犬细小病毒VP2主要抗原表位基因的密码子优化及原核表达 被引量：1

1

作者 潘素敏 仲飞 +4 位作者 贺英 史秋梅 潘素娜 崔丹 王晓燕 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第19期118-121,共4页

为了制备大量廉价的可溶性犬细小病毒（CPV）VP2蛋白抗原,试验截选了VP2抗原表位集中的基因片段VP2-70进行密码子优化及合成,将合成基因克隆到pET-32a（＋）载体中,构建原核表达载体pET-32-VP2-70,转化BL21（DE3）工程菌,IPTG诱导表达... 为了制备大量廉价的可溶性犬细小病毒（CPV）VP2蛋白抗原,试验截选了VP2抗原表位集中的基因片段VP2-70进行密码子优化及合成,将合成基因克隆到pET-32a（＋）载体中,构建原核表达载体pET-32-VP2-70,转化BL21（DE3）工程菌,IPTG诱导表达后进行Ni-NTA亲和层析纯化,Western-blot检测验证其生物学活性。结果表明：试验构建的VP2-70表达载体能够介导VP2-70融合蛋白在大肠杆菌中高效表达,表达量高出野生型VP2-70融合蛋白16 mg/L;Western-blot检测显示,该蛋白具有很好的免疫反应原性,可为CPV亚单位疫苗和免疫学诊断方法的研究提供候选抗原。 展开更多

关键词 犬细小病毒 抗原表位基因 密码子优化 克隆 原核表达 融合蛋白

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疟疾多抗原表位基因表达载体的构建及其在烟草中的表达 被引量：12

2

作者 李霞 陈杭 +3 位作者 李晓东 钟辉 曹诚 马清钧 《生物工程进展》 CSCD 1999年第4期39-44,38,共7页

本文首次报道疟疾多表位抗原基因在转基因烟草中表达成功。疟疾是当今最需要研究有效疫苗的主要传染病之一。过去的研究表明，ＡＷＴＥ基因编码的疟疾多种抗原表位是有效的抗疟表位，ＣＴＢ基因编码的霍乱毒素Ｂ亚基，是一种既能引起细... 本文首次报道疟疾多表位抗原基因在转基因烟草中表达成功。疟疾是当今最需要研究有效疫苗的主要传染病之一。过去的研究表明，ＡＷＴＥ基因编码的疟疾多种抗原表位是有效的抗疟表位，ＣＴＢ基因编码的霍乱毒素Ｂ亚基，是一种既能引起细胞免疫又能引起体液免疫的免疫载体和佐剂。本研究把ＡＷＴＥ－ＣＴＢ融合基因构建到植物表达载体ｐＢＶＧ－ｎｙ１上，采用共转化的方法，通过基因枪导入转化烟草。经ＰＣＲ扩增ＡＷＴＥ－ＣＴＢ基因片段检测，证实了疟疾多表位抗原基因在转基因烟草中的整合。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白电泳结果显示转基因烟草中表达了ＡＷＴＥ－ＣＴＢ融合基因分子量相同的特异蛋白。经抗原性分析实验和Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹实验结果表明，特异表达的融合蛋白可与ＣＴＢ和ＡＷＴＥ抗体结合，具有ＣＴＢ和ＡＷＴＥ抗原性。 展开更多

关键词 疟疾 多抗原表位基因 转基因烟草 表达

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水貂阿留申病毒VP2蛋白主要抗原表位基因原核表达及其检测应用 被引量：13

3

作者 曾祥伟 华育平 梁冬莹 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1088-1090,共3页

