人源Fab抗体库的构建和抗hPRLR抗体的筛选鉴定 被引量：1

1

作者 屈芫 魏钦俊 +4 位作者 姚俊 鲁雅洁 王天明 曹新 冯振卿 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期489-492,496,共5页

目的构建人源Fab噬菌体抗体库,筛选抗hPRLR抗体片段并进行初步鉴定。方法从乳腺癌患者外周血提取总RNA,通过RT-PCR扩增人抗体轻链和重链基因,构建抗hPRLR人源Fab抗体库。分别以His-hPRLR融合蛋白、BSA-hPRLR表位多肽融合蛋白和GST-hPRL... 目的构建人源Fab噬菌体抗体库,筛选抗hPRLR抗体片段并进行初步鉴定。方法从乳腺癌患者外周血提取总RNA,通过RT-PCR扩增人抗体轻链和重链基因,构建抗hPRLR人源Fab抗体库。分别以His-hPRLR融合蛋白、BSA-hPRLR表位多肽融合蛋白和GST-hPRLR融合蛋白作为抗原包板,经过3轮循环的吸附-洗脱-扩增的筛选及1轮交叉筛选,挑单克隆用Phage-ELISA、DNA测序筛选阳性克隆,将筛选到的阳性克隆FabG2转化至Top10’受体菌,诱导表达可溶性Fab抗体,通过Western blot和ELISA进行特异性的鉴定。结果构建的人源Fab库容为1.0×109,4轮的筛选,获得6株能与hPRLR结合的人源抗体克隆。选取的FabG2能够进行可溶性Fab抗体蛋白的表达,ELISA初步鉴定,能够与hPRLR进行特异性地结合。结论成功构建了人源Fab噬菌体抗体库,筛选并鉴定了1株抗hPRLR Fab抗体的克隆。hPRLR特异性Fab抗体的获得将为高表达hPRLR乳腺癌的生物免疫治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 人催乳素受体 抗体fab’段 人源化抗体

下载PDF 职称材料

大容量天然人源Fab抗体库的构建及日本血吸虫抗独特型抗体的筛选、鉴定 被引量：5

2

作者 张慧林 焦永军 +2 位作者 朱进 冯振卿 管晓虹 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期737-740,共4页

目的:构建大容量天然人源Fab抗体库,筛选全人源日本血吸虫抗独特型抗体并进行初步鉴定。方法:采集15位健康成人的骨髓淋巴细胞,构建天然人源Fab抗体库。并以日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)及成虫抗原(SWAP)免疫鼠血清IgG包板进行筛选,经... 目的:构建大容量天然人源Fab抗体库,筛选全人源日本血吸虫抗独特型抗体并进行初步鉴定。方法:采集15位健康成人的骨髓淋巴细胞,构建天然人源Fab抗体库。并以日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)及成虫抗原(SWAP)免疫鼠血清IgG包板进行筛选,经ELISA鉴定后,对阳性克隆进行可溶性表达。结果:构建了2×109大容量天然人源Fab抗体库,经核苷酸序列分析,证实插入片段为Fab基因片断。经过6轮筛选后,从富集的次级抗体库中随机挑取80个克隆,用ELISA法鉴定得到4个可与免疫鼠血清(Ab1)特异性结合,而不与SEA及SWAP结合的单克隆抗体(C12、C19、D1、D2),其中C12经SDS-PAGE电泳显示插入片断正确。结论:成功构建了大容量天然人源Fab抗体库,并从中获得人源日本血吸虫抗独特型抗体C12,为研制用于人体血吸虫病免疫预防的抗独特型抗体疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 日本血吸虫 噬菌体抗体库 抗独特型抗体 抗体fab段

下载PDF 职称材料

人天然Fab段噬菌体抗体库的构建及初步鉴定 被引量：5

3

作者 马小兵 畅继武 +2 位作者 王海涛 王馨 马腾骧 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期206-209,共4页

