酒精对骨髓基质细胞成脂与成骨分化的影响 被引量：26

1

作者 李杰 李月白 +3 位作者 王义生 殷力 许建中 熊腾滨 《中华骨科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第8期493-495,共3页

目的观察酒精对小鼠骨髓基质细胞中脂肪细胞特异性基因422(aP2)和Ⅰ型胶原基因表达的影响。方法采用原代骨髓基质细胞体外培养技术,取小鼠双侧股骨骨髓细胞,通过细胞贴壁、分离,获取骨髓基质细胞。以0.09mol/L的酒精浓度作为诱导剂处理... 目的观察酒精对小鼠骨髓基质细胞中脂肪细胞特异性基因422(aP2)和Ⅰ型胶原基因表达的影响。方法采用原代骨髓基质细胞体外培养技术,取小鼠双侧股骨骨髓细胞,通过细胞贴壁、分离,获取骨髓基质细胞。以0.09mol/L的酒精浓度作为诱导剂处理细胞。采用完整细胞斑点印迹分子杂交方法检测实验组和对照组细胞中422(aP2)mRNA和Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果对实验组和对照组的422(aP2)mRNA的完整细胞斑点印迹扫描值进行比较,实验组中422(aP2)基因杂交信号明显增强,斑点印迹扫描值为7207.8±331.3,对照组斑点印迹扫描值为652.2±62.6,实验组为对照组的11倍,两组比较差异有非常显著性意义(P<0.001)。对实验组和对照组Ⅰ型胶原mRNA的完整细胞斑点印迹扫描值进行比较,实验组基因杂交信号较对照组明显减弱,斑点印迹扫描值为3 567.3±300.9,对照组斑点印迹扫描值为7487.0±488.4,为实验组的2倍,两组比较差异有非常显著性意义(P<0.001)。结论酒精能诱导骨髓基质细胞向脂肪细胞分化,而减少骨髓基质细胞向成骨细胞分化。这可能与酒精性骨坏死的发生机制有关。 展开更多

关键词 斑点印迹 对照组 骨髓基质细胞 Ⅰ型胶原 实验 酒精 成骨分化 RNA 分子杂交 杂交信号

原文传递

致肾盂肾炎大肠杆菌132特异性基因的筛选 被引量：5

2

作者 张玉梅 陈锦英 +1 位作者 高英堂 刘欣 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期428-431,共4页

目的 通过抑制性消减杂交（suppression subtractive hybridization，SSH）技术，比较致肾盂肾炎大肠杆菌132（UPEC132）与非致病性E．coliK-12MG1655之间基因组的差异，筛选UPEC132特有的基因片段。方法 应用SSH技术构建UPEC132（teste... 目的 通过抑制性消减杂交（suppression subtractive hybridization，SSH）技术，比较致肾盂肾炎大肠杆菌132（UPEC132）与非致病性E．coliK-12MG1655之间基因组的差异，筛选UPEC132特有的基因片段。方法 应用SSH技术构建UPEC132（tester）与非致病性E．coliK-12MG1655（driver）菌株差异DNA消减文库，经PCR和斑点印迹法筛选鉴定阳性克隆，并进行测序及生物信息学分析。结果获得约1600个重组菌的UPEC132消减文库，随机挑取其中的300个克隆，有37个含有UPEC132特异的DNA序列。特异性片段测序后进行生物信息学分析，发现与其相关的37个基因为UPEC132所特有，其中1个为新发现的DNA片段，9个为与致病相关基因，7个为与代谢和物质转运相关基因，2个为与外膜蛋白相关基因，3个为与调节相关基因，10个为未知功能蛋白的基因，其他5个为功能未分类的基因。结论 SSH技术是筛选病原菌特异基因的有效方法，已确定了37个UPEC132的特异基因，为进一步阐明其致病分子机制打下了基础。 展开更多