将构建好的重组质粒pMD-VP2a、pMD-VP2b分别经双酶切获得基因片段VP2a、VP2b,分别将其定向插入到原核表达载体pMAL-c2中,构建原核表达载体pMAL-VPa和pMAL-VPb。阳性重组质粒转化宿主菌TB1,经IPTG诱导,两段基因均获得表达;Westernblot分... 将构建好的重组质粒pMD-VP2a、pMD-VP2b分别经双酶切获得基因片段VP2a、VP2b,分别将其定向插入到原核表达载体pMAL-c2中,构建原核表达载体pMAL-VPa和pMAL-VPb。阳性重组质粒转化宿主菌TB1,经IPTG诱导,两段基因均获得表达;Westernblot分析表明表达蛋白具有良好的抗原性。用KCI染色后,切胶回收的方法对表达蛋白进行纯化,以纯化的目的蛋白作为诊断抗原初步建立了水貂阿留申的VP2-CIEP诊断方法。结果表明该方法具有较高的灵敏性和特异性,与传统的CIEP方法的检出符合率达94.3%。 展开更多

关键词 水貂阿留申病毒 VP2蛋白抗原表位基因 原核表达 VP2-CIEP

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兔出血症病毒VP60主要抗原表位的原核表达及其免疫原性 被引量：6

4

作者 隋慧 杨金生 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第28期15660-15661,共2页

[目的]研究兔出血症病毒(RHDV)VP60主要抗原表位基因原核表达蛋白的免疫原性。[方法]采用RT-PCR方法扩增了RHDV衣壳蛋白VP60主要抗原表位基因。以pET-28b(+)为表达载体,在E.coliRosetta菌株中表达重组蛋白。通过Western blot分析和接种... [目的]研究兔出血症病毒(RHDV)VP60主要抗原表位基因原核表达蛋白的免疫原性。[方法]采用RT-PCR方法扩增了RHDV衣壳蛋白VP60主要抗原表位基因。以pET-28b(+)为表达载体,在E.coliRosetta菌株中表达重组蛋白。通过Western blot分析和接种家兔检测了重组蛋白的免疫原性。[结果]经Western blot检测,在相对分子量24.0k Da处出现特异性的反应带。以纯化的重组蛋白制备的抗血清可以与纯化的RHDV发生特异性的ELISA反应。[结论]RHDV VP60主要抗原表位的原核表达产物具有较好的免疫原性。 展开更多

关键词 兔出血症病毒 VP60 主要抗原表位基因 免疫原性

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表达传染性喉气管炎病毒gB主要抗原表位区域重组新城疫病毒的构建 被引量：6

5

作者 孙娜娜 王琪 +1 位作者 李慧昕 刘胜旺 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期414-417,共4页

为构建以新城疫病毒(NDV)为活病毒载体表达传染性喉气管炎病毒(ILTV)g B主要抗原表位区域的重组病毒,本研究以ILTV LJS09株的DNA为模板,通过PCR技术扩增1 323 bp ILTV编码g B主要抗原表位的基因片段(1 bp^440 bp),将其插入到NDV感染性克... 为构建以新城疫病毒(NDV)为活病毒载体表达传染性喉气管炎病毒(ILTV)g B主要抗原表位区域的重组病毒,本研究以ILTV LJS09株的DNA为模板,通过PCR技术扩增1 323 bp ILTV编码g B主要抗原表位的基因片段(1 bp^440 bp),将其插入到NDV感染性克隆p BR-FL中,构建含有ILTV g B主要抗原基因的NDV c DNA克隆p BR-FL-g B1-440。利用磷酸钙转染法,在辅助质粒p CI-neo-NP、p CI-neo-P和p CI-neo-L的共同作用下,将重组质粒转染于表达T7聚合酶重组痘病毒预感染的BSR-T7/5细胞,获得重组病毒r L-g B1-440。采用RT-PCR检测接种重组病毒的鸡胚尿囊液,结果表明重组病毒中含有相应的外源基因。利用g B的抗血清检测重组病毒中g B的表达,间接免疫荧光试验表明,在感染重组病毒的BSR-T7/5细胞中目的蛋白得到表达。本研究为研制和开发传染性喉气管炎重组新城疫二联活疫苗奠定基础。 展开更多

关键词 重组新城疫病毒 传染性喉气管炎病毒 gB蛋白 主要抗原表位基因

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恶性疟原虫多抗原表位基因表达载体的构建及其在大豆幼胚中的表达 被引量：3

