东莞市2005年健康人群流脑监测结果分析 被引量：8

1

作者 杨毓环 林杰 《中国卫生检验杂志》 CAS 2006年第1期75-76,共2页

目的：对福建省食品中O157：H7大肠杆菌进行分离调查，并对分离菌株的O157抗原编码基因（rfbO157）和H7抗原编码基因（flicH7）以及毒力基因（志贺毒素基因stx、粘附抹平因子基因eaeA、溶血素基因hlyA）进行检测。方法：按照《全国食品... 目的：对福建省食品中O157：H7大肠杆菌进行分离调查，并对分离菌株的O157抗原编码基因（rfbO157）和H7抗原编码基因（flicH7）以及毒力基因（志贺毒素基因stx、粘附抹平因子基因eaeA、溶血素基因hlyA）进行检测。方法：按照《全国食品污染物检测相关实验室操作手册（食源性致病菌部分）》的要求，用EC肉汤增菌，快诊金卡筛选，接种CHROMagar O157显色平板，血清和生化系列证实。结果：1380件食品中分离到O157：H7人肠杆菌4株，分别为福州的生猪肉和水产品蚶中各1株、尤溪的冻鸡肉2株，检出率0．29％。结论：福建省食品中存在O157：H7大肠杆菌的污染，虽检出率较低，这可能与福建不是O157：H7大肠杆菌的流行地区有关，但监测是一项长期的工作，防患于未然，同时福建省也将O157：H7大肠杆菌列入了食品安全预警系统的一部分。 展开更多

关键词 O157:H7大肠杆菌 抗原编码基因 毒力基因

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原发性肝癌患者血液中XAGE-1b mRNA的表达 被引量：3

2

作者 侯振宇 宋玉亮 +5 位作者 潘泽亚 秦兴军 关晓峰 刘洋 周伟平 朱乃硕 《中华外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期622-623,共2页

XAGE-1是一类通过生物信息学的方法获得的肿瘤-睾丸抗原编码基因，XAGE-1b是其主要的表达剪接体。临床研究已获得了较为详细的XAGE-1在肿瘤细胞中的表达谱，发现在肺癌、黑色素瘤、前列腺癌等肿瘤组织中有较高的XAGE-1检出率，并且逐步... XAGE-1是一类通过生物信息学的方法获得的肿瘤-睾丸抗原编码基因，XAGE-1b是其主要的表达剪接体。临床研究已获得了较为详细的XAGE-1在肿瘤细胞中的表达谱，发现在肺癌、黑色素瘤、前列腺癌等肿瘤组织中有较高的XAGE-1检出率，并且逐步揭示出XAGE-1的表达与病理进程和肿瘤亚型间的关联。本研究采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time PCR）检测了XAGE-1b mRNA在125例原发性肝癌患者血液中的表达情况，对其表达的临床意义进行了探讨。 展开更多

关键词 原发性肝癌患者 MRNA 实时荧光定量聚合酶链反应 血液 抗原编码基因 肿瘤细胞 生物信息学 临床研究

原文传递

基因疫苗作用机制和免疫途径的研究现状 被引量：1

3

作者 李敏 董竞男 +1 位作者 刘建国 白国辉 《贵州医药》 CAS 2013年第8期748-751,共4页

基因疫苗（gene vaccine）又称DNA疫苗（DNA vaccine）或核酸疫苗（nucleic acid vaccine）,即将编码特异性抗原多肽或蛋白的基因克隆到真核表达载体上,然后经一定途径进入机体内,使外源基因在活体内表达、产生的抗原激活机体的免疫系统... 基因疫苗（gene vaccine）又称DNA疫苗（DNA vaccine）或核酸疫苗（nucleic acid vaccine）,即将编码特异性抗原多肽或蛋白的基因克隆到真核表达载体上,然后经一定途径进入机体内,使外源基因在活体内表达、产生的抗原激活机体的免疫系统,从而诱导特异性的体液免疫和细胞免疫应答,以达到预防和治疗疾病的目的。基因疫苗由抗原编码基因及质粒载体两部分组成。 展开更多

