:最佳产酶条件下(乳糖70 g/L,蛋白胨10 g/L,酵母粉10 g/L,K2HPO42.5 g/L,发酵温度30℃,发酵初始pH 6.0,接种量106个/mL,装液量50 mL/250 mL,于180 r/min摇瓶培养32 h),菌体产生的β-半乳糖苷酶酶活可达153.27 U/g,是优化前的5倍。在此发酵条件下,通过高效液相色谱分析发酵液中的低聚半乳糖产量为30.2 g/L。 展开更多

关键词 斜卧青霉 Β-半乳糖苷酶 低聚半乳糖 条件优化

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斜卧青霉转录调控蛋白Hac1染色质免疫共沉淀分析方法的建立 被引量：1

15

作者 房艳华 韦小敏 +2 位作者 李肖 来航线 马小娟 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2018年第3期148-154,共7页

【目的】对斜卧青霉转录调控因子Hac1进行染色质免疫共沉淀(CHIP)试验,为其调控机制及生物学功能研究奠定基础。【方法】以斜卧青霉为材料,DTT诱导转录调控因子Hac1表达,用交联Buffer处理菌丝,使Hac1与靶基因交联,超声破碎染色质后,进... 【目的】对斜卧青霉转录调控因子Hac1进行染色质免疫共沉淀(CHIP)试验,为其调控机制及生物学功能研究奠定基础。【方法】以斜卧青霉为材料,DTT诱导转录调控因子Hac1表达,用交联Buffer处理菌丝,使Hac1与靶基因交联,超声破碎染色质后,进行解交联染色体检验,研究不同交联时间(5,10,20,30,40min)、不同菌丝用量(10mL CHIP缓冲液中分别添加0.25,0.50,1.00,1.50g菌丝)及不同超声功率(15,20,25,30 W)、超声时间(1,3,5s)、超声间隔时间(10,20,30,40s)、超声次数(15,25,30,40次)对试验效果的影响。在优化的条件下对菌丝进行处理,获得合格的DNA片段,进行CHIP试验,采用随机PCR方法检测染色质免疫共沉淀效果。【结果】适用于斜卧青霉Hac1的最佳染色质免疫共沉淀试验的条件为:交联时间控制在20min以内;最佳菌丝用量为10mL CHIP缓冲液中加入1g菌丝;25 W超声功率,工作时间5s,间隔时间40s,超声30次。在优化的条件下富集DNA片段,进行随机PCR,结果在500~750bp间可见明显的扩增条带。【结论】优化了斜卧青霉转录调控因子Hac1CHIP条件,成功进行了CHIP试验。 展开更多

关键词 斜卧青霉 染色质免疫共沉淀 交联 菌悬液浓度 超声条件

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斜卧青霉转录调控因子BglR的缺失对纤维素酶生产的影响 被引量：1

16

作者 周广麒 李晶晶 +4 位作者 李忠海 吕晶 王明钰 曲音波 方诩 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1379-1387,共9页

【目的】斜卧青霉(Penicillium decumbens)作为高效分泌纤维素酶的重要丝状真菌,其纤维素酶的合成与分泌在转录水平上被调控。进一步研究纤维素酶基因表达的转录调控,构建高效高产纤维素酶的工业菌株。【方法】根据斜卧青霉114-2在不同... 【目的】斜卧青霉(Penicillium decumbens)作为高效分泌纤维素酶的重要丝状真菌,其纤维素酶的合成与分泌在转录水平上被调控。进一步研究纤维素酶基因表达的转录调控,构建高效高产纤维素酶的工业菌株。【方法】根据斜卧青霉114-2在不同碳源生长条件下基因组表达谱的差异,发现新的转录调控因子BglR(PDE-01706),该蛋白与产黄青霉(Penicillium chrysogenum)Pc20g04780的锌指结构蛋白具有59%同源性。通过基因同源双交换,得到BglR缺失突变株ΔbglR-1,对突变株ΔbglR-1的表型、营养生长、产纤维素酶活、蛋白分泌能力及发酵液pH变化进行研究。【结果】转录调控因子BglR的缺失可导致突变株ΔbglR-1的β-葡萄糖苷酶活力提高40%,并造成其滤纸酶活、内切葡聚糖酶及木聚糖酶活明显降低。【结论】结果表明转录调控因子BglR对于斜卧青霉纤维素酶的调控有重要作用。 展开更多

关键词 斜卧青霉 BglR 转录调控因子 纤维素酶 Β-葡萄糖苷酶

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斜卧青霉Ju-A_(10)产CMCase培养条件的优化

17

作者 董锡文 杜春梅 +1 位作者 林建强 曲音波 《工业微生物》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期20-22,共3页

通过响应面分析法对Ju-A10利用不同植物纤维废弃物为碳源生产CMCase条件进行优化,结果显示碳源分别为玉米秸粉和高粱秸粉,碳源水平分别在8.00%1、0.05%,300 mL三角瓶装液量分别为55.25 mL、49.65 mL时,CMCase为最高,分别为29.43 IU/mL、... 通过响应面分析法对Ju-A10利用不同植物纤维废弃物为碳源生产CMCase条件进行优化,结果显示碳源分别为玉米秸粉和高粱秸粉,碳源水平分别在8.00%1、0.05%,300 mL三角瓶装液量分别为55.25 mL、49.65 mL时,CMCase为最高,分别为29.43 IU/mL、37.57IU/mL。R2分别达到了0.9099、0.8592,说明发酵预测模型可靠性较高,可应用于培养条件的优化。 展开更多