关键词 致肾盂肾炎大肠杆菌 抑制性消减杂交技术(SSH) 特异基因 斑点印迹

原文传递

斑点免疫印迹法快速测定地龙炮制品中蚓激酶及其水解产物 被引量：5

3

作者 王厚伟 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1652-1655,共4页

目的测定参环毛蚓、秉氏环毛蚓、日本杜拉蚓和天锡杜拉蚓炮制品中蚓激酶及其水解产物,建立斑点免疫印迹法评价相应生药材药效成分明确的中药炮制品质量新方法。方法以兔抗蚓激酶单抗为一抗,应用斑点免疫印迹法对地龙炮制品中蚓激酶及其... 目的测定参环毛蚓、秉氏环毛蚓、日本杜拉蚓和天锡杜拉蚓炮制品中蚓激酶及其水解产物,建立斑点免疫印迹法评价相应生药材药效成分明确的中药炮制品质量新方法。方法以兔抗蚓激酶单抗为一抗,应用斑点免疫印迹法对地龙炮制品中蚓激酶及其水解产物作定性检测,杂交信号应用Quantity One软件作定量分析。结果现行中药材参环毛蚓与山东产地方品种:秉氏环毛蚓、日本杜拉蚓、天锡杜拉蚓炮制品中蚓激酶及其水解产物的质量分数分别为125.23、118.34、81.05、72.13μg/g。结论秉氏环毛蚓炮制品中蚓激酶及其水解产物与现行地龙炮制品参环毛蚓无显著差异,理论上可作为广地龙的替代品。斑点免疫印迹法简便快捷,结果准确,无需大型设备,可用于地龙与类似中药材炮制品的品质评价。 展开更多

关键词 地龙 斑点印迹 蚓激酶

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斑点免疫印迹法快速测定水蛭炮制品中水蛭素水解产物含量 被引量：4

4

作者 王厚伟 田景振 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第19期2193-2195,共3页

目的:测定4批次水蛭炮制品水蛭素水解产物含量,建立斑点免疫印迹法评价相应生药材药效成分明确的中药炮制品质量新方法。方法:以鼠抗水蛭素单抗为一抗,应用斑点免疫印迹法对水蛭炮制品中水蛭素水解产物作定性检测,杂交信号应用Quantity ... 目的:测定4批次水蛭炮制品水蛭素水解产物含量,建立斑点免疫印迹法评价相应生药材药效成分明确的中药炮制品质量新方法。方法:以鼠抗水蛭素单抗为一抗,应用斑点免疫印迹法对水蛭炮制品中水蛭素水解产物作定性检测,杂交信号应用Quantity one软件作定量分析。结果:4批次水蛭炮制品所含水蛭素水解产物的质量分数分别为296.51,165.47,95.58,298.05μg.g-1。结论:不同批次水蛭炮制品之间水蛭素水解产物含量差异显著,斑点免疫印迹法简便快捷,结果准确,无需大型设备,可用于水蛭与类似中药材炮制品的品质评价。 展开更多

关键词 水蛭 斑点印迹 水蛭素

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一种快速筛选巴氏毕赤酵母高表达克隆的新方法 被引量：3

5

作者 谢琪璇 肖銮娟 +3 位作者 潘善培 余巍 彭雅林 张春雪 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 2004年第6期713-716,共4页

　目的:为了准确、快捷地筛选到高表达的毕赤酵母工程菌株。方法:利用毕赤酵母的生理特点和免疫印迹的特异性,将转化子接种到MM板上至形成克隆,贴上NC膜,待NC膜被分泌产物湿润后,揭下NC膜,进行ELISA-dot鉴定,选出高表达克隆进行扩增、培... 　目的:为了准确、快捷地筛选到高表达的毕赤酵母工程菌株。方法:利用毕赤酵母的生理特点和免疫印迹的特异性,将转化子接种到MM板上至形成克隆,贴上NC膜,待NC膜被分泌产物湿润后,揭下NC膜,进行ELISA-dot鉴定,选出高表达克隆进行扩增、培养,并作SDS-PAGE和Westernblotting进一步确定。结果:该法的筛选结果与SDS-PAGE和Westernblotting相符。结论:与传统方法相比,该法具有高通量,快速,简便的优点,适合毕赤酵母工程菌株的筛选。 展开更多

关键词 毕赤酵母 克隆技术 菌株筛选 斑点印迹

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人幽门螺杆菌外膜蛋白18000DNA疫苗的构建及表达 被引量：2

6

作者 姜政 余剑平 +2 位作者 王新渝 黄爱龙 王丕龙 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期134-138,共5页