关键词 基因疫苗 免疫途径 抗原编码基因 真核表达载体 细胞免疫应答 抗原多肽 DNA疫苗 核酸疫苗

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非活性人细胞依赖型血型抗原的研究及应用

4

作者 丁少华 蒙青林 +1 位作者 魏双施 李勇 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期274-276,281,共4页

长期以来,在医学临床常规的血型抗体检测工作中存在抗原缺乏的困难,由于对活性细胞的依赖,使得血型相容性检测技术落后于临床上同种异型免疫性疾病的诊断、治疗的需求[1]。近年来人们已经对绝大多数血型抗原编码基因、抗原分子以及抗原... 长期以来,在医学临床常规的血型抗体检测工作中存在抗原缺乏的困难,由于对活性细胞的依赖,使得血型相容性检测技术落后于临床上同种异型免疫性疾病的诊断、治疗的需求[1]。近年来人们已经对绝大多数血型抗原编码基因、抗原分子以及抗原载体的组成和结构等都有了十分清楚的认识,不依赖活性人血液细胞的血型抗原的研究成为血液免疫学领域的重点研究方向之一,目前主要研究项目有：1重组表达血型抗原;2化学合成血型抗原多肽;3适配体技术筛选的血型模拟抗原；4纳米磁珠细胞膜抗原等。 展开更多

关键词 血型抗原 抗原编码基因 同种异型 依赖型 血液细胞 免疫性疾病 抗原载体 谱细胞 相容性 膜抗原

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MAGE基因与肿瘤免疫治疗

5

作者 徐磊 汪国华 刘建华 《浙江实用医学》 2008年第4期298-299,309,共3页

关键词 肿瘤免疫治疗 MAGE基因 抗原编码基因 黑色素瘤 表达特点

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疥螨与疥螨病研究进展

6

作者 曾智勇 杨光友 梁海英 《中国畜牧兽医文摘》 2005年第3期53-54,56,共3页

疥螨病通常是指由疥螨科、疥螨属的疥螨(Sarcoptesscabiei)寄生于人和其他哺乳动物皮肤表皮内,引起称为疥疮(又称疥癣、癞病)的一种顽固、接触性、传染性皮肤病,其以剧痒、结痂、脱毛和皮肤增厚为特征。

关键词 宿主 抗原编码基因 基因工程疫苗 痴皮 表皮 皮肤 基因序列

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核酸疫苗的研究进展

7

作者 李颖 刘清河 《中国畜牧兽医文摘》 2006年第1期9-10,共2页

1核酸疫苗的发展史核酸疫苗又称为基因疫苗、脱氧核糖核酸疫苗。它不含肽、蛋白质或病毒载体,只是由来源于病原体的一个抗原编码基因及作为其载体的质粒DNA组成,其不需要任何化学载体,所以又称裸DNA疫苗(Naked DNA vaccine)。它是将外... 1核酸疫苗的发展史核酸疫苗又称为基因疫苗、脱氧核糖核酸疫苗。它不含肽、蛋白质或病毒载体,只是由来源于病原体的一个抗原编码基因及作为其载体的质粒DNA组成,其不需要任何化学载体,所以又称裸DNA疫苗(Naked DNA vaccine)。它是将外源基因克隆到真核质粒表达载体上。 展开更多

关键词 核酸疫苗 基因疫苗 外源基因 抗原编码基因 DSDNA

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黑素瘤抗原编码基因A1蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义 被引量：7