6

作者 李霞 钟辉 +2 位作者 李军 陈杭 马清钧 《生物技术通讯》 CAS 1999年第3期175-179,共5页

疟疾是当今最需要研究有效疫苗的主要传染病之一。AWTE基因编码恶性疟原虫多种抗原表位基因 ,CTB基因编码霍乱毒素 B亚基 ,是一种既能引起细胞免疫又能引起体液免疫的免疫载体和佐剂。把 AWTE- CTB融合基因构建到植物表达载体 p BVG- ny... 疟疾是当今最需要研究有效疫苗的主要传染病之一。AWTE基因编码恶性疟原虫多种抗原表位基因 ,CTB基因编码霍乱毒素 B亚基 ,是一种既能引起细胞免疫又能引起体液免疫的免疫载体和佐剂。把 AWTE- CTB融合基因构建到植物表达载体 p BVG- ny2上 ,通过基因枪导入法 ,转化大豆幼胚分生组织。 X- glu染色检测到 GUS基因的表达 ;抗原性分析实验结果表明 ,特异表达的融合蛋白可与 CTB和 AWTE抗体结合 ,具有 CTB抗原性。这个实验结果 。 展开更多

关键词 疟疾 多抗原表位基因 转基因大豆幼胚 瞬时表达 CTB抗原性

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RHDV CD株VP60主要抗原表位基因的克隆与序列分析 被引量：3

7

作者 隋慧 杨金生 《中国动物检疫》 CAS 2010年第8期27-29,48,共4页

本实验用RHDV CD株人工感染家兔,发病死亡后,取肝脏匀浆,用Trizol试剂从匀浆上清中提取病毒RNA。根据Genbank已发表序列保守区设计并合成引物,采用RT-PCR方法扩增了RHDV衣壳蛋白VP60主要抗原表位基因。PCR产物纯化后,进行序列测定。测... 本实验用RHDV CD株人工感染家兔,发病死亡后,取肝脏匀浆,用Trizol试剂从匀浆上清中提取病毒RNA。根据Genbank已发表序列保守区设计并合成引物,采用RT-PCR方法扩增了RHDV衣壳蛋白VP60主要抗原表位基因。PCR产物纯化后,进行序列测定。测序结果表明,VP60主要抗原表位基因长525bp。该序列与已发表的其它13株RHDV VP60同一核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行同源性比较。结果显示,CD株核酸序列与WX-84株同源性最高为97.5%,与其它毒株的同源性在92.0%～96.6%之间。氨基酸序列与WX-84株、墨西哥Mexi-co-89株同源性最高为99.4%,与其它毒株的同源性在96.6%～98.3%之间。 展开更多

关键词 RHDV VP60 主要抗原表位基因 克隆 同源性

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牛流行热病毒G_1抗原表位基因在大肠杆菌中的表达、纯化及抗原性鉴定 被引量：3

8

作者 郑福英 蔺国珍 邱昌庆 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期498-502,共5页

从包含牛流行热病毒G蛋白基因的质粒pMD-G中克隆G1抗原表位区基因,与表达载体pGEX-4T-1连接,成功构建重组质粒pGEX-G1。重组质粒转化BL21(DE3),以IPTG进行诱导,并确定了最佳表达条件的IPTG浓度为0.1mmol/L、反应温度为16℃、诱导时间为... 从包含牛流行热病毒G蛋白基因的质粒pMD-G中克隆G1抗原表位区基因,与表达载体pGEX-4T-1连接,成功构建重组质粒pGEX-G1。重组质粒转化BL21(DE3),以IPTG进行诱导,并确定了最佳表达条件的IPTG浓度为0.1mmol/L、反应温度为16℃、诱导时间为18h。可溶性表达的目的蛋白经Glutathione Sepharose TM4B介质纯化,纯度达80%;以包涵体形式存在的重组蛋白以2%的脱氧胆酸钠洗涤、0.5%的N-十二烷基肌氨酸钠溶解、透析复性、Glutathione Sepharose TM4B纯化后,纯度达85%以上。Western blot试验表明纯化的目的蛋白有良好的反应原性。经间接ELISA检测,测得牛流行热病毒12份阳性血清的OD490值平均为1.813±0.231,12份阴性血清的OD490值平均为0.359±0.032,差异极显著(P<0.01)。将重组蛋白作为抗原免疫兔子,试验兔均产生了高滴度的抗体,证实该蛋白有免疫原性。将目的蛋白作为包被抗原,测得8份狂犬病病毒阳性血清的OD490值平均为0.324±0.031,与所测12份阴性血清的OD490值接近,说明不存在交叉反应。以上结果均证实纯化后的重组蛋白有良好的生物学活性和特异性,可作为包被抗原,开发ELISA试剂盒。 展开更多

