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两种蜘蛛多肽毒素的电喷雾电离质谱法序列分析
被引量：
2
1
作者
范春明
王贤纯
梁宋平
《质谱学报》
EI
CAS
CSCD
2005年第2期65-70,共6页
虎纹捕鸟蛛毒素-(HWTX-)和敬钊缨毛蛛毒素-(JZTX-)是两种蜘蛛多肽类神经毒素。它们的大部分氨基酸序列已由Edman降解法测出,但仍有部分序列由于某些原因未能确定。为了鉴定未知部分的序列,利用电喷雾电离-四极杆-飞行时间质谱(ESI-Qq-TO...
虎纹捕鸟蛛毒素-(HWTX-)和敬钊缨毛蛛毒素-(JZTX-)是两种蜘蛛多肽类神经毒素。它们的大部分氨基酸序列已由Edman降解法测出,但仍有部分序列由于某些原因未能确定。为了鉴定未知部分的序列,利用电喷雾电离-四极杆-飞行时间质谱(ESI-Qq-TOF-MS)对两种蜘蛛毒素的酶解产物进行分析,获得其酶解片段的一级(MS)和二级(MS/MS)图谱,在用软件和手工的方式对含有未知序列的肽段进行解析后,得到未知部分确切氨基酸序列。研究表明:利用质谱的从头测序(denovosequencing)方法获得HWTX-和JZTX-完整的氨基酸序列。该方法在蛋白质和多肽的结构分析和鉴定与传统方法相比具有高灵敏度和快速的优势,是对传统Edman化学降解法的一个很好的补充。
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关键词
多肽
毒素
电喷雾电离-四极杆-飞行时间质谱(ESI—Qq—TOF—MS)
虎纹捕鸟
蛛
毒素
-Ⅵ
敬
钊
缨毛
蛛
毒素
-
ⅷ
从头测序
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职称材料
敬钊缨毛蛛毒素-Ⅷ的分离纯化与鉴定
2
作者
胡喆
王美迟
梁宋平
《生命科学研究》
CAS
CSCD
2005年第3期212-217,共6页
从敬钊缨毛蛛(Chilobrachys jingzhao)粗毒中,通过阳离子交换色谱和反相高效液相色谱分离得到一种新的多肽神经毒素,命名为敬钊缨毛蛛毒素-Ⅷ(jingzhaotoxin-Ⅷ,JZTX-Ⅷ).经MALDI-TOF分析表明该多肽分子质量为4329.37D a,结合氨基酸序...
从敬钊缨毛蛛(Chilobrachys jingzhao)粗毒中,通过阳离子交换色谱和反相高效液相色谱分离得到一种新的多肽神经毒素,命名为敬钊缨毛蛛毒素-Ⅷ(jingzhaotoxin-Ⅷ,JZTX-Ⅷ).经MALDI-TOF分析表明该多肽分子质量为4329.37D a,结合氨基酸序列分析和RACE的cDNA快速扩增法得到了敬钊缨毛蛛毒素-Ⅷ的氨基酸序列和全长cDNA,序列为LFECSFSCDIKKNGKPCKGSGEKKCSGGWRCKMNFCVKVC-OOH,其中6个半胱氨酸形成3对二硫键.敬钊缨毛蛛毒素-Ⅷ能阻断小鼠膈神经-膈肌标本的神经肌肉接头传递,经初步膜片钳实验分析,表明该多肽是一种钙离子通道抑制剂.
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关键词
多肽神经
毒素
敬
钊
缨毛
蛛
毒素
-
ⅷ
敬
钊
缨毛
蛛
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职称材料
Lys4突变对敬钊缨毛蛛毒素-V钠通道活性的影响
被引量：
1
3
作者
曾雄智
邓梅春
+3 位作者
彭莹
魏文廷
王贤纯
梁宋平
《生命科学研究》
CAS
CSCD
2008年第1期20-23,共4页
敬钊缨毛蛛毒素-V(jingzhaotoxin-V,JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂,为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代JZTX-V第4位赖...