目的 :构建含人幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,H .pylori) 180 0 0外膜蛋白编码基因的真核重组载体 ,并在COS-7细胞中表达 ,为核酸疫苗的开发奠定基础。方法 :从原核表达质粒pET32a(+) 5 2 8中 ,酶切H .pylori180 0 0外膜蛋白编码基... 目的 :构建含人幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,H .pylori) 180 0 0外膜蛋白编码基因的真核重组载体 ,并在COS-7细胞中表达 ,为核酸疫苗的开发奠定基础。方法 :从原核表达质粒pET32a(+) 5 2 8中 ,酶切H .pylori180 0 0外膜蛋白编码基因片段 ,将目的基因与同样进行酶切、纯化的载体pcDNA3 1进行连接 ,而后转化并筛选含有目的基因的重组载体pcDNA3.1/5 2 8,并在COS-7细胞中表达 ,以RT-PCR ,Western法检测其表达产物。结果 :经单、双酶切证实插入的基因片段为H .pylori 180 0 0外膜蛋白编码基因 ;采用RT PCR方法 ,能够从转染的COS-7细胞中扩增出一条与目的基因大小一致的DNA片段 ,Western法等检测显示 ,该重组质粒能够在COS-7细胞中表达目的蛋白 ,而且具有生物活性。结论 :成功地构建了核酸疫苗pcDNA3 1 5 2 8,并在COS-7细胞中表达 ,为H . 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 外膜蛋白 斑点印迹 真核表达载体

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RNA点印迹探测碱性成纤维细胞生长因子在激光损伤后视网膜中的表达 被引量：3

7

作者 陈少军 阴正勤 《重庆医学》 CAS CSCD 2002年第12期1173-1174,共2页

目的　观察激光损伤家兔视网膜后碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)表达时相的变化 ,探讨bFGF在视网膜激光损伤后修复过程中的地位和作用。方法　用不同剂量的YAG倍频激光 (5 32nm)致伤有色家兔视网膜 ,于伤... 目的　观察激光损伤家兔视网膜后碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)表达时相的变化 ,探讨bFGF在视网膜激光损伤后修复过程中的地位和作用。方法　用不同剂量的YAG倍频激光 (5 32nm)致伤有色家兔视网膜 ,于伤后 1、3、7、14d取眼底视网膜 脉络膜组织 ,提取细胞总RNA进行RNA斑点印迹 ,用地高辛标记的bFGFcDNA探针进行核酸杂交 ,检测bFGFmRNA的表达水平。结果　激光损伤后眼底组织中bFGFmRNA的表达水平明显提高 ,且随激光致伤量的加大 ,bFGFmRNA的表达水平亦呈进行性增加。结论　激光损伤后眼底组织中bFGFmRNA的表达明显增加 。 展开更多

关键词 激光损伤 碱性成纤维细胞生长因子 斑点印迹 视网膜 BFGF

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免疫组织化学与完整细胞原位蛋白质斑点印迹联合应用的探讨 被引量：2

8

作者 郑乃刚 吴景兰 +2 位作者 陈奎生 丁一 王一菱 《河南医科大学学报》 1997年第3期118-119,共2页

免疫组织化学与完整细胞原位蛋白质斑点印迹联合应用的探讨郑乃刚１）吴景兰２）陈奎生２）丁一２）王一菱２）１）河南省临床检验中心郑州４５００５２２）河南医科大学分子细胞生物学研究中心郑州４５００５２关键词斑点印迹；免疫组... 免疫组织化学与完整细胞原位蛋白质斑点印迹联合应用的探讨郑乃刚１）吴景兰２）陈奎生２）丁一２）王一菱２）１）河南省临床检验中心郑州４５００５２２）河南医科大学分子细胞生物学研究中心郑州４５００５２关键词斑点印迹；免疫组织化学；技术与方法玻片上细胞标本的... 展开更多

关键词 斑点印迹 免疫组织化学 完整细胞原位 蛋白质

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α-乳白蛋白单克隆抗体的制备及斑点印迹定性检测方法的建立 被引量：2

9

作者 龙彩云 郑义成 +2 位作者 程芬芬 杨安树 陈红兵 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期185-188,共4页