8

作者 朱呈祥 于跃 +7 位作者 方海生 黄陈军 赵飞 周悦 李俊 李启凡 庄宇 王伟 《中国医师进修杂志》 2019年第1期37-41,共5页

目的研究黑素瘤抗原编码基因(MAGE)A1蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达情况,并探讨其与临床病理因素及预后的关系。方法选取2006年1月至2012年12月行根治性手术治疗的197例食管鳞状细胞癌患者的癌组织和癌旁组织,制作组织芯片,应用免... 目的研究黑素瘤抗原编码基因(MAGE)A1蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达情况,并探讨其与临床病理因素及预后的关系。方法选取2006年1月至2012年12月行根治性手术治疗的197例食管鳞状细胞癌患者的癌组织和癌旁组织,制作组织芯片,应用免疫组织化学法检测MAGEA1蛋白的表达情况。结果MAGEA1蛋白主要表达于肿瘤细胞的胞质和胞核,癌组织MAGEA1蛋白阳性表达率明显高于癌旁组织[73.6%(145/197)比5.6%(11/197)],差异有统计学意义(P<0.01)。食管鳞状细胞癌患者MAGEA1蛋白阳性表达与性别、年龄、吸烟史、饮酒史、上消化道肿瘤家族史、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、肿瘤分化程度、肿瘤部位及TNM分期均无关(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,MAGEA1蛋白阳性患者5年生存率明显低于MAGEA1蛋白阴性患者(37.2%比53.8%),差异有统计学意义(P=0.018)。多因素分析结果显示,MAGEA1蛋白表达阳性是导致食管鳞状细胞癌患者预后不佳的独立危险因素(HR=1.91,95%CI1.22~2.98,P=0.004)。结论食管鳞状细胞癌组织中MAGEA1蛋白阳性表达率较高,且与患者预后负相关,可能成为食管鳞状细胞癌免疫治疗的一个靶目标。 展开更多

关键词 食管肿瘤 预后 黑素瘤抗原编码基因A1蛋白 癌-睾丸抗原

原文传递

黑色素瘤抗原编码基因家族新成员MAGE-D1的组织表达谱研究 被引量：3

9

作者 张成岗 贺福初 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期165-171,共7页

MAGE D1是黑色素瘤抗原编码基因家族 (MAGE)中MAGE D亚家族的新成员 .为了研究该基因的性质及其可能功能 ,采用Northernblot和Dotblot杂交技术研究了其组织表达谱 .结果发现 ,该基因在多种肿瘤组织和正常组织中均广泛表达 .在所检测的 ... MAGE D1是黑色素瘤抗原编码基因家族 (MAGE)中MAGE D亚家族的新成员 .为了研究该基因的性质及其可能功能 ,采用Northernblot和Dotblot杂交技术研究了其组织表达谱 .结果发现 ,该基因在多种肿瘤组织和正常组织中均广泛表达 .在所检测的 4 8种肿瘤组织中 ,经与对应正常组织进行比较发现 ,该基因在 13种肿瘤组织中的表达显著增高 ,而在 7种肿瘤组织中的表达则显著降低 .进一步分析提示该基因在多种胚胎组织中的表达高于成年组织 .由于MAGE A、 B、 C亚家族均具有在肿瘤组织 睾丸中特异表达的特点 ,而作为MAGE D亚家族成员的MAGE D1并非在肿瘤组织中特异表达 ,提示需要对MAGE基因家族进行深入的功能研究 . 展开更多

关键词 黑色素瘤 抗原编码基因家族 MAGE-D1 组织表达谱

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黑色素瘤相关抗原家族新基因restin的组织表达谱 被引量：2

10

作者 路凡 胡沛臻 +2 位作者 傅海燕 赵文明 赵忠良 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期31-36,共6页

Restin是从维甲酸诱导肿瘤分化细胞中克隆的一种黑色素瘤相关抗原家族(MAGE)的新成员.对该基因在不同组织、不同细胞系的表达水平进行研究,将有利于揭示其生物学功能.使用α3-2P-dCTP标记人restin编码区基因作为探针,针对12种不同成人组... Restin是从维甲酸诱导肿瘤分化细胞中克隆的一种黑色素瘤相关抗原家族(MAGE)的新成员.对该基因在不同组织、不同细胞系的表达水平进行研究,将有利于揭示其生物学功能.使用α3-2P-dCTP标记人restin编码区基因作为探针,针对12种不同成人组织mRNA的Multiple TissueNorthern(MTN)膜和含76种成人、胎儿及常用细胞系mRNA的Multiple Tissue Expression(MTE)Array膜进行杂交分析,同时利用地高辛标记探针对11种常见肿瘤组织进行原位杂交检测.结果显示,MTN膜杂交中,12种组织显示均一杂交条带,约1.8 kb,提示该基因可能不存在剪接变异体;MTE膜杂交中,正常组织中均有不同程度的表达,但在肿瘤细胞系中均低表达或者不表达;原位杂交的结果显示,在8种恶性肿瘤组织中均不表达,而在3种良性肿瘤组织中呈现较低的表达.结果提示,该基因在正常组织中的表达明显高于肿瘤组织和肿瘤细胞系,完全不同于其它MAGE-A、B、C的组织表达方式.结合该基因在维甲酸诱导分化的肿瘤细胞中高表达,推测restin可能与正常细胞的分化、增殖有关. 展开更多

