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A链21位Asn缺失胰岛素的分离纯化及性质研究
1
作者 王春阳 王秋芳 《山东农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2002年第2期184-188,共5页
将A2 1位缺失胰岛素原基因直接克隆到温度诱导型表达载体pBV2 2 0上 ,在E .coli系统中得到高效表达 ,表达量为 8% - 15 %。表达产物经过超声波破碎或高压匀浆 ,包涵体裂解 ,等电点沉淀、二硫键还原及A ,B链重组等后加工过程后 ,得到高... 将A2 1位缺失胰岛素原基因直接克隆到温度诱导型表达载体pBV2 2 0上 ,在E .coli系统中得到高效表达 ,表达量为 8% - 15 %。表达产物经过超声波破碎或高压匀浆 ,包涵体裂解 ,等电点沉淀、二硫键还原及A ,B链重组等后加工过程后 ,得到高纯度的突变胰岛素原。用酶切的方法将其活化为A2 1位缺失胰岛素 ,并进行性质和活性测定 ,证明其免疫活性和受体结合活性均大幅下降。因此认为A2 1Asn在维持胰岛素发挥其生物功能所必须的特定空间结构方面有重要作用 ,A2 展开更多
关键词 A链21位Asn缺失胰岛素 分离纯化 酶切 放射免疫活性 受体结合活性
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(A11,A12)胰岛素原移位突变体的表征研究
2
作者 井健 《北京师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期381-384,共4页
将(CysA11Ser,SerA12Cys)人胰岛素原移位突变体基因克隆至高效表达质粒pET22b多克隆位点区,构建重组表达质粒pET-A112,并在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)pLys中进行了表达.表达产物存在于包涵体中,通过包涵体的分离及二硫键变复性,获得A6-A1... 将(CysA11Ser,SerA12Cys)人胰岛素原移位突变体基因克隆至高效表达质粒pET22b多克隆位点区,构建重组表达质粒pET-A112,并在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)pLys中进行了表达.表达产物存在于包涵体中,通过包涵体的分离及二硫键变复性,获得A6-A12二硫键突变型的胰岛素原突变体.SDS-PAGE电泳显示突变型胰岛素原的电泳迁移率与野生型胰岛素原基本相同.质谱检测表明,突变性胰岛素原的分子结构均一、纯度良好,氨基酸组成与理论值基本一致.以野生型人胰岛素原为对照进行的胰岛素受体试验及胰岛素放射免疫试验表明,A6-A12二硫键错接型胰岛素原突变体的受体结合活性和放免活性是野生型胰岛素原的11%与55%. 展开更多
关键词 A11-A12移位突变 胰岛素原突变体 胰岛素受体结合活性 放射免疫活性
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