以α-乳白蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗α-乳白蛋白单克隆抗体;采用碳二亚胺法,并通过工艺优化,将单抗与量子点高效偶联;在此基础上,建立了基于斑点印迹技术定性检测乳制品中过敏原α-乳白蛋白的方法。结果表... 以α-乳白蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗α-乳白蛋白单克隆抗体;采用碳二亚胺法,并通过工艺优化,将单抗与量子点高效偶联;在此基础上,建立了基于斑点印迹技术定性检测乳制品中过敏原α-乳白蛋白的方法。结果表明:采用杂交瘤技术制备的单克隆抗体特异性好,与牛奶中其他蛋白无交叉反应;当量子点、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基丁二酰亚胺(NHS)、单抗摩尔比为1∶10∶6∶4时,量子点与单抗有较好的偶联效果;以量子点标记单抗建立的斑点印迹方法可直观、快速的定性分析乳制品中过敏原α-乳白蛋白。因此,该方法具有一定的实用价值。 展开更多

关键词 Α-乳白蛋白 单克隆抗体 量子点 斑点印迹 定性检测

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cAMP类似物对人恶性胶质瘤TJ_(899)细胞EGFR基因表达的影响 被引量：1

10

作者 雷冬梅 王锦华 +2 位作者 陈奎生 王雪岩 尹先印 《河南实用神经疾病杂志》 2002年第3期7-8,共2页

目的 :探讨cAMP类似物 8-Br-AMP对人恶性胶质瘤TJ899细胞EGFR基因表达的影响。方法 :体外分组培养TJ899细胞 ,采用斑点印迹技术对观察实验组与对照组TJ899细胞EGFR基因表达情况。结果 :加 8-Br -cAMP处理的实验组较不加 8-Br-cAMP处理... 目的 :探讨cAMP类似物 8-Br-AMP对人恶性胶质瘤TJ899细胞EGFR基因表达的影响。方法 :体外分组培养TJ899细胞 ,采用斑点印迹技术对观察实验组与对照组TJ899细胞EGFR基因表达情况。结果 :加 8-Br -cAMP处理的实验组较不加 8-Br-cAMP处理的对照组TJ899细胞EGFR基因表达降低。结论 :8-Br-cAMP可下调TJ899细胞EGFR基因表达。 展开更多

关键词 基因表达 斑点印迹 cAMP类似物 恶性胶质瘤 TJ899细胞 EGFR基因 影响

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组织蛋白酶B在胃癌组织中mRNA的变化 被引量：1

11

作者 刘颐 施尧 +2 位作者 王利民 任卫平 萧树东 《上海第二医科大学学报》 CSCD 1998年第3期210-212,共3页

运用地高辛自由引物法标记1020bp CB cDNA 探针行斑点印迹杂交,检测胃癌手术标本中CBmRNA 含量。结果表明:胃癌组织中 CBmRNA 含量非常显著地高于非癌组织(P<0.01。提示 CB 在胃癌组织中的表达增高可能与胃癌的进展有关。

关键词 胃肿瘤 MRNA 组织蛋白酶B 斑点印迹

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8-Br-cAMP和^(60)Co照射诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及相关基因表达的研究 被引量：1

