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基于毒力因子FimH探讨尿感方抗尿道致病性大肠杆菌的作用机制
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作者 朱盼盼 蒋健 +4 位作者 陈君灏 乔昀 元唯安 梁群梅 贺敏 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期217-222,共6页
目的观察尿感方对尿道致病性大肠杆菌(UPEC)毒力因子FimH的作用和UPEC侵袭力的影响,并探讨其作用机制。方法UPEC分别经含空白尿液、尿感方含药尿液的培养基和空白培养基预处理后,观察UPEC毒力因子FimH表达的情况,并通过UPEC感染细胞模型... 目的观察尿感方对尿道致病性大肠杆菌(UPEC)毒力因子FimH的作用和UPEC侵袭力的影响,并探讨其作用机制。方法UPEC分别经含空白尿液、尿感方含药尿液的培养基和空白培养基预处理后,观察UPEC毒力因子FimH表达的情况,并通过UPEC感染细胞模型,评价其侵袭力,同时采用Western blot、ELISA、RT-qPCR法检测整合素α3(integrinα3)、integrinβ1、p-FAK、p-Src、p-PI3K、p-αPAK蛋白表达,Rc1、Cdc42活性和三磷酸肌醇(IP3)水平,integrinα3、integrinβ1和细胞骨架蛋白[纽蛋白(vinculin)、踝蛋白(talin)、桩蛋白(paxillin)、F-肌动蛋白(F-actin)、α-辅助肌动蛋白(α-actinin)]mRNA表达。结果大鼠空白尿液和健康人空白尿液对UPEC FimH mRNA表达和UPEC入侵率无明显影响(P>0.05),对integrinα3、integrinβ1 mRNA和蛋白表达,p-FAK、p-Src、p-PI3K、p-αPAK蛋白表达,Rc1、Cdc42活性,IP3水平,细胞骨架蛋白mRNA表达均无明显影响(P>0.05)。大鼠含药尿液和健康人含药尿液降低了FimH mRNA表达,UPEC入侵率,integrinα3、integrinβ1 mRNA和蛋白表达,p-FAK、p-Src、p-PI3K、p-αPAK蛋白表达,Rc1、Cdc42活性,IP3水平,细胞骨架蛋白mRNA表达(P<0.05,P<0.01)。结论尿感方能影响UPEC FimH表达,减弱UPEC侵袭力,其作用机制与FimH/integrinα3、β1/FAK信号传导通路有关。 展开更多
关键词 尿感方 尿道致病性大肠杆菌 FimH 整合素α3(integrinα3) 整合素β1(integrinβ1) 粘附斑激酶(FAK) 细胞骨架蛋白
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结核杆菌侵染破骨细胞对骨质破坏相关因子表达影响的体外研究
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作者 常龙 常跃良 +2 位作者 费乐 顾占贵 王自立 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1023-1031,共9页
目的:建立结核杆菌侵染破骨细胞(osteoclasts,OC)模型,探讨结核杆菌侵染OC后对骨质破坏相关因子表达的影响。方法:采集健康志愿者的外周全血,分离出外周全血中的单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),利用核因子κB受体... 目的:建立结核杆菌侵染破骨细胞(osteoclasts,OC)模型,探讨结核杆菌侵染OC后对骨质破坏相关因子表达的影响。方法:采集健康志愿者的外周全血,分离出外周全血中的单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),利用核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)以及巨噬细胞集落刺激因子(macrophage-colony stimulating factor,M-CSF)诱导使其成为OC,对细胞进行抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)染色。将已经构建好的具有卡那霉素(Kana)抗性的H37Rv pMV261-GFP绿色荧光结核菌株进行复苏并加入10%的油酸、白蛋白、葡萄糖和过氧化氢酶添加剂(oleic albumin dextrose catalase,OADC)、7H9以及含卡那霉素的结核杆菌专用液体培养基进行培养,放置于37℃的恒温箱中培养至光密度(optical density,OD)值为600nm时的0.5左右备用;以单纯OC培养为空白对照组;用结核杆菌以不同转染复数(multiplicity of infection,MOI)侵染OC 24h,采用MTT比色法检测细胞存活率最高的MOI为后续实验MOI,使用H37Rv以此MOI侵染OC为实验组;荧光显微镜及结核杆菌抗酸染色分别观测实验MOI时结核杆菌转染情况。实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测非受体酪氨酸激酶(C-src)、蛋白激酶K(cathepsin K,CK)、碳酸酐酶2(carbonic anhydrase 2,CA2)、整合素-β3(integrin-β3)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达情况;免疫组化(immunohistochemistry)检测磷酸化酪氨酸激酶产物(P-src)、CK、CA2、Integrin-β3、MMP-9的细胞表面蛋白表达情况;蛋白免疫印迹(western blot,WB)检测P-src、CK、CA2、Integrin-β3、MMP-9的蛋白表达水平。结果:TRAP染色显示细胞培养15d后90%以上为OC,可以用于进行实验。荧光结核杆菌成功将其OD值培养为600nm时的0.5。MTT比色法结果显示:在MOI为20∶1时细胞存活率最高(P<0.05),此为实验组MOI;结核� 展开更多
关键词 结核杆菌 破骨细胞 非受体酪氨酸激酶(C-src) 基质金属蛋白酶-9(MMP-9) 蛋白激酶K(CK) 碳酸酐酶2(CA2) 整合素-β3(integrin-β3)
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