关键词 人黑色素瘤抗原编码基因 restin基因 杂交 组织分布

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MAGE-3逆抗原转染树突状细胞的抗胃癌免疫效率 被引量：2

11

作者 黎皓 陈雪华 +5 位作者 俞焙秦 柯山 郑重 朱正纲 顾琴龙 刘炳亚 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期512-515,共4页

目的构建逆抗原表达载体,以获得理想的肿瘤疫苗。方法运用RT-PCR方法合成MAGE-3cDNA,分别将RANTES基因分泌段前导序列和受体Fc段克隆至MAGE-3cDNA两端(pS-MAGE-3-Fc)再转染入DC表达,将致敏的DC与外周血T细胞和胃癌细胞共培养,观察产生... 目的构建逆抗原表达载体,以获得理想的肿瘤疫苗。方法运用RT-PCR方法合成MAGE-3cDNA,分别将RANTES基因分泌段前导序列和受体Fc段克隆至MAGE-3cDNA两端(pS-MAGE-3-Fc)再转染入DC表达,将致敏的DC与外周血T细胞和胃癌细胞共培养,观察产生的免疫效应。结果转染pS-MAGE-3-Fc的DC诱导的刺激淋巴细胞增殖反应和CTL杀伤效应均显著高于转染pMAGE-3的转染组和对照组(P<0.05)。结论逆抗原策略是理想的肿瘤疫苗策略,能够显著提高肿瘤免疫效率。 展开更多

关键词 黑色素瘤抗原编码基因-3 逆抗原 树突状细胞 转染 主要组织相容性复合体

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喉癌来源的MAGE-A3基因真核表达载体及其稳定表达模型的构建和鉴定

12

作者 吉晓滨 吕景礼 +2 位作者 陈敬贤 刘启才 谢景华 《广州医学院学报》 2012年第2期6-10,共5页

目的:克隆人黑色素瘤相关抗原MAGE-A3基因,构建真核表达载体,检测、鉴定其在细胞中的表达。方法:MAGE-A3基因进行PCR扩增,凝胶回收PCR产物片段并连接至pMD18-T载体。测序后将MAGE-A3基因片段亚克隆至真核表达载体,构建成pIRES2-EGFP/MAG... 目的:克隆人黑色素瘤相关抗原MAGE-A3基因,构建真核表达载体,检测、鉴定其在细胞中的表达。方法:MAGE-A3基因进行PCR扩增,凝胶回收PCR产物片段并连接至pMD18-T载体。测序后将MAGE-A3基因片段亚克隆至真核表达载体,构建成pIRES2-EGFP/MAGE-A3重组质粒经脂质体转染至293T细胞株后,荧光定量PCR、Western-blotting法鉴定MAGE-A3基因的表达。结果:MAGE-A3基因正确克隆在pIRES2-EGFP/MAGE-A3,测序结果与GenBank公布的MAGE-A3序列一致。转染293T细胞后能检测到MAGE-A3基因和蛋白的表达。结论:成功构建pIRES2-EGFP/MAGE-A3真核表达质粒,并能在293T细胞中有效表达MAGE-A3蛋白,奠定了其作为DNA疫苗应用的基础。 展开更多

关键词 黑色素瘤抗原编码基因 真核表达 基因克隆 喉肿瘤

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转染针对黑色素瘤抗原编码基因的短发夹RNA真核表达载体对SGC7901细胞增殖及凋亡的影响

13

作者 程传耀 黄忻 +2 位作者 丁一 张娓 张钦宪 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2008年第2期304-306,共3页