目的构建人天然Fab段噬菌体抗体库,建立人源抗体制备技术平台,为恶性肿瘤的免疫治疗提供新方法。方法从一个健康献血员取200ml新鲜血液,分离淋巴细胞,提取总RNA,逆转录合成cDNA,PCR扩增抗体轻链和重链Fd段cDNA,依次将PCR产物插入载体pCo... 目的构建人天然Fab段噬菌体抗体库,建立人源抗体制备技术平台,为恶性肿瘤的免疫治疗提供新方法。方法从一个健康献血员取200ml新鲜血液,分离淋巴细胞,提取总RNA,逆转录合成cDNA,PCR扩增抗体轻链和重链Fd段cDNA,依次将PCR产物插入载体pComb3相应位点,电穿孔转化感受态大肠杆菌XL1-Blue,加入辅助噬菌体VCSM13产生噬菌体抗体库,酶切和PCR鉴定有无插入片段,用白蛋白和IL-2作为抗原进行筛选富集。结果部分重链Fd片段、部分κ轻链和λ轻链cDNA得到扩增。Fab表达库容达约1·2×106,酶切和PCR显示有插入片段。用不同蛋白进行几轮筛选,抗体库得到了不同程度的富集。结论本研究构建的人天然Fab段噬菌体抗体库可为进一步筛选特异性抗体,用于免疫治疗打下基础。 展开更多

关键词 噬菌体抗体库 抗体fab段 抗体工程

下载PDF 职称材料

人源日本血吸虫Fab抗体库的构建及抗独特型抗体的筛选、鉴定 被引量：2

4

作者 岳国峰 张慧林 +3 位作者 焦永军 朱进 冯振卿 管晓虹 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期997-1000,共4页

目的:构建人源日本血吸虫Fab抗体库,筛选出日本血吸虫抗独特型抗体并进行初步鉴定。方法:以3名晚期血吸虫患者切除的脾脏为源,构建人源日本血吸虫Fab抗体库。并以日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)及成虫抗原(SWAP)免疫鼠血清IgG包板进行筛... 目的:构建人源日本血吸虫Fab抗体库,筛选出日本血吸虫抗独特型抗体并进行初步鉴定。方法:以3名晚期血吸虫患者切除的脾脏为源,构建人源日本血吸虫Fab抗体库。并以日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)及成虫抗原(SWAP)免疫鼠血清IgG包板进行筛选,经ELISA鉴定后,对阳性克隆进行可溶性表达。结果:构建了人源日本血吸虫Fab抗体库,库容为4.3×106,经核苷酸序列分析,证实插入片段为Fab基因片断。经过5轮筛选后,从富集的次级抗体库中随机挑取60个克隆,用ELISA法鉴定得到4个可与免疫鼠血清(Ab1)特异性结合,而不与SEA及SWAP结合的单克隆抗体(A3、B6、C4、C17),其中B6经SDS-PAGE电泳显示插入片断正确。结论:成功构建了人源日本血吸虫Fab抗体库,并从中获得人源日本血吸虫抗独特型抗体B6,为研制用于人体血吸虫病免疫预防的抗独特型抗体疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 日本血吸虫 噬菌体抗体库 抗独特型抗体 抗体fab段

下载PDF 职称材料

人天然Fab段噬菌体抗体库的构建 被引量：2

5

作者 马小兵 畅继武 +2 位作者 王海涛 王馨 马腾骧 《山东医药》 CAS 北大核心 2005年第35期12-14,共3页

目的通过构建人天然F ab段噬菌体抗体库为恶性肿瘤的免疫治疗提供新方法。方法取4个健康献血员新鲜血液各200m l,分离淋巴细胞,提取总RNA,经逆转录合成cDNA,设计多对引物,以PCR扩增抗体轻链和重链Fd段cDNA。轻链PCR产物和质粒载体pCom b... 目的通过构建人天然F ab段噬菌体抗体库为恶性肿瘤的免疫治疗提供新方法。方法取4个健康献血员新鲜血液各200m l,分离淋巴细胞,提取总RNA,经逆转录合成cDNA,设计多对引物,以PCR扩增抗体轻链和重链Fd段cDNA。轻链PCR产物和质粒载体pCom b3经SacⅠ和X baⅠ酶切,由T 4 DNA连接酶连接,电穿孔转化感受态大肠杆菌XL 1-B lue,扩增后提取质粒,构建轻链库。轻链库和重链Fd段PCR产物经X hoⅠ和SpeⅠ酶切,同样方法连接转化XL 1-B lue,加入辅助噬菌体VCSM 13产生噬菌体抗体全库。酶切鉴定轻链库和全库有无插入片段。结果提取的淋巴细胞总RNA质量好,部分重链Fd片段、部分κ轻链和λ轻链cDNA得到扩增。F ab全库库容达5.4×106,酶切证实有插入片段。结论本研究构建的人天然F ab段噬菌体抗体库可为进一步筛选特异性抗体及从肿瘤组织中提取肿瘤抗原用于免疫治疗奠定基础。 展开更多