敬钊缨毛蛛毒素-V(jingzhaotoxin-V,JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂,为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代JZTX-V第4位赖氨酸残基的突变体K4A-JZTX-V,合成线性多肽经反相高效液相色谱分离纯化后进行谷胱甘肽氧化复性.复性产物分别用MALDI-TOF/TOF质谱进行相对分子质量的鉴定,用膜片钳电生理方法进行电压门控钠通道抑制活性分析.研究结果表明,Lys4被Ala取代后,K4A-JZTX-V对大鼠背根神经节细胞膜上表达的河豚毒素敏感型(TTX-S)钠通道的抑制活性与天然JZTX-V基本相当,提示Lys4与JZTX-V对TTX-S钠通道的抑制活性关系不大;而K4A-JZTX-V对河豚毒素不敏感型(TTX-R)钠通道的抑制活性却比天然JZTX-V下降了约8.3倍,说明Lys4是JZTX-V与河豚毒素不敏感型钠通道抑制活性相关的氨基酸残基.
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关键词
敬
钊
缨毛
蛛
毒素
-V
固相多肽合成
突变体
氧化复性
膜片钳
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职称材料
Arg20突变对敬钊缨毛蛛毒素-V钠通道活性的影响
被引量：
1
4
作者
曾雄智
邓梅春
+3 位作者
皮建辉
全妙华
王贤纯
梁宋平
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第7期1228-1232,共5页
敬钊缨毛蛛毒素-V(Jingzhaotoxin-V,JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂,为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代JZTX-V第20位...
敬钊缨毛蛛毒素-V(Jingzhaotoxin-V,JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂,为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代JZTX-V第20位精氨酸残基的突变体R20A-JZTX-V,合成线性多肽经反相高效液相色谱分离纯化后进行谷胱甘肽氧化复性。复性产物分别用基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)进行分子量的鉴定,用膜片钳电生理方法进行电压门控钠通道抑制活性分析。研究结果表明,Arg20被Ala取代后,R20A-JZTX-V对大鼠背根神经节细胞(DRG)膜上表达的河豚毒素敏感型(TTX-S)钠通道的抑制活性与天然JZTX-V相当,提示Arg20与JZTX-V对TTX-S钠通道的抑制活性无关或关系不大;而R20A-JZTX-V对TTX-R钠通道的抑制活性却比天然JZTX-V下降了约18.3倍,说明Arg20是与JZTX-V对河豚毒素不敏感型(TTX-R)钠通道抑制活性相关的关键活性残基之一,推测R20A-JZTX-V活性降低的原因是用Ala替代Arg20后改变了JZTX-V与TTX-R型钠通道的作用位点。
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关键词
敬
钊
缨毛
蛛
毒素
-V固相多肽合成
突变体
氧化复性
膜片钳
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职称材料
敬钊毒素-V突变体K12A-JZTX-V的化学合成与氧化还原复性
5
作者
曾雄智
全妙华
+1 位作者
皮建辉
梁宋平
《怀化学院学报》
2008年第5期41-43,共3页
敬钊毒素-V(Jingzhaotoxin-V,JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂,由29个氨基酸残基组成,含有三对二硫键.为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了...
敬钊毒素-V(Jingzhaotoxin-V,JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂,由29个氨基酸残基组成,含有三对二硫键.为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代JZTX-V第12位赖氨酸残基的突变体K12A-JZTX-V,合成粗品经反相高效液相色谱分离纯化和MALDI-TOF质谱鉴定,证明化学合成是成功的.线性多肽经谷胱甘肽氧化复性后,复性产物经质谱测定其相对分子量为3549.63,比线性分子的理论分子质量低6,说明六个半胱氨酸已经配对形成了三对二硫键.