目的：观察转染针对黑色素瘤抗原编码基因（NRAGE）的短发夹RNA（shRNA）真核表达载体对SGC7901细胞增殖及凋亡的影响。方法：用特异性shRNA真核表达载体pSuper-EGFP-NRG转染SGC7901胃癌细胞，经G418筛选，应用RT-PCR方法检测转染细胞NR... 目的：观察转染针对黑色素瘤抗原编码基因（NRAGE）的短发夹RNA（shRNA）真核表达载体对SGC7901细胞增殖及凋亡的影响。方法：用特异性shRNA真核表达载体pSuper-EGFP-NRG转染SGC7901胃癌细胞，经G418筛选，应用RT-PCR方法检测转染细胞NRAGE mRNA的表达，应用流式细胞术检测转染细胞增殖与凋亡。结果：体外培养的pSuper-EGFP-NRG转染的SGC7901胃癌细胞中NRAGE基因被沉默，G0～G1期、G2期细胞百分率降低，S期细胞百分率增多（P〈0．05）。结论：NRAGE基因参与了SGC7901细胞周期和细胞凋亡的调控。 展开更多

关键词 黑色素瘤抗原编码基因 胃癌 RNA干扰 短发夹RNA

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Erbin、MAGEA1与食管鳞状细胞癌临床特征及预后相关性

14

作者 闫敢 周蓓蓓 +4 位作者 李明 范红芸 王贝 曾祥胜 樊卫 《热带医学杂志》 CAS 2020年第11期1483-1487,F0003,共6页

目的探究ErbB2相互作用蛋白(Erbin)、黑素瘤抗原编码基因A1蛋白(MAGEA1)与食管鳞状细胞癌(ESCC)临床特征、预后的相关性。方法选取盱眙县人民医院2015年1月-2017年1月138例ESCC患者作为研究对象,将手术切除的癌组织作为研究组,癌旁非肿... 目的探究ErbB2相互作用蛋白(Erbin)、黑素瘤抗原编码基因A1蛋白(MAGEA1)与食管鳞状细胞癌(ESCC)临床特征、预后的相关性。方法选取盱眙县人民医院2015年1月-2017年1月138例ESCC患者作为研究对象,将手术切除的癌组织作为研究组,癌旁非肿瘤组织作为对照组。比较两组Erbin、MAGEA1阳性表达率,采用Spearman相关性分析探究Erbin、MAGEA1与ESCC患者临床特征的相关性。随访3年,统计ESCC患者3年生存率,采用卡普兰-迈耶(KM)曲线比较不同Erbin、MAGEA1表达患者3年生存率,探究Erbin、MAGEA1与ESCC患者3年生存率的关系。结果研究组Erbin、MAGEA1阳性表达率(55.80%、71.74%)高于对照组(3.62%、5.80%),差异有统计学意义(χ2=89.841、126.393,P<0.05)。Erbin与ESCC患者临床分期、淋巴结转移显著相关(χ2=32.458、18.102,P<0.05)。MAGEA1与ESCC患者临床特征无相关性(P>0.05)。ESCC患者3年生存率为53.38%;Erbin、MAGEA1阳性表达患者3年生存率低于阴性表达患者(χ2=36.326,24.413,P<0.05);Erbin、MAGEA1与ESCC患者3年生存率存在负相关关系(P<0.05)。结论 ESCC患者癌组织中Erbin、MAGEA1阳性表达率明显升高,均与ESCC患者3年生存率呈负相关,尤其是Erbin有助于评估患者临床分期、淋巴结转移情况,可为临床治疗ESCC提供指导性参考。 展开更多