关键词 噬菌体抗体库 抗体fab段 抗体工程

下载PDF 职称材料

人源化Fab段噬菌体抗体库的构建及初步鉴定 被引量：2

6

作者 公倩 李常颖 +1 位作者 畅继武 朱铁虹 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期646-650,共5页

目的:构建人天然Fab段噬菌体抗体库,为人源抗体的制备建立技术平台。方法:从正常健康人的外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增人抗体轻链和重链Fd段基因,构建噬菌体抗体库,酶切鉴定有无插入片段并测序分析,用IL-2和地高辛进行... 目的:构建人天然Fab段噬菌体抗体库,为人源抗体的制备建立技术平台。方法:从正常健康人的外周血淋巴细胞中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增人抗体轻链和重链Fd段基因,构建噬菌体抗体库,酶切鉴定有无插入片段并测序分析,用IL-2和地高辛进行富集筛选。结果:最终构建的抗体库库容约为8.4×107,酶切鉴定显示有插入片段,抗体库重组率是70%,DNA测序分析证实抗体重链属IgG亚类,轻链为λ链。用IL-2和地高辛进行三轮筛选,抗体库均得到了不同程度的富集。结论:成功构建了一个天然的人源化噬菌体抗体库,可用于下一步胰淀素人源化抗体的筛选、纯化和表达。 展开更多

关键词 噬菌体抗体库 抗体fab段 人源化抗体

下载PDF 职称材料

人源性大肠癌Fab段噬菌体抗体库的筛选与鉴定

7

作者 孙逊 吴保平 +2 位作者 肖冰 张振书 赖卓胜 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2002年第2期139-143,共5页

目的　通过大肠癌组织及体外培养的大肠癌细胞抗原对人源性大肠癌Fab段噬菌体抗体原始库的反复筛选 ,鉴定抗体库的特性并检测其与人大肠癌相关抗原的结合活性。方法　PCR鉴定阳性重组菌xL1 B1ue中人大肠癌相关抗体Fab段的插入率 ,构建... 目的　通过大肠癌组织及体外培养的大肠癌细胞抗原对人源性大肠癌Fab段噬菌体抗体原始库的反复筛选 ,鉴定抗体库的特性并检测其与人大肠癌相关抗原的结合活性。方法　PCR鉴定阳性重组菌xL1 B1ue中人大肠癌相关抗体Fab段的插入率 ,构建人大肠癌Fab段原始库 ,提取 3例用于构建原始抗体库的致敏大肠癌组织抗原 ,13例非致敏大肠癌组织抗原及 3种体外培养的大肠癌细胞株Lovo、HT 2 9、LS 174T的抗原各自等体积混合 ,利用 3组混合抗原分别对原始抗体库进行 3轮筛选 ,将筛选后的三个三级库等体积混和后通过ELISA法鉴定其与人大肠癌组织及体外培养的大肠癌细胞的结合活性 ,取胃癌、食管癌及正常肠粘膜组织和体外培养的胃癌、肝癌细胞进行对照研究。结果　N片段及κ链的插入率分别为 40 %和 70 % ,Fd片段及κ链均插入质粒Pcomb3的重组率为 2 8% ,Fab段基因库库容为 2 .1× 10 6,3组大肠癌混合抗原分别对原始抗体库进行 3轮筛选后 ,抗体库均得到了不同程度的富集 ,ELISA显示富集后的Fab段抗体库对大肠癌组织及体外培养的大肠癌细胞均有较特异性的结合活性。结论　利用噬菌体抗体库技术筛选出了相关抗大肠癌Fab段抗体 。 展开更多