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关键词
敬
钊
缨毛
蛛
毒素
-V
固相多肽合成
突变体
氧化复性
质谱
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职称材料
题名
两种蜘蛛多肽毒素的电喷雾电离质谱法序列分析
被引量：
2
1
作者
范春明
王贤纯
梁宋平
机构
湖南师范大学生命科学学院
出处
《质谱学报》
EI
CAS
CSCD
2005年第2期65-70,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目 (30 1 70 1 93)
湖南省自然科学基金资助项目 (0 1 JJY2 0 2 8
文摘
虎纹捕鸟蛛毒素-(HWTX-)和敬钊缨毛蛛毒素-(JZTX-)是两种蜘蛛多肽类神经毒素。它们的大部分氨基酸序列已由Edman降解法测出,但仍有部分序列由于某些原因未能确定。为了鉴定未知部分的序列,利用电喷雾电离-四极杆-飞行时间质谱(ESI-Qq-TOF-MS)对两种蜘蛛毒素的酶解产物进行分析,获得其酶解片段的一级(MS)和二级(MS/MS)图谱,在用软件和手工的方式对含有未知序列的肽段进行解析后,得到未知部分确切氨基酸序列。研究表明:利用质谱的从头测序(denovosequencing)方法获得HWTX-和JZTX-完整的氨基酸序列。该方法在蛋白质和多肽的结构分析和鉴定与传统方法相比具有高灵敏度和快速的优势,是对传统Edman化学降解法的一个很好的补充。
关键词
多肽
毒素
电喷雾电离-四极杆-飞行时间质谱(ESI—Qq—TOF—MS)
虎纹捕鸟
蛛
毒素
-Ⅵ
敬
钊
缨毛
蛛
毒素
-
ⅷ
从头测序
Keywords
peptide toxin
electrospray ionization-Qq-time-of-flight mass spectrometry
Jingzhaotoxin-
ⅷ
Huwentoxin-Ⅵ
de novo sequencing
分类号
O657.63 [理学—分析化学]
Q969.544.66 [理学—化学]
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职称材料
题名
敬钊缨毛蛛毒素-Ⅷ的分离纯化与鉴定
2
作者
胡喆
王美迟
梁宋平
机构
湖南师范大学生命科学学院蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室
出处
《生命科学研究》
CAS
CSCD
2005年第3期212-217,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(30170193)
文摘
从敬钊缨毛蛛(Chilobrachys jingzhao)粗毒中,通过阳离子交换色谱和反相高效液相色谱分离得到一种新的多肽神经毒素,命名为敬钊缨毛蛛毒素-Ⅷ(jingzhaotoxin-Ⅷ,JZTX-Ⅷ).经MALDI-TOF分析表明该多肽分子质量为4329.37D a,结合氨基酸序列分析和RACE的cDNA快速扩增法得到了敬钊缨毛蛛毒素-Ⅷ的氨基酸序列和全长cDNA,序列为LFECSFSCDIKKNGKPCKGSGEKKCSGGWRCKMNFCVKVC-OOH,其中6个半胱氨酸形成3对二硫键.敬钊缨毛蛛毒素-Ⅷ能阻断小鼠膈神经-膈肌标本的神经肌肉接头传递,经初步膜片钳实验分析,表明该多肽是一种钙离子通道抑制剂.
关键词
多肽神经
毒素
敬
钊
缨毛
蛛
毒素
-
ⅷ
敬
钊
缨毛
蛛
Keywords
neurotoxic peptide
JZTX-
ⅷ
Chilobrachys jingzhao
分类号
Q51 [生物学—生物化学]
下载PDF
职称材料
题名
Lys4突变对敬钊缨毛蛛毒素-V钠通道活性的影响
被引量：
1
3
作者
曾雄智
邓梅春
彭莹
魏文廷
王贤纯
梁宋平
机构
湖南师范大学蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室
出处
《生命科学研究》
CAS
CSCD
2008年第1期20-23,共4页
基金
国家自然科学基金重点项目(30430170)
面上项目(30670640
+4 种基金
30500146)
国家973项目(2006CB708508)
863项目(2006AA02Z141)
湖南省自然科学基金资助项目(07JJ3072
06C503)
文摘
敬钊缨毛蛛毒素-V(jingzhaotoxin-V,JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂,为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代JZTX-V第4位赖氨酸残基的突变体K4A-JZTX-V,合成线性多肽经反相高效液相色谱分离纯化后进行谷胱甘肽氧化复性.复性产物分别用MALDI-TOF/TOF质谱进行相对分子质量的鉴定,用膜片钳电生理方法进行电压门控钠通道抑制活性分析.研究结果表明,Lys4被Ala取代后,K4A-JZTX-V对大鼠背根神经节细胞膜上表达的河豚毒素敏感型(TTX-S)钠通道的抑制活性与天然JZTX-V基本相当,提示Lys4与JZTX-V对TTX-S钠通道的抑制活性关系不大;而K4A-JZTX-V对河豚毒素不敏感型(TTX-R)钠通道的抑制活性却比天然JZTX-V下降了约8.3倍,说明Lys4是JZTX-V与河豚毒素不敏感型钠通道抑制活性相关的氨基酸残基.