12

作者 宫璀璀 吴景兰 王红梅 《解放军医学高等专科学校学报》 1999年第3期1-3,共3页

应用８ Ｂｒｃ Ａ Ｍ Ｐ 和６０ Ｃｏ 照射体外诱导 Ｈｅｌａ 细胞凋亡。探讨ｂｘ Ｌ２ ，ｗ ｐ５３ ，ｍ ｐ５３ ，ｃｍ ｙｃｉ Ｎｏｓ 的基因表达和ｉ Ｎｏｓ ， Ｆａｓ 蛋白表达之间的关系，为探讨无毒性８ Ｂｒｃ Ａ ... 应用８ Ｂｒｃ Ａ Ｍ Ｐ 和６０ Ｃｏ 照射体外诱导 Ｈｅｌａ 细胞凋亡。探讨ｂｘ Ｌ２ ，ｗ ｐ５３ ，ｍ ｐ５３ ，ｃｍ ｙｃｉ Ｎｏｓ 的基因表达和ｉ Ｎｏｓ ， Ｆａｓ 蛋白表达之间的关系，为探讨无毒性８ Ｂｒｃ Ａ Ｍ Ｐ 对宫颈癌治疗的新途径提供依据。采用 Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ 法和 Ｆｅｕｌｇｅｎ 法进行细胞凋亡实验；采用本实验室创新的完整细胞原位 Ｒ Ｎ Ａ 斑点印迹技术检测 Ｆａｓ 和ｉ Ｎｏｓ蛋白，应用高速薄层色谱扫描仪对斑点印迹信号进行定量测定。结果８ Ｂｒｃ Ａ Ｍ Ｐ 和６０ Ｃｏ 照射均可上调 Ｈｅｌａ ｗｐ５３ ，ｉ Ｎｏｓ 的基因表达；下调ｍ ｐ５３ ，ｂｃｌ２ ，ｃｍｙｃ 的基因表达。可增强ｉ Ｎｏｓ 蛋白质的酶活性，降低 Ｆａｓ 蛋白质的免疫反应性。显示出８ Ｂｒｃ Ａ Ｍ Ｐ 可能代替放疗作为一种治疗宫颈癌的新途径。 展开更多

关键词 细胞凋亡 原位杂交 斑点印迹 宫颈癌

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8-Br-cAMP诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡的实验研究

13

作者 宫璀璀 吴景兰 +2 位作者 邓新国 王红梅 赖泽仁 《中国肿瘤临床与康复》 2001年第5期18-20,共3页

目的　探讨以 8 Br cAMP体外诱导Hela细胞凋亡中 ,相关基因及蛋白质表达与凋亡之间的关系 ,为使用无毒性 8 Br cAMP治疗宫颈癌提供依据。方法　采用TUNEL法检测凋亡细胞 ,采用原位杂交和完整细胞原位斑点印迹技术检测凋亡相关基因及蛋... 目的　探讨以 8 Br cAMP体外诱导Hela细胞凋亡中 ,相关基因及蛋白质表达与凋亡之间的关系 ,为使用无毒性 8 Br cAMP治疗宫颈癌提供依据。方法　采用TUNEL法检测凋亡细胞 ,采用原位杂交和完整细胞原位斑点印迹技术检测凋亡相关基因及蛋白质的表达。结果　 8 Br cAMP试验组细胞凋亡率为 ( 40 .0± 1.32 ) % ,对照组 ( 5 .2± 0 .74) % ;8 Br cAMP可上调wp5 3,iNOS基因表达 ,下调mp5 3,bcl 2 ,c myc基因表达 ,可增强iNOS和FasL的酶活性 ,降低Fas免疫反应性。以上各结果 ,试验组与对照组相比P <0 .0 1。结论　 8 Br cAMP能诱导Hela细胞凋亡 ,可作为一种治疗宫颈癌的新途径。 展开更多

关键词 凋亡 原位杂交 斑点印迹 HELA细胞 8-BR-CAMP 宫颈癌

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DIFA检测非放射性斑点印迹技术的探讨 被引量：1

14

作者 郑乃刚 丁一 +3 位作者 吴景兰 苏安英 丰艳 王一菱 《河南医科大学学报》 1996年第1期13-15,共3页

为提高分子生物学的实验效率和节省昂贵的试剂，将核酸分子或蛋白质分子预先结合于硝酸纤维素膜（ＮＣＭ）上，应用自制的ＤＩＦＡ装置检测非放射性斑点印迹。结果表明：此技术可快速检测生物活性试剂的效价及工作浓度；选择研究样本及... 为提高分子生物学的实验效率和节省昂贵的试剂，将核酸分子或蛋白质分子预先结合于硝酸纤维素膜（ＮＣＭ）上，应用自制的ＤＩＦＡ装置检测非放射性斑点印迹。结果表明：此技术可快速检测生物活性试剂的效价及工作浓度；选择研究样本及试验条件；鉴定探针灵敏度等。 展开更多