关键词 响应面分析法 斜卧青霉 优化 CMCASE

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斜卧青霉转录调控蛋白Hac1过表达菌株的构建

18

作者 马小娟 韦小敏 +2 位作者 来航线 房艳华 胡轶伦 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2016年第8期205-212,共8页

【目的】以增强型绿色荧光蛋白为报告基因,构建斜卧青霉转录调控蛋白Hac1激活形式基因（Hac1^i）随机插入过表达菌株和非激活形式基因（Hac1u）原位插入过表达菌株,并初步观察Hac1基因的2种不同编码蛋白在菌丝内部的运动情况,为进一步... 【目的】以增强型绿色荧光蛋白为报告基因,构建斜卧青霉转录调控蛋白Hac1激活形式基因（Hac1^i）随机插入过表达菌株和非激活形式基因（Hac1u）原位插入过表达菌株,并初步观察Hac1基因的2种不同编码蛋白在菌丝内部的运动情况,为进一步研究转录调控蛋白Hac1的功能奠定基础。【方法】分别克隆ptrA筛选标记、gpdA启动子、Hac1^i编码区、eGFP编码区及终止子,利用融合PCR融合克隆片段,构建Hac1^i随机插入表达盒;再分别克隆Hac1上游臂及编码区、eGFP编码区及终止子、ptrA筛选标记、Hac1下游臂序列,融合克隆片段,构建Hac1u原位插入表达盒。将2种表达盒分别转化斜卧青霉原生质体,通过吡啶硫胺素筛选标记、PCR扩增等检测获得阳性转化子,荧光显微镜观察融合蛋白的表达及运动情况。【结果】成功构建了Hac1^i基因随机插入表达盒和Hac1u基因原位插入表达盒,利用原生质体转化将2种表达盒转入宿主斜卧青霉菌株,经PCR初步验证,得到了阳性转化子。阳性转化子在麸皮培养基上培养2-4d后,可在菌丝内部清晰观察到强烈的绿色荧光信号,表明融合蛋白在菌丝体内得到了正确表达。【结论】成功构建了Hac1^i基因随机插入和Hac1u基因原位插入菌株。 展开更多

关键词 斜卧青霉 荧光蛋白 转录调控蛋白Hac1

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γ射线对斜卧青霉的诱变筛选及产酶条件优化 被引量：8

19

作者 宋安东 苏丽娟 +2 位作者 谢慧 曲音波 杨铭 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期280-285,共6页

以斜卧青霉(Penicillium decumbens)A10为出发菌株,经450 Gy60Coγ射线诱变处理,选育出1株纤维素酶高产菌株A50,对其产纤维素酶的液态发酵条件进行研究优化,确定了所试因素的最佳组合,即主碳源浓度为5%,其中麸皮与玉米秸秆比例为1∶1,... 以斜卧青霉(Penicillium decumbens)A10为出发菌株,经450 Gy60Coγ射线诱变处理,选育出1株纤维素酶高产菌株A50,对其产纤维素酶的液态发酵条件进行研究优化,确定了所试因素的最佳组合,即主碳源浓度为5%,其中麸皮与玉米秸秆比例为1∶1,辅加碳源为0.1%的葡萄糖,辅加氮源为0.2%的磷酸氢二铵,Tween-80添加量为0.1%,培养基初始pH为5.0,300ml三角瓶的装液量为30ml、接种量10%、培养温度为32℃、摇床转速200r/min。发酵至60h时,纤维素酶活和滤纸酶活均达到最高,分别为27.28和1.98IU/ml,较出发菌株A10分别提高了33.2%和45.59%。 展开更多

关键词 ^60 Co Γ射线辐照 斜卧青霉A10 诱变 发酵 纤维素酶

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斜卧青霉L-06内切葡聚糖酶Ⅰ基因的克隆与表达 被引量：2

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作者 刘韫滔 韩学凤 +3 位作者 罗泽宇 邱玉峰 龙敏南 胡忠 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期696-701,共6页

【目的】克隆斜卧青霉L-06的内切葡聚糖酶Ⅰ基因(egI),并实现其在大肠杆菌内的高效表达。【方法】利用RT-PCR技术克隆了斜卧青霉L-06的内切葡聚糖酶Ⅰ基因(egI),并将egI基因克隆到原核表达载体中,构建了重组质粒pET32a-egI。【结果】转... 【目的】克隆斜卧青霉L-06的内切葡聚糖酶Ⅰ基因(egI),并实现其在大肠杆菌内的高效表达。【方法】利用RT-PCR技术克隆了斜卧青霉L-06的内切葡聚糖酶Ⅰ基因(egI),并将egI基因克隆到原核表达载体中,构建了重组质粒pET32a-egI。【结果】转化至大肠埃希菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE检测结果表明:重组表达产物的相对分子质量约为80 kD,与预期相符。重组表达的菌悬液,经破碎离心,取其上清液,进行纤维素酶活性染色,获得了活性条带。DNS法测得内切酶活力为2.56 IU/mL。【结论】构建了斜卧青霉L-06内切葡聚糖酶Ⅰ的原核表达系统。 展开更多

关键词 斜卧青霉L-06 内切葡聚糖酶Ⅰ 克隆 原核表达

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