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自外周血记忆B细胞体外活化和分化抗原特异性浆细胞的方法研究 被引量：1
1
作者 毕冬梅 韩晓建 +2 位作者 石佳宁 刘晔 金艾顺 《国际免疫学杂志》 CAS 2015年第4期305-310,共6页
目的建立自人外周血淋巴细胞（PBMCs）中的记忆B细胞活化和分化特异性抗体分泌细胞（如浆细胞）的体外活化方法，为抗体药物研发提供研究基础。方法采集两名接种过乙型肝炎疫苗3年和25年健康成年志愿者（z和L）外周血，分离PBMCs，通过... 目的建立自人外周血淋巴细胞（PBMCs）中的记忆B细胞活化和分化特异性抗体分泌细胞（如浆细胞）的体外活化方法，为抗体药物研发提供研究基础。方法采集两名接种过乙型肝炎疫苗3年和25年健康成年志愿者（z和L）外周血，分离PBMCs，通过白细胞介素（IL）-2、IL-4和Toll样受体诱导剂（CpG、R848）体外诱导活化记忆B细胞。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测培养上清中总抗体和HBsAg特异性抗体的含量；通过酶联免疫斑点试验（ELISPOT）检测培养细胞中总抗体分泌细胞（ASC）数量的变化和HBsAg特异性抗体细胞数量。结果活化第6天，对照组和两个活化组[CpGDNA2006联合IL-2（C组）和R848联合IL-2（R组）]细胞培养上清总免疫球蛋白（Ig）G浓度分别为37．06ng／mL、80．87ng／mL和85．97ng／mL，两个活化组（C组和R组）均明显高于对照组（t=23．318，60．639，P均〈0．05）。ELISPOT检测ASC数量，结果显示，C组和R组数量均多于对照组，并且R组明显多于C组。两种活化方法均能在体外诱导B细胞活化，但R组活化效果更佳，确立R组为最佳活化方法。用该方法活化两名乙型肝炎疫苗接种者PBMCs，ELISA检测活化组特异性抗体浓度，R组显著高于对照组（t=5．031，11．561，P均〈0．05）。不同细胞数量诱导的分组，ELISPOT检测HBsAg特异性抗体分泌细胞数量，R组均明显多于对照组。结论确立诱导剂R848和细胞因子IL-2联合能够有效地诱导外周血记忆B细胞体外活化和分化抗原特异性浆细胞，为今后抗体药物研发提供了研究基础。 展开更多
关键词 外周血单个核细胞 记忆B淋巴细胞 体外活化 抗原特异性浆细胞
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