关键词 斑点印迹 非放射性 印迹技术 DIFA 分子生物学

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热休克处理对巨噬细胞HSP70,HLA—DR表达的影响

15

作者 马玉红 吴景兰 《中国实验临床免疫学杂志》 1999年第5期56-58,共3页

目的：观察热休克处理对小鼠腹腔巨噬细胞ＧＳＰ６９、ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达的影响，以探讨高温对机体细胞免疫反应的作用机制。方法：将小鼠分为热休克实验组和对照组。采用完整细胞斑点印迹技术对滴膜进行免疫组化斑点印迹检测，以５... 目的：观察热休克处理对小鼠腹腔巨噬细胞ＧＳＰ６９、ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达的影响，以探讨高温对机体细胞免疫反应的作用机制。方法：将小鼠分为热休克实验组和对照组。采用完整细胞斑点印迹技术对滴膜进行免疫组化斑点印迹检测，以５６０ｎｍ波长扫描的光密度值表示斑点印迹信号的强弱。结果：实验组ＨＳＰ７０表达为７０４．１１±５８４．２５，对照组ＨＳＰ７０表达为１７５．８７±１００．７，实验组与对照组比具有显著差异（ 展开更多

关键词 热休克 巨噬细胞 斑点印迹 HSP70 HLA-DR

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8-Cl-cAMP对人食管癌细胞EGFR表达的影响

16

作者 陈奎生 王锦华 +1 位作者 雷冬梅 张云汉 《河南大学学报（医学科学版）》 CAS 2002年第1期4-5,共2页

目的 :探讨 8-Cl-cAMP对人食管癌细胞生长相关基因EGFR表达的影响。方法 :原代分组培养食管癌细胞后 ,采用完整细胞原位RNA斑点印迹技术对滴膜进行斑点印迹。结果 :经 8-Cl -cAMP处理的实验组EGFR的阳性信号较不加 8-Cl-cAMP处理的对照... 目的 :探讨 8-Cl-cAMP对人食管癌细胞生长相关基因EGFR表达的影响。方法 :原代分组培养食管癌细胞后 ,采用完整细胞原位RNA斑点印迹技术对滴膜进行斑点印迹。结果 :经 8-Cl -cAMP处理的实验组EGFR的阳性信号较不加 8-Cl-cAMP处理的对照组EGFR的阳性信号弱 (P <0 .0 5 )。结论 :8-Cl-cAMP可下调与食管癌细胞生长相关的EGFR基因表达。 展开更多

关键词 食管癌 8-Cl-cAMP EGFR 斑点印迹 基因表达 细胞信号传递系统

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幽门螺杆菌Mr26000外膜蛋白真核载体的构建及表达蛋白的鉴定

17

作者 姜政 汪志群 +2 位作者 王新渝 黄爱龙 王丕龙 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第7期596-600,共5页

目的　构建含人幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,H pylori) 2 6 0 0 0外膜蛋白编码基因的真核重组载体 ,并在COS- 7细胞中表达 ,为核酸疫苗的开发奠定基础。方法　从原核表达质粒 pET32a(+) / 5 94中 ,酶切H pylori 2 6 0 0 0外膜蛋白... 目的　构建含人幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,H pylori) 2 6 0 0 0外膜蛋白编码基因的真核重组载体 ,并在COS- 7细胞中表达 ,为核酸疫苗的开发奠定基础。方法　从原核表达质粒 pET32a(+) / 5 94中 ,酶切H pylori 2 6 0 0 0外膜蛋白编码基因片段 ,将目的基因与同样进行酶切、纯化的载体pcDNA3 1进行连接 ,而后转化并筛选含有目的基因的重组载体pcDNA3 1/ 5 94 ,并在COS - 7细胞中表达 ,以RT -PCR ,Dotblot法检测其表达产物。 结果　经酶切证实插入的基因片段为H pylori 2 6 0 0 0外膜蛋白编码基因 ;采用RT -PCR方法 ,能够从转染COS - 7细胞中扩增出一条与目的基因大小一致的DNA片段 ;同时Dotblot法等检测显示 ,该重组质粒能够在COS - 7细胞中表达目的蛋白。结论　成功地构建了真核重组载体 pcDNA3 1/ 5 94 ,并在COS - 7细胞中表达 ,为H pylori核酸疫苗的研制奠定了良好的基础。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 外膜蛋白 斑点印迹 真核表达载体