关键词 筛选 鉴定 噬菌体抗体库 大肠癌 抗体fab段

下载PDF 职称材料

人源抗EV71病毒中和表位SP70的Fab抗体研制

8

作者 余艳琼 翁育伟 严延生 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期683-688,共6页

目的构建人源抗EV71病毒Fab噬菌体抗体库,筛选具有中和活性的人源单克隆抗体,为EV71感染引起的手足口病临床诊断及治疗奠定基础。方法从成人志愿者抗凝血中分离外周淋巴细胞,提取总RNA并逆转录为cDNA。以cDNA为模板,用人源IgG Fab段基... 目的构建人源抗EV71病毒Fab噬菌体抗体库,筛选具有中和活性的人源单克隆抗体,为EV71感染引起的手足口病临床诊断及治疗奠定基础。方法从成人志愿者抗凝血中分离外周淋巴细胞,提取总RNA并逆转录为cDNA。以cDNA为模板,用人源IgG Fab段基因引物扩增轻链及重链Fd区基因,分步克隆至pComb3载体,构建Fab噬菌体抗体库。以SP70为抗原对Fab噬菌体抗体库进行富集筛选,将获得的重组噬菌体感染XL1-Blue菌并诱导表达,用SP70对诱导表达的菌上清进行筛选。结果共获得3株轻、重链基因组合序列不同的克隆,且这3株Fab抗体可特异性结合SP70多肽。结论成功构建人源抗EV71病毒Fab噬菌体抗体库,并从中筛选出3株针对EV71病毒结构蛋白VP1上中和线性表位SP70的特异性人源Fab抗体,为研发新的手足口病诊断和治疗工具奠定基础。 展开更多

关键词 EV71病毒 手足口病 噬菌体展示技术 人源化抗体 抗体fab段 SP70

下载PDF 职称材料

人源性大肠癌Fab段噬菌体抗体库的免疫组化鉴定

9

作者 孙逊 吴保平 +2 位作者 肖冰 张振书 赖卓胜 《现代消化及介入诊疗》 2002年第1期8-11,共4页

目的鉴定基因工程抗体库技术构建的人源性大肠癌自然致敏噬菌体Fab段抗体库与人大肠癌组织及体外培养的大肠癌细胞的特异性结合活性。方法通过免疫组化的方法检测抗体库对人大肠癌标本及体外培养的大肠癌lovo细胞的结合活性,并取绒毛状... 目的鉴定基因工程抗体库技术构建的人源性大肠癌自然致敏噬菌体Fab段抗体库与人大肠癌组织及体外培养的大肠癌细胞的特异性结合活性。方法通过免疫组化的方法检测抗体库对人大肠癌标本及体外培养的大肠癌lovo细胞的结合活性,并取绒毛状腺瘤、胃癌、食管癌及正常肠粘膜组织和体外培养的胃癌、肝癌细胞进行对照研究。结果 30例大肠癌有22例发生了阳性反应:肠息肉、胃癌、食管癌、正常肠粘膜各取20例,发生阳性反应的分别为13例、5例、4例和1例,体外培养的胃癌、肝癌细胞未发生阳性反应。结论大肠癌噬菌体抗体库能较特异性地与人大肠癌组织及体外培养的大肠癌细胞结合。 展开更多

关键词 大肠癌 抗体fab段 噬菌体抗体库 免疫组化 鉴定

下载PDF 职称材料

人天然噬菌体抗体库的构建及抗gp96抗体的初步筛选

10

作者 马小兵 畅继武 +2 位作者 李成文 李慧忠 王馨 《中国综合临床》 2009年第2期124-127,共4页

目的构建人天然Fab段抗体库，并用从膀胱尿路上皮癌组织中提取纯化的gp96筛选抗gp96特异性抗体，为恶性肿瘤的免疫治疗提供新方法。方法取4个健康献血员新鲜血液各200ml，分离淋巴细胞，提取总RNA，经逆转录合成cDNA，设计多对引物，以... 目的构建人天然Fab段抗体库，并用从膀胱尿路上皮癌组织中提取纯化的gp96筛选抗gp96特异性抗体，为恶性肿瘤的免疫治疗提供新方法。方法取4个健康献血员新鲜血液各200ml，分离淋巴细胞，提取总RNA，经逆转录合成cDNA，设计多对引物，以PCR扩增抗体轻链和重链Fd段cDNA。轻链PCR产物和噬粒载体pComb3经Sac Ⅰ和Xba Ⅰ酶切，由T4 DNA连接酶连接，电穿孔转化感受态大肠杆菌XL1-Blue，扩增后提取噬粒，构建轻链库。轻链库和重链Fd段PCR产物经Xho Ⅰ和Spe Ⅰ酶切，以同样方法连接后转化XL1-Blue，加入辅助噬菌体VCSM13，产生噬菌体抗体全库。提取噬粒酶切鉴定轻链库和全库有无插入片段。分别以噬菌体全库和提取的噬粒为模板，以轻、重链不同引物组合进行PCR扩增。应用亲和层析和离子交换层析从膀胱癌组织中提取纯化gp96，并以此为抗原对构建的抗体库进行3轮筛选。结果提取的淋巴细胞总RNA及逆转录合成的cDNA质量好，部分重链Fd片段、部分κ轻链和λ轻链cDNA得到扩增。Fab全库库容达6．6×10^6，酶切和PCR显示有插入片段。用从膀胱尿路上皮癌组织中提取出的gp96进行3轮筛选，抗体库得到68倍的富集。结论本研究构建的人天然Fab段噬菌体抗体库可为进一步筛选特异性抗体、肿瘤免疫治疗打下基础。 展开更多

