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扩展莫尼茨绦虫烯醇化酶基因的克隆及其组织表达差异分析 被引量:4
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作者 王利晓 薄新文 +1 位作者 张银亮 康立超 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期572-578,共7页
为了探索烯醇化酶基因在扩展莫尼茨绦虫生长发育中的作用,通过基因质粒文库克隆分析了扩展莫尼茨绦虫烯醇化酶基因mRNA的全长序列,同时应用SYBRGreenreal-timeRT-PCR方法检测了该基因在虫体4个不同发育阶段即头节、幼节、成节、孕节的... 为了探索烯醇化酶基因在扩展莫尼茨绦虫生长发育中的作用,通过基因质粒文库克隆分析了扩展莫尼茨绦虫烯醇化酶基因mRNA的全长序列,同时应用SYBRGreenreal-timeRT-PCR方法检测了该基因在虫体4个不同发育阶段即头节、幼节、成节、孕节的组织表达差异。序列分析结果表明,该基因全长1691bp,编码445个氨基酸,蛋白的理论分子质量为48.94ku,等电点为5.56,是含有螺旋和不规则卷曲较多的疏水性蛋白。相似性分析结果显示,其基因表达产物与肝片吸虫氨基酸的相似性达74.8%,属于磷酸丙糖异构酶磷酸盐结合蛋白家族。Real-timeRT-PCR结果表明烯醇化酶基因在虫体各发育阶段的表达丰度差异显著,其从高到低依次为成节、幼节、孕节和头节。据此推测该烯醇化酶基因在虫体寄生过程中对细胞内物质的代谢与能量的产生起关键作用。 展开更多
关键词 扩展莫尼茨绦虫 烯醇化酶基因 序列分析 实时定量反转录聚合酶链反应
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扩展莫尼茨绦虫wnt基因在虫体不同发育体节的差异表达 被引量:4
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作者 王正荣 张艳艳 +2 位作者 薄新文 徐雪平 徐春生 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2483-2492,共10页
研究扩展莫尼茨绦虫(Moniezia expansa)wnt基因家族wnt1、wnt2、wnt4、wnt5和wnt11B5个基因在虫体不同发育体节的差异表达及组织分布规律,为进一步揭示Wnt信号通路在扩展莫尼茨绦虫发育中的作用奠定基础。作者采用SYBR GreenⅠqRT-PCR... 研究扩展莫尼茨绦虫(Moniezia expansa)wnt基因家族wnt1、wnt2、wnt4、wnt5和wnt11B5个基因在虫体不同发育体节的差异表达及组织分布规律,为进一步揭示Wnt信号通路在扩展莫尼茨绦虫发育中的作用奠定基础。作者采用SYBR GreenⅠqRT-PCR方法分析了wnt1、wnt2、wnt4、wnt5和wnt11B在虫体头颈节、幼节、成节和孕节的mRNA相对转录情况;采用核酸原位杂交方法分析上述5个基因在虫体头颈节、幼节、成节和孕节的mRNA分布情况。结果显示,wnt基因家族成员在虫体各发育体节均有表达,wnt1、wnt4、wnt5和wnt11B基因在虫体头颈节的mRNA转录水平相对较高,而在虫体孕节的mRNA转录水平最低;与之相反,wnt2基因在虫体头颈节的mRNA转录水平最低,而在虫体幼节的转录水平较高。原位杂交的结果表明,在虫体的头颈节,wnt基因主要表达于虫体的吸盘部位;在幼节和孕节,主要表达于虫体的节间腺,而在成节,wnt基因在虫体的雌雄生殖系统(如卵巢、睾丸)均有表达,并且在虫体的节间腺以及表皮也有一定的表达。综上,扩展莫尼茨绦虫5个wnt基因在虫体头颈节以及幼节的mRNA转录水平较高,且在虫体的吸盘、节间腺以及雌雄生殖细胞均有分布,因此初步推测Wnt信号通路可能参与扩展莫尼茨绦虫体节以及生殖细胞的发育过程,当然这一假说还有待进一步验证。 展开更多
关键词 扩展莫尼茨绦虫 节片发育 wnt基因家族 差异表达
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畜禽绦虫病的检疫及防治措施