关键词
敬
钊
缨毛
蛛
毒素
-V
固相多肽合成
突变体
氧化复性
膜片钳
Keywords
JZTX-V
solid-phase synthesis
mutant
oxidative refolding
patch-clamp
分类号
Q25 [生物学—细胞生物学]
Q343
下载PDF
职称材料
题名
Arg20突变对敬钊缨毛蛛毒素-V钠通道活性的影响
被引量：
1
4
作者
曾雄智
邓梅春
皮建辉
全妙华
王贤纯
梁宋平
机构
湖南师范大学蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室
怀化学院生物工程系
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第7期1228-1232,共5页
基金
国家973项目(No.2006CB708508)与863项目(No.2006AA02Z141)
国家自然科学基金重点项目与面上项目(Nos.30430170,30670640,30500146)
+1 种基金
湖南省自然科学基金项目(No.07JJ3072)
湖南省教育厅资助科研项目(No.06C503)~~
文摘
敬钊缨毛蛛毒素-V(Jingzhaotoxin-V,JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂,为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代JZTX-V第20位精氨酸残基的突变体R20A-JZTX-V,合成线性多肽经反相高效液相色谱分离纯化后进行谷胱甘肽氧化复性。复性产物分别用基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)进行分子量的鉴定,用膜片钳电生理方法进行电压门控钠通道抑制活性分析。研究结果表明,Arg20被Ala取代后,R20A-JZTX-V对大鼠背根神经节细胞(DRG)膜上表达的河豚毒素敏感型(TTX-S)钠通道的抑制活性与天然JZTX-V相当,提示Arg20与JZTX-V对TTX-S钠通道的抑制活性无关或关系不大;而R20A-JZTX-V对TTX-R钠通道的抑制活性却比天然JZTX-V下降了约18.3倍,说明Arg20是与JZTX-V对河豚毒素不敏感型(TTX-R)钠通道抑制活性相关的关键活性残基之一,推测R20A-JZTX-V活性降低的原因是用Ala替代Arg20后改变了JZTX-V与TTX-R型钠通道的作用位点。
关键词
敬
钊
缨毛
蛛
毒素
-V固相多肽合成
突变体
氧化复性
膜片钳
Keywords
JZTX-V, solid-phase synthesis, mutant, oxidative refolding, patch-clamp
分类号
Q51 [生物学—生物化学]
TQ453.01 [化学工程—农药化工]
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职称材料
题名
敬钊毒素-V突变体K12A-JZTX-V的化学合成与氧化还原复性
5
作者
曾雄智
全妙华
皮建辉
梁宋平
机构
湖南师范大学蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室
怀化学院生物工程系
出处
《怀化学院学报》
2008年第5期41-43,共3页
基金
国家自然科学基金重点项目(30430170)
国家863专题(2006AA02Z141)
+1 种基金
湖南省自然科学基金项目(07JJ3072)
湖南省教育厅基金项目(06C503)
文摘
敬钊毒素-V(Jingzhaotoxin-V,JZTX-V)是从敬钊缨毛蛛粗毒中纯化到的一种新型河豚毒素不敏感型钠通道抑制剂,由29个氨基酸残基组成,含有三对二硫键.为了深入研究该毒素的结构与功能关系,应用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽化学合成方法合成了用丙氨酸(Ala)替代JZTX-V第12位赖氨酸残基的突变体K12A-JZTX-V,合成粗品经反相高效液相色谱分离纯化和MALDI-TOF质谱鉴定,证明化学合成是成功的.线性多肽经谷胱甘肽氧化复性后,复性产物经质谱测定其相对分子量为3549.63,比线性分子的理论分子质量低6,说明六个半胱氨酸已经配对形成了三对二硫键.
关键词
敬
钊
缨毛
蛛
毒素
-V
固相多肽合成
突变体
氧化复性
质谱
Keywords
JZTX - V
solid - phase synthesis
mutant
oxidative refolding
mass spectrometry
分类号
Q25 [生物学—细胞生物学]
Q343
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
两种蜘蛛多肽毒素的电喷雾电离质谱法序列分析
范春明
王贤纯
梁宋平
《质谱学报》
EI
CAS
CSCD
2005
2
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职称材料
2
敬钊缨毛蛛毒素-Ⅷ的分离纯化与鉴定
胡喆
王美迟
梁宋平
《生命科学研究》
CAS
CSCD
2005
0
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职称材料
3
Lys4突变对敬钊缨毛蛛毒素-V钠通道活性的影响
曾雄智
邓梅春
彭莹
魏文廷
王贤纯
梁宋平
《生命科学研究》
CAS
CSCD
2008
1
下载PDF
职称材料
4
Arg20突变对敬钊缨毛蛛毒素-V钠通道活性的影响
曾雄智
邓梅春
皮建辉
全妙华
王贤纯
梁宋平
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
1
下载PDF
职称材料
5
敬钊毒素-V突变体K12A-JZTX-V的化学合成与氧化还原复性
曾雄智
全妙华
皮建辉
梁宋平
《怀化学院学报》
2008
0
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职称材料
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