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重组人源化单克隆抗体rhumAb1分子大小变异体的研究 被引量：1
1
作者 赵健 吴振华 +8 位作者 吕明 武志丹 刘晓 郭红红 陈瑾 苑新秋 陈黎 沈倍奋 张伯彦 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1897-1905,共9页
利用分子排阻高效液相色谱（SEC-HPLC）、非还原毛细管电泳（CE-SDS）并结合液质联用（LC-MS）、抗体依赖细胞介导的细胞毒活性检测（ADCC）等技术对重组人源化单克隆抗体（rhumAb1）在高温（40℃）条件下产生的分子大小变异体进行研究... 利用分子排阻高效液相色谱（SEC-HPLC）、非还原毛细管电泳（CE-SDS）并结合液质联用（LC-MS）、抗体依赖细胞介导的细胞毒活性检测（ADCC）等技术对重组人源化单克隆抗体（rhumAb1）在高温（40℃）条件下产生的分子大小变异体进行研究。本研究鉴定了rhumAb1在SEC-HPLC分析中的4个分子大小变异体（SEC-1-SEC-4）和非还原CE-SDS中的7个主要变异体（NR-1-NR-7）的组成和结构。发现主要的低分子量变异体（片段）是由于重链的铰链区断裂所致,断裂位于铰链的Ser221-Cys-Asp-Lys-Thr-His-Thr-Cys228区域,其中C222-D223和H226-T227为主要断裂位点。ADCC活性检测表明,rhumAb1分子大小变异体（二聚体和片段）显著降低了产品的活性。该研究为rhumAb1产品的质量标准和相应的质控策略的制定奠定了基础,也为其他抗体药物的质量控制提供了参考。 展开更多
关键词 单克隆抗体 分子大小变异体 分子排阻色谱 非还原毛细管电泳 抗体依赖细胞介导的细胞毒活性
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K562工程细胞联合IL-2扩增方案对人NK细胞扩增和活化的效果
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作者 叶琳洁 黄庆生 +4 位作者 李琦 张明杰 马旭东 杨慧 师俊玲 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期537-542,共6页
目的:评价新建立的K562工程细胞联合IL-2扩增方案对人NK细胞扩增和活化的效果。方法:采集健康志愿者和肿瘤患者的外周血PBMC并分离NK细胞,采用前期构建的K562工程细胞(将IL-15、4-1BBL和IL-18在白血病K562细胞上进行跨膜表达获取)联合I... 目的:评价新建立的K562工程细胞联合IL-2扩增方案对人NK细胞扩增和活化的效果。方法:采集健康志愿者和肿瘤患者的外周血PBMC并分离NK细胞,采用前期构建的K562工程细胞(将IL-15、4-1BBL和IL-18在白血病K562细胞上进行跨膜表达获取)联合IL-2培养方案对NK细胞进行扩增和活化,以流式细胞术检测NK细胞的扩增效果和NK细胞表面受体表达水平,CCK-8法检测扩增后NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性和ADCC活性,CCK-8法检测在培养方案扩增末期加入TKD多肽对NK细胞的活化效果。结果:对于健康志愿者的NK细胞,新建立扩增培养方案可使NK细胞在PBMC中的比例提高至(93±3)%;使NK细胞中活化性受体NKG2D、CD94、NKp30、NKp44和NKp46的比例分别提高60%、40%、20%、40%和63%,而抑制性受体的表达变化不大;扩增后NK细胞对白血病细胞K562、肺癌细胞A549、肝癌细胞SMMU-7721和乳腺癌细胞MCF-7的杀伤活性分别提高了19%、29%、26%和28%,其ADCC活性从(33±5.6)%上升至(65±12)%;方案中增加TKD可使NK细胞的杀伤活性从(86±4)%提高至(96±2)%。对于肿瘤患者的NK细胞,新扩增方案使其在PBMC的比例提高至(90.0±8.0)%,其对K562细胞的杀伤活性提高了17%左右。结论:K562工程细胞联合IL-2扩增方案可高效扩增NK细胞,明显激活其杀伤活性,扩增和活化的NK细胞可满足临床治疗的需要。 展开更多
关键词 自然杀伤细胞 细胞毒活性 抗体依赖性细胞介导的细胞毒活性 体外扩增 活化性受体 抑制性受体
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