关键词 牛流行热病毒 G1抗原表位基因 大肠杆菌 表达 鉴定

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鸡新城疫病毒Lasota株HN蛋白主要抗原表位基因在大肠杆菌中的表达 被引量：1

9

作者 赵坤 王选年 赵德明 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期402-405,413,共5页

用RT—PCR法从NDV Lasota疫苗株中扩增出HN基因，将其克隆到pGEM—T easy vector中，构建了重组质粒pT—HN．设计了1对引物，用PCR法扩增出HN蛋白主要抗原表位基因（442—1734bp共1239bp），将其连接到原核表达载体pET-28a（＋），构建... 用RT—PCR法从NDV Lasota疫苗株中扩增出HN基因，将其克隆到pGEM—T easy vector中，构建了重组质粒pT—HN．设计了1对引物，用PCR法扩增出HN蛋白主要抗原表位基因（442—1734bp共1239bp），将其连接到原核表达载体pET-28a（＋），构建重组质粒pET—HN．用IPTG诱导使其在大肠杆菌BL21（DE3）中表达．SDS—PAGE结果表明，NDV HN主要抗原表位基因在pET—HN中获得了高效融合表达，其表达蛋白的分子量为28kD．同时，通过试验摸索并确定了表达HN蛋白主要抗原表位基因的最佳诱导条件：IPTG终浓度为0．4mmol·L^-1，诱导时间为4h，温度为37℃． 展开更多

关键词 新城疫病毒 HN蛋白 主要抗原表位基因 克隆 原核表达

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L缬氨酸对环孢菌素形成的影响

10

作者 赵德修 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第S1期317-327,共11页

Ｌ缬氨酸对环孢菌素形成的影响赵德修（中国科学院植物研究所北京１０００４４）环孢菌素的生物合成路线受添加外源氨基酸影响。Ｋｏｂｅｌ和Ｔｒａｂｅｒ［１］报道过，添加与环孢菌素形成有关的特殊氨基酸可以提高环孢菌素某组分所... Ｌ缬氨酸对环孢菌素形成的影响赵德修（中国科学院植物研究所北京１０００４４）环孢菌素的生物合成路线受添加外源氨基酸影响。Ｋｏｂｅｌ和Ｔｒａｂｅｒ［１］报道过，添加与环孢菌素形成有关的特殊氨基酸可以提高环孢菌素某组分所占的比例。如ＤＬ氨基丁酸能够提高... 展开更多

关键词 环孢菌素 缬氨酸 培养基 高压液相色谱 生长速率 发酵培养 菌丝体 胚性愈伤组织 干细胞 多抗原表位基因

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PRV gE抗原表位基因的序列分析 被引量：1

11

作者 石迎新 罗满林 +1 位作者 黄毓茂 刘镇明 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期71-74,共4页

