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枯草芽胞杆菌Bs916突变体库的构建和抑制水稻细菌性条斑病菌相关基因的克隆 被引量：10
1
作者 周华飞 罗楚平 +2 位作者 王晓宇 张荣胜 陈志谊 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期2232-2239,共8页
【目的】采用转座子标签技术构建枯草芽胞杆菌Bs916突变体库,从突变体库中筛选对水稻细菌性条斑病菌抑菌效果发生显著变化的菌株并克隆插入位点的基因,获得生防菌Bs916中与抑制细菌活性可能相关的基因。【方法】携带转座子TnYLB-1的穿... 【目的】采用转座子标签技术构建枯草芽胞杆菌Bs916突变体库,从突变体库中筛选对水稻细菌性条斑病菌抑菌效果发生显著变化的菌株并克隆插入位点的基因,获得生防菌Bs916中与抑制细菌活性可能相关的基因。【方法】携带转座子TnYLB-1的穿梭载体pMarA通过化学转化方法转化至枯草芽胞杆菌Bs916菌株,构建随机插入突变体库。通过平板抑菌试验从突变体库中筛选对水稻细菌性条斑病菌抑菌效果得到显著提高和下降的突变体;并采用PCR和Southern Blot验证转座子是否成功插入到Bs916染色体基因组上,利用反向PCR技术克隆转座子插入位点基因、测序并进行生物信息学分析。【结果】成功构建了枯草芽胞杆菌Bs916的转座子随机插入的突变体库;PCR和Southern Blot结果表明转座子成功的插入到染色体基因组上,约85%突变体以单拷贝形式插入;筛选出30株对水稻细菌性条斑病菌抑制效果发生显著变化的菌株,克隆到21个突变体插入位点的基因序列并测序。生物信息学分析结果表明这些基因与感受态形成、生物膜形成和次生产物代谢相关。【结论】成功构建了Bs916突变体库,克隆到该库中对水稻细菌性条斑病菌抑菌效果显著变化菌株的突变位点基因,这些基因推测可能与枯草芽胞杆菌Bs916中的抑制细菌化合物的合成代谢及调控相关。 展开更多
关键词 枯草芽胞杆菌 突变株 水稻细菌性条斑病菌 抑菌基因 克隆
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三株海洋木霉的应用潜力 被引量：5
2
作者 李闯 张道敬 +2 位作者 罗远婵 张久明 田黎 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期690-700,共11页
【目的】探索3株海洋生境木霉的应用潜力。【方法】经过筛选和诱变,获得高抑菌活性及产孢量的木霉突变株;通过优化培养基、温度、初始p H考察其产孢量及最适培养条件;综合抑菌谱、重寄生及抑菌相关基因考察其抑菌活性;采用特殊培养基法... 【目的】探索3株海洋生境木霉的应用潜力。【方法】经过筛选和诱变,获得高抑菌活性及产孢量的木霉突变株;通过优化培养基、温度、初始p H考察其产孢量及最适培养条件;综合抑菌谱、重寄生及抑菌相关基因考察其抑菌活性;采用特殊培养基法考察其产纤维素酶、植酸酶、铁载体以及降解磷钾的能力,高效液相色谱法测定其产吲哚乙酸能力。【结果】3株木霉菌的产孢量分别为3.45×108、3.10×108和2.55×108 CFU/cm2,与野生型相比分别提高了88.52%、63.16%和180.22%;且均可产生厚垣孢子,其中XG20-1厚垣孢子产量最高,达到3.56×108 CFU/m L。3株木霉菌具有较广抑菌谱及对番茄早疫病菌的重寄生作用,同时扩增得到Tex1、Nag1、Eg1基因,生物学测试显示其均具有产纤维素酶、几丁质酶以及铁载体的能力,证明其抑菌活性是多种机制共同作用的结果;菌株可以降解磷钾,且吲哚乙酸产量分别为2.61、1.57和1.92 mg/L,具有促进植物生长的潜力。【结论】本文中3株木霉菌在开发为生防菌与生物肥料方面展现出良好的应用潜力。 展开更多