关键词 食管鳞状细胞癌 ErbB2相互作用蛋白 黑素瘤抗原编码基因A1蛋白 生存率

原文传递

舌鳞癌细胞中肿瘤特异性MAGE-A3基因的克隆

15

作者 徐磊 汪国华 刘建华 《浙江医学》 CAS 2009年第8期1102-1104,共3页

目的从人舌鳞癌细胞株Tca8113中扩增出编码MAGE-A3全长抗原蛋白的基因序列，并对其进行测序及鉴定。方法采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）从人舌鳞癌细胞株Tca8113中获取MAGE-A3蛋白编码基因，通过TA克隆后的酶切鉴定以及基因测序鉴... 目的从人舌鳞癌细胞株Tca8113中扩增出编码MAGE-A3全长抗原蛋白的基因序列，并对其进行测序及鉴定。方法采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）从人舌鳞癌细胞株Tca8113中获取MAGE-A3蛋白编码基因，通过TA克隆后的酶切鉴定以及基因测序鉴定MAGE-A3的正确性。结果（1）RT-PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果示，GeneRuler 100bp DNA Ladder的1031bp和900bp之间出现一条明显的目的条带，大小与附加了酶切位点的MAGE-A3目的片段大小相符。（2）双酶切可见大小约3000bp和1000bp的目的条带；单酶切可见大小约4000bp的目的条带，结果与预期相符。（3）经DNA SIS MAX分析软件比对分析，测序结果与Pubmed基因库中查询获得的人MAGE-A3序列一致，MAGE-A3提取成功。结论MAGE-A3的成功提取为进一步研究MAGE-A3抗原蛋白的表达及表达产物诱导特异性抗肿瘤免疫应答提供了实验基础，为抗肿瘤疫苗的研究提供了实验依据。 展开更多

关键词 肿瘤特异性 黑色素瘤相关抗原编码基因3 人舌鳞癌细胞

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中国不同地区和人群HDV　cDNA的筛选、克隆及抗原编码区基因异质性的分析 被引量：1

16

作者 谭文杰 詹美云 +2 位作者 易炎杰 毕胜利 苗季 《中国病毒学》 CSCD 1996年第3期244-250,共7页

为研究我国不同地区不同人群中ＨＤＶ毒株的感染分子特征，从我国河南、内蒙、北京、四川、广西、西藏、新疆、辽宁、上海等地的ＨＤＶ健康携带者、慢性丁肝病人与重症肝炎病人中筛选获得１０余份ＨＤＶ－ＲＮＡ阳性血清。经逆转录一多... 为研究我国不同地区不同人群中ＨＤＶ毒株的感染分子特征，从我国河南、内蒙、北京、四川、广西、西藏、新疆、辽宁、上海等地的ＨＤＶ健康携带者、慢性丁肝病人与重症肝炎病人中筛选获得１０余份ＨＤＶ－ＲＮＡ阳性血清。经逆转录一多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）交叉扩增获得ＨＤＶ抗原编码区的ｃＤＮＡ片段并克隆到ＰＧＥＭ－３Ｚｆ（－）或ＰＧＥＭ－Ｔ载体上，经序列分析研究其基因结构特点，结果表明：中国的ＨＤＶ毒株基因型均为Ⅰ型，但至少存在ⅠＡ、ⅠＢ两个亚型，ＨＤＶ毒株在不同地区间存在异质性，其中河南－１、－２、－３株及新疆株与台湾株同源性较高（核苷酸与氨基酸同源性分别大于９２．１％与８６．９％）．当为ⅠＡ型；内蒙－１、四川、广西、西藏－１、辽宁、北京株与美国－１株同源性较高（核苷酸与氨酸同源性分别大于９４．３％与８８．８％），当为ⅠＢ亚型；上海株与意大利株的核昔酸同源性最高，为９８．１％。研究证明我国新疆、内蒙、西藏等地区抗ＨＤ阳性率比其他省市高并不是由于存在其他基因型所致。 展开更多

关键词 丁型肝炎病毒 CDNA 抗原编码区基因

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日本血吸虫抗原表位编码基因重组质粒的高效构建与鉴定

17

作者 杨艳芬 张蕾 +6 位作者 赵嘉庆 杨雪 杨江华 朱翔 苏川 张兆松 吴观陵 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期809-812,共4页

目的探索用一种新方法—胶内连接法,快速构建日本血吸虫抗原表位编码基因重组表达载体,高效克隆及表达日本血吸虫抗原表位,用于疫苗候选分子的筛选。方法将pUMCV质粒载体用SalI和EcoRI双酶切,酶切产物于低熔点胶中电泳,紫外灯下割取含... 目的探索用一种新方法—胶内连接法,快速构建日本血吸虫抗原表位编码基因重组表达载体,高效克隆及表达日本血吸虫抗原表位,用于疫苗候选分子的筛选。方法将pUMCV质粒载体用SalI和EcoRI双酶切,酶切产物于低熔点胶中电泳,紫外灯下割取含酶切载体的条带。取一定量割取的低熔点胶,直接将其与合成的单个抗原表位编码基因或者是两个不同抗原表位编码基因进行连接。连接产物转化感受态菌DH5α。挑选阳性克隆进行双酶切、电泳及测序鉴定。结果单个抗原表位或两个不同的表位编码基因被成功地插入真核表达载体。结论采用胶内连接法直接在低熔点胶存在的条件下进行插入基因片段与质粒载体的连接,快速高效地获得了多个单一或组合抗原表位编码基因重组质粒,为进一步筛选日本血吸虫疫苗分子奠定了基础。 展开更多