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斑点免疫印迹法快速测定4品种家蚕蛾下颚溶茧酶含量

18

作者 王厚伟 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1619-1621,共3页

目的:测定4品种家蚕蛾下颚溶茧酶含量,并建立斑点免疫印迹法在中药材药效成分含量的测定方法。方法:以兔抗溶茧酶多抗为一抗,应用斑点免疫印迹法对4品种家蚕蛾下颚溶茧酶含量作定性检测,杂交信号应用Quantity one软件作定量分析。结果:... 目的:测定4品种家蚕蛾下颚溶茧酶含量,并建立斑点免疫印迹法在中药材药效成分含量的测定方法。方法:以兔抗溶茧酶多抗为一抗,应用斑点免疫印迹法对4品种家蚕蛾下颚溶茧酶含量作定性检测,杂交信号应用Quantity one软件作定量分析。结果:4品种家蚕蛾下颚的个体溶茧酶平均含量分别为6.41、8.09、7.62、1.88μg/头。结论:不同品种家蚕蛾间下颚溶茧酶含量差异显著。斑点免疫印迹法简便快捷,结果准确,无需大型设备,可用于类似中药材药效物质的含量测定与品质评价。 展开更多

关键词 家蚕蛾 溶茧酶 斑点印迹

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8-Br-cAMP对Eca-109细胞凋亡的影响

19

作者 王红梅 郑乃刚 +2 位作者 吴景兰 王一菱 宫璀璀 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2004年第2期232-235,共4页

目的:探讨8-Br-cAMP对人食管癌Eca-109细胞凋亡的影响及其相关基因表达的变化。方法:采用TUNEL法检测细胞凋亡,应用原位杂交、组织化学、免疫组织化学以及RNA和蛋白质斑点印迹技术相对定量,观察8-Br-cAMP对Eca-109细胞凋亡相关基因及凋... 目的:探讨8-Br-cAMP对人食管癌Eca-109细胞凋亡的影响及其相关基因表达的变化。方法:采用TUNEL法检测细胞凋亡,应用原位杂交、组织化学、免疫组织化学以及RNA和蛋白质斑点印迹技术相对定量,观察8-Br-cAMP对Eca-109细胞凋亡相关基因及凋亡效应分子表达的影响。结果:8-Br-cAMP作用48 h后可显著诱导Eca-109细胞凋亡,并见到野生型(wt)p53及iNOS基因表达上调,bcl-2、c-myc基因表达下调,iNOS活性增强,Fas-IR减弱。结论:8-Br-cAMP通过调控凋亡相关基因及凋亡效应分子的表达,使之相互作用、相互协同,诱导人食管癌Eca-109细胞的凋亡。其中,wtp53在该凋亡的诸多因素中起着关键作用。 展开更多

关键词 细胞凋亡 8—Br—cAMP Eca—109细胞系 原位杂交 斑点印迹

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侵染厦门百合的百合无症病毒的鉴定及其分子检测

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作者 明艳林 李燕 +1 位作者 郑国华 张文珠 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第S1期153-155,共3页

百合无症病毒(Lily symptomless carlavirus, LSV)属于香石竹潜隐病毒组(Carlavirus),是单链正义RNA病毒。基因组全长为8 394 bp,共有6 个开放阅读框(Open reading fragment,ORF),分别编码RNA依赖的RNA复制酶,三基因连锁结构, 外壳蛋白... 百合无症病毒(Lily symptomless carlavirus, LSV)属于香石竹潜隐病毒组(Carlavirus),是单链正义RNA病毒。基因组全长为8 394 bp,共有6 个开放阅读框(Open reading fragment,ORF),分别编码RNA依赖的RNA复制酶,三基因连锁结构, 外壳蛋白和16 kD核酸结合蛋白。主要侵染百合属、郁金香属植物,通常在百合上不产生明显症状,与黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus, CMV)复合侵染时,导致叶片出现坏死斑。LSV 是危害百合的重要病毒,在世界各地都有分布。近年来国内陆续有该病毒病的报道,其发病率一般在40％-50％,二代种球的带毒率在90％以上, 严重制约了我国百合鲜切花的产量和质量,目前LSV已成为各口岸进出口百合种球的主要检疫对象。 展开更多

关键词 百合 花叶 LSV 核酸序列 补阴药 百合无症病毒 分离物 侵染 引物 病毒粒子 病毒体 寄主范围 PCR 地高辛标记 RNA 稀释度 探针浓度 硝酸纤维素膜 斑点杂交 斑点印迹 厦门 福建

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