关键词 海洋生境木霉 抑菌与基因 多种酶活 降解磷钾
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瓦雷兹芽孢杆菌JK-XZ8对樱花根癌病的防效与抑菌物质初探 被引量：4
3
作者 张锡唐 吴小芹 陈飞 《山西农业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2020年第5期75-82,共8页
[目的]樱花根癌病近年对樱花产业的威胁日益严重,生产上亟需有效的防治措施。本研究旨在探讨瓦雷兹芽孢杆菌JK-XZ8的抑菌物质特性,同时测定其对樱花根癌病的田间防治效果。[方法]在平板拮抗测定菌株拮抗能力,通过酸沉淀提取该菌株的抑... [目的]樱花根癌病近年对樱花产业的威胁日益严重,生产上亟需有效的防治措施。本研究旨在探讨瓦雷兹芽孢杆菌JK-XZ8的抑菌物质特性,同时测定其对樱花根癌病的田间防治效果。[方法]在平板拮抗测定菌株拮抗能力,通过酸沉淀提取该菌株的抑菌粗提物;利用PCR技术检测该菌是否含有推测的抑菌物质合成相关基因,测定该抑菌粗提物在不同条件下的稳定性;采用根部蘸浆法测定瓦雷兹芽孢杆菌(Bacillus velezensis)JK-XZ8对田间樱花苗木的生防效果。[结果]瓦雷兹芽孢杆菌JK-XZ8对根癌土壤杆菌存在拮抗能力且可产生抑菌物质;经PCR检测该菌株含有脂肽类基因bmyB,ituD,fenD和聚酮类化合物基因PK1、PK2、PK3等抑菌物质合成相关基因。此外粗提得到的抑菌物质,在高温、酸、碱、蛋白酶K、3 h内的紫外线的处理条件下,仍保持较高活性。田间试验表明菌株JK-XZ8对樱花根癌病的防治效果可达50%,优于市场上使用的K84生物菌肥(24%)。[结论]瓦雷兹芽孢杆菌可以产生稳定的抑菌物质拮抗病原菌,是一株可用于樱花根癌病防治的有效生防菌株。 展开更多
关键词 樱花根癌病 瓦雷兹芽孢杆菌JK-XZ8 抑菌物质相关基因 抑菌物质 防治效果
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短小芽胞杆菌抑菌相关基因的高效克隆 被引量：3
4
作者 刘通 陈云鹏 +1 位作者 李琼洁 顾振芳 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期423-428,共6页
为有效挖掘生防短小芽胞杆菌Bacillus pumilus的抑菌相关基因,对DX01菌株进行了Solexa基因组扫描,并选取其中2个代表性基因TasA和Surf2,以DX01基因组DNA为模板,采用PCR方法对其进行克隆、序列比对及系统进化分析。结果表明,DX01菌株共得... 为有效挖掘生防短小芽胞杆菌Bacillus pumilus的抑菌相关基因,对DX01菌株进行了Solexa基因组扫描,并选取其中2个代表性基因TasA和Surf2,以DX01基因组DNA为模板,采用PCR方法对其进行克隆、序列比对及系统进化分析。结果表明,DX01菌株共得到4267个基因,有3145个具有明确生物学功能的蛋白。其中,与短小芽胞杆菌抑菌活性相关的基因(簇)有84个,包括2个细菌防御酶基因、2个细菌生物膜形成相关基因、1个信号转导基因、27个细胞壁降解或水解酶基因、15个抗生素合成或转运基因、4个抑菌蛋白基因、1个次生代谢物合成基因簇及32个细菌鞭毛生物合成与调控相关基因。TasA基因在芽胞杆菌属细菌中具有高度的保守性,各同源基因的序列相似性在92%以上;而Surf2基因的同源基因在该属细菌中具有一定的变异性,有的序列相似性低至73%。 展开更多
关键词 短小芽胞杆菌 Solexa扫描 抑菌相关基因
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