设计、合成了 1对特异性引物 ,以PRV MinA和PRV YueA株的病毒基因组为模板扩增gE的抗原表位基因 ,均获得了约 5 6 0bp的特异性产物 .将PCR产物克隆到pUCm T载体上 ,构建重组质粒pUCMAgE和pUCYAgE .经菌落PCR和质粒酶切鉴定后 ,将目的基... 设计、合成了 1对特异性引物 ,以PRV MinA和PRV YueA株的病毒基因组为模板扩增gE的抗原表位基因 ,均获得了约 5 6 0bp的特异性产物 .将PCR产物克隆到pUCm T载体上 ,构建重组质粒pUCMAgE和pUCYAgE .经菌落PCR和质粒酶切鉴定后 ,将目的基因进行序列测定 .结果表明 :目的基因均由 5 5 8bp组成 ,编码 186个氨基酸 ;核酸序列和推导的氨基酸序列的同源性分析表明 ,PRV YueA和PRV MinA株具有相对较低的同一性 ,分别为 96 9%和92 5 % . 展开更多

关键词 PRV gE抗原表位基因 序列分析 伪狂犬病毒 家畜 野生动物 疾病防治

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猪型布鲁氏菌Omp31抗原表位基因的性质分析

12

作者 杜志强 程佳 王建英 《四川师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期631-634,共4页

布鲁氏菌病是一种由革兰氏阴性小杆菌:布鲁氏菌(Brucella)引起的,主要在动物中以流产和发热为表现特征的疾病.以猪型布鲁氏菌病Omp31抗原表位基因作为研究对象,对基因的种间同源性、亚型分类、结构性质、抗原表位性质等信息进行了分析,... 布鲁氏菌病是一种由革兰氏阴性小杆菌:布鲁氏菌(Brucella)引起的,主要在动物中以流产和发热为表现特征的疾病.以猪型布鲁氏菌病Omp31抗原表位基因作为研究对象,对基因的种间同源性、亚型分类、结构性质、抗原表位性质等信息进行了分析,并且作出了相关预测.随着预测方法的不断完善,将会对布鲁氏菌病其它抗原表位基因的研究提供帮助,从而为该疾病的防疫、治疗提供理论依据,同时也可以促进相关疫苗的研制. 展开更多

关键词 布鲁氏菌 Omp31抗原表位基因 序列对比 结构预测 抗原性质分析

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兔出血症病毒VP60主要抗原表位基因的克隆与序列分析

13

作者 庄天中 隋慧 +1 位作者 向华 宣华 《农业与技术》 2006年第6期78-83,共6页

本实验用RHDV CD株人工感染家兔，发病死亡后，取肝脏匀浆，用Trizol试剂从匀浆上清中提取病毒RNA。根据Genbank已发表序列保守区设计并合成引物，采用RT-PCR方法扩增了PHDV表壳蛋白VP60主要抗原表位基因。PCR产物纯化后，选行序列测定... 本实验用RHDV CD株人工感染家兔，发病死亡后，取肝脏匀浆，用Trizol试剂从匀浆上清中提取病毒RNA。根据Genbank已发表序列保守区设计并合成引物，采用RT-PCR方法扩增了PHDV表壳蛋白VP60主要抗原表位基因。PCR产物纯化后，选行序列测定。测序结果表明，VP60主要抗原表位基因长525bp。该序列与已发表的其它13株RHDV VP60同一核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行同源性比较。结果显示，CD株核酸序列与WX-84株同源性最高为97．5％．与其它毒株的同源性在92．0％-96．6％之间。氨基酸序列与WX-84株、墨西哥Mexico-89株同源性最高为99．4％，与其它毒株的同源性在96．6％～98．3％之间。 展开更多

关键词 RHDV VP60 主要抗原表位基因 克隆 同源性

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日本血吸虫抗原表位编码基因重组质粒的高效构建与鉴定

14

作者 杨艳芬 张蕾 +6 位作者 赵嘉庆 杨雪 杨江华 朱翔 苏川 张兆松 吴观陵 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期809-812,共4页