关键词 噬菌体抗体库 抗体fab段 GP96 膀胱尿路上皮癌

原文传递

人大肠癌抗体Fab段噬菌体呈现库及单克隆抗体的筛选及鉴定

11

作者 孙逊 吴保平 等 《胃肠病学》 2002年第B11期62-63,共2页

关键词 大肠癌 抗体fab段 噬菌体 呈现库 单克隆抗体 筛选 鉴定

下载PDF 职称材料

人大肠癌淋巴结抗体Fab段基因的扩增

12

作者 吴保平 张亚历 +4 位作者 肖冰 周殿元 赖卓胜 周京旭 王亚东 《现代消化及介入诊疗》 1999年第3期32-34,共3页

目的:从大肠癌病人淋巴结中扩增抗体Fab段重链(Fd)和轻链(k)基因。方法以一步法提取淋巴结总RNA,采用逆转录及PCR反应。反应产物以琼脂糖凝胶电泳观察。结果:扩增的Fd和k基因长度分别为850和700bP,相应肿瘤和正常切缘组织未见扩增。结论... 目的:从大肠癌病人淋巴结中扩增抗体Fab段重链(Fd)和轻链(k)基因。方法以一步法提取淋巴结总RNA,采用逆转录及PCR反应。反应产物以琼脂糖凝胶电泳观察。结果:扩增的Fd和k基因长度分别为850和700bP,相应肿瘤和正常切缘组织未见扩增。结论:Fab段重链(Fd)和连链(k)基因的成功扩增为大肠癌基因工程抗体的制备噬菌体抗体库的构建奠定丁基础。 展开更多

关键词 扩增 抗体fab段 淋巴结 人大肠癌 重链 基因 肿瘤 切缘组织 病人 噬菌体抗体库

下载PDF 职称材料

抗Siglec-9抗体Fab段对LPS诱导的小鼠巨噬细胞炎症反应的作用研究 被引量：1

13

作者 褚萨萨 高峰 +5 位作者 张东辉 付美丽 刘兴 徐成 张乃春 汪茂荣 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期563-567,573,共6页

目的初步探讨抗Siglec-9抗体Fab段在小鼠巨噬细胞上对LPS诱导的炎症反应的作用及其机制。方法将小鼠巨噬细胞分为对照组、LPS组、LPS+Ab组、Ab组,采用实时荧光定量PCR技术检测TNF-α、IFN-β、IL-1、IL-6等炎性细胞因子的mRNA水平;采用E... 目的初步探讨抗Siglec-9抗体Fab段在小鼠巨噬细胞上对LPS诱导的炎症反应的作用及其机制。方法将小鼠巨噬细胞分为对照组、LPS组、LPS+Ab组、Ab组,采用实时荧光定量PCR技术检测TNF-α、IFN-β、IL-1、IL-6等炎性细胞因子的mRNA水平;采用ELISA检测炎性细胞因子的蛋白水平;通过Western blot初步探讨抗Siglec-9抗体Fab段影响炎性细胞因子表达量的作用机制。结果与LPS组相比,抗Siglec-9抗体Fab段抑制炎性细胞因子的mRNA和蛋白水平,降低TLR4信号通路磷酸化水平。结论抗Siglec-9抗体Fab段通过阻断TLR4信号传导通路抑制炎性细胞因子的m RNA和蛋白水平,在感染性疾病中具有潜在的应用价值。 展开更多

关键词 Siglec-9 抗Siglec-9抗体fab段 巨噬细胞 炎性细胞因子

下载PDF 职称材料