关键词 日本血吸虫 抗原表位编码基因 重组质粒 高效克隆

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猪轮状病毒vp4基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达 被引量：4

18

作者 宋岩 师东方 +3 位作者 樊琛 刘胜旺 魏华 李一经 《中国病毒学》 CSCD 2005年第1期61-64,共4页

本研究扩增猪轮状病毒中国分离株 JL94株VP4蛋白主要抗原编码区基因(1 756 bp),将测序结果与国外分离株进行比较;将该基因片段同载体pMel BacA连接后,与杆状病毒DNA共转染入昆虫细胞Sf9,经蚀斑筛选纯化重组病毒并再感染Sf9细胞获得 vp4... 本研究扩增猪轮状病毒中国分离株 JL94株VP4蛋白主要抗原编码区基因(1 756 bp),将测序结果与国外分离株进行比较;将该基因片段同载体pMel BacA连接后,与杆状病毒DNA共转染入昆虫细胞Sf9,经蚀斑筛选纯化重组病毒并再感染Sf9细胞获得 vp4 基因的表达,对表达的 VP4 蛋白进行 Western blot分析和血清中和抗体试验。结果表明:JL94株VP4主要抗原编码区基因与国外分离株 CRW 8 株、Gottfried株该基因片段氨基酸同源性分别为96.43%和67%,说明 JL94株与 CRW 8 株属同一 VP4 血清型,而与 Gottfried株属不同血清型。JL94 株VP4主要抗原编码区氨基酸最大变异处位于 aa81 aa207。vp4 基因在昆虫细胞中表达量占细胞总蛋白的 20%,Western Blot证实表达蛋白有良好的生物学活性。所表达的蛋白免疫小鼠产生中和抗体,阻断 JL94 在 MA104 细胞上引起的细胞病变。 展开更多

关键词 猪轮状病毒 VP4基因 主要抗原编码区基因 克隆 真核表达

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恶性疟原虫MSA2编码基因分枝杆菌穿梭质粒的构建及序列测定

19

作者 吴少庭 高世同 +2 位作者 林敏 张仁利 梁驹卿 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2002年第1期18-20,共3页

目的　构建恶性疟原虫 FCC- 1/ HN株 MSA2编码基因分枝杆菌穿梭质粒重组子 p BCG5 .6 / MSA2 ,并进行序列测定。　方法　根据恶性疟原虫 MSA2编码基因的两侧序列设计引物 ,采用 PCR技术扩增出 MSA2编码基因全长片段 ,经低熔点琼脂糖挖... 目的　构建恶性疟原虫 FCC- 1/ HN株 MSA2编码基因分枝杆菌穿梭质粒重组子 p BCG5 .6 / MSA2 ,并进行序列测定。　方法　根据恶性疟原虫 MSA2编码基因的两侧序列设计引物 ,采用 PCR技术扩增出 MSA2编码基因全长片段 ,经低熔点琼脂糖挖块法回收纯化后 ,插入分枝杆菌穿梭质粒 p BCG5 .6 / MSA2 ,并转化大肠杆菌 DH5 α,快速酚法初筛阳性重组子 ,阳性克隆以 PCR法与限制性酶切分析鉴定后 ,双脱氧链终止法双向进行序列测定。　结果　从恶性疟原虫基因组中扩增出约 82 0 bp的基因片段 ,所构建 p BCG5 .6 / MSA2重组体阳性克隆经双酶切和 PCR鉴定与预期结果一致 ,测序结果确证了插入片段的正确性。　结论　成功构建了恶性疟原虫 MSA2编码基因分枝杆菌穿梭表达质粒 ,为恶性疟 BCG疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 恶性疟原虫 裂殖子表面抗原-2编码基因 克隆 序列分析

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