目的探索用一种新方法—胶内连接法,快速构建日本血吸虫抗原表位编码基因重组表达载体,高效克隆及表达日本血吸虫抗原表位,用于疫苗候选分子的筛选。方法将pUMCV质粒载体用SalI和EcoRI双酶切,酶切产物于低熔点胶中电泳,紫外灯下割取含... 目的探索用一种新方法—胶内连接法,快速构建日本血吸虫抗原表位编码基因重组表达载体,高效克隆及表达日本血吸虫抗原表位,用于疫苗候选分子的筛选。方法将pUMCV质粒载体用SalI和EcoRI双酶切,酶切产物于低熔点胶中电泳,紫外灯下割取含酶切载体的条带。取一定量割取的低熔点胶,直接将其与合成的单个抗原表位编码基因或者是两个不同抗原表位编码基因进行连接。连接产物转化感受态菌DH5α。挑选阳性克隆进行双酶切、电泳及测序鉴定。结果单个抗原表位或两个不同的表位编码基因被成功地插入真核表达载体。结论采用胶内连接法直接在低熔点胶存在的条件下进行插入基因片段与质粒载体的连接,快速高效地获得了多个单一或组合抗原表位编码基因重组质粒,为进一步筛选日本血吸虫疫苗分子奠定了基础。 展开更多

关键词 日本血吸虫 抗原表位编码基因 重组质粒 高效克隆

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恶性疟多抗原表位融合基因在不同载体中的克隆与表达 被引量：1

15

作者 王衣祥 曹诚 +1 位作者 毛盛贤 马清钧 《生物技术通讯》 CAS 2001年第3期188-191,共4页

通过PCR方法扩增并分析了恶性疟原虫多抗原表位融合基因awte序列 ,再分别克隆于温度诱导型融合表达载体pEX31b和IPTG诱导型融合型表达载体pGEMEX1中 ,并进行了诱导表达 ,并对表达产物MS2 AWTE和T7Φ10 AWTE融合蛋白进行间接ELISA检测 ... 通过PCR方法扩增并分析了恶性疟原虫多抗原表位融合基因awte序列 ,再分别克隆于温度诱导型融合表达载体pEX31b和IPTG诱导型融合型表达载体pGEMEX1中 ,并进行了诱导表达 ,并对表达产物MS2 AWTE和T7Φ10 AWTE融合蛋白进行间接ELISA检测 ,证实MS2 AWTE和T7Φ10 AWTE都具有免疫学活性。另外 ,同样将awte基因分别克隆于温度诱导型和IPTG诱导型非融合表达载体pBV2 0 0、pKEN中并进行诱导表达 ,但在SDS 展开更多

关键词 PCR 基因克隆 表达 融合蛋白 ELISA 恶性疟原虫 多抗原表位融合基因 awte 载体

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A/O型FMDV多抗原表位融合基因植物表达载体构建及转化柱花草的研究

16

作者 肖旭倩 胡正龙 +3 位作者 沈文涛 言普 王冬梅 周鹏 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第8期1565-1570,共6页

【目的】获得含有A/O型FMDV多抗原表位融合基因4种不同组合的转基因柱花草植株。【方法】用限制性内切酶Xba I和Sac I双酶切4个中间载体和质粒pBI121,回收连接后获得4个重组植物表达载体(pBI-xsB/xs T/xsBT/xsBTT)及相应农杆菌工程菌株... 【目的】获得含有A/O型FMDV多抗原表位融合基因4种不同组合的转基因柱花草植株。【方法】用限制性内切酶Xba I和Sac I双酶切4个中间载体和质粒pBI121,回收连接后获得4个重组植物表达载体(pBI-xsB/xs T/xsBT/xsBTT)及相应农杆菌工程菌株,利用农杆菌介导法转化热研2号柱花草(Stylosanthes guianensis cv.ReyanⅡ)子叶叶盘。采用卡那霉素筛选,特异引物和转基因检测引物进行PCR及RT-PCR检测不同组合多抗原表位融合基因的转录情况。【结果】获得36株抗性转化株,经PCR检测有16株为阳性,RT-PCR检测后有11株为阳性,表明4种组合多抗原表位融合基因在转基因植株中获得转录。【结论】此研究为进一步揭示同型与异型FMDV之间多抗原表位基因不同融合方式的免疫原性和免疫效果奠定了研究基础。 展开更多

关键词 蹄疫病毒 多抗原表位融合基因 农杆菌介导法 柱花草 遗传转化

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