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作者 叶文华 张旭东 《畜牧兽医科技信息》 2015年第11期36-37,共2页
1草食家畜绦虫病 草食家畜绦虫病是由裸头科的一些绦虫寄生于草食家畜的肠道内所引起的一类绦虫病。本病呈世界性分布,地方性流行,是幼畜的重要寄生虫病之一。牛、羊绦虫病的病原,主要有扩展莫尼茨绦虫、贝氏莫尼茨绦虫、盖氏曲子宫绦... 1草食家畜绦虫病 草食家畜绦虫病是由裸头科的一些绦虫寄生于草食家畜的肠道内所引起的一类绦虫病。本病呈世界性分布,地方性流行,是幼畜的重要寄生虫病之一。牛、羊绦虫病的病原,主要有扩展莫尼茨绦虫、贝氏莫尼茨绦虫、盖氏曲子宫绦虫及中点无卵黄腺绦虫,寄生于牛羊的小肠,常呈混合性感染。马属动物绦虫病的病原,主要有大裸头绦虫、叶状裸头绦虫和侏儒副裸头绦虫。 展开更多
关键词 叶状裸头绦虫 侏儒副裸头绦虫 盖氏曲子宫绦虫 裸头科 贝氏莫尼茨绦虫 扩展莫尼茨绦虫 绦虫 草食家畜 马属动物 孕卵节片
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基于ITS基因分析扩展莫尼茨绦虫种系发育关系 被引量:3
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作者 侯强红 李进军 《经济动物学报》 CAS 2019年第2期107-109,114,共4页
为研究扩展莫尼茨绦虫分离株核糖体ITS序列的遗传变异情况,并利用ITS序列探讨扩展莫尼茨绦虫与其它带科绦虫的种群发育关系,本研究利用PCR对扩展莫尼茨绦虫分离株核糖体ITS序列进行扩增、测序及分析。结果表明:16株扩展莫尼茨绦虫分离... 为研究扩展莫尼茨绦虫分离株核糖体ITS序列的遗传变异情况,并利用ITS序列探讨扩展莫尼茨绦虫与其它带科绦虫的种群发育关系,本研究利用PCR对扩展莫尼茨绦虫分离株核糖体ITS序列进行扩增、测序及分析。结果表明:16株扩展莫尼茨绦虫分离株核糖体ITS序列长度一致,为1462~1473bP,且分离株与基因库扩展莫尼茨绦虫位于同一大分支,可以与其它带科绦虫有效鉴别。说明ITS序列种内较为保守,种间差异较大,可以作为扩展莫尼茨绦虫的种间遗传变异研究的分子标记。 展开更多
关键词 扩展莫尼茨绦虫 核糖体DNA ITS基因 序列分析 种系发育关系
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用SMART技术构建扩展莫尼茨绦虫成虫全长cDNA文库 被引量:2
5
作者 张慧 赵文娟 +2 位作者 韩猛立 王新华 薄新文 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第7期51-55,共5页
利用SMART(switching mechanismat 5′end of RNA transcript)技术,采用Clontech公司的SMARTTMcDNALi-brary Construction Kit构建扩展莫尼茨绦虫成虫全长cDNA文库。用Trizol Reagent提取总RNA,用Oligotex mRNA Kits分离mRNA,以逆转录酶... 利用SMART(switching mechanismat 5′end of RNA transcript)技术,采用Clontech公司的SMARTTMcDNALi-brary Construction Kit构建扩展莫尼茨绦虫成虫全长cDNA文库。用Trizol Reagent提取总RNA,用Oligotex mRNA Kits分离mRNA,以逆转录酶PowerScriptTM合成第一链cDNA,通过LD-PCR合成并扩增双链cDNA;扩增产物经蛋白酶K消化、SfiⅠ酶切、过SPIN-400TM柱去除小片段,连接到SfiⅠ消化过的pBluescriptⅡSK*质粒载体中,最后将重组质粒转化到E.coliDH5α内得到原始文库,扩增后,将文库保存于96孔细胞培养板中。经测定,构建的cDNA文库滴度为2.52×105PFU/mL;重组率为94.7%,插入片段长度多在0.5~3kb之间,平均长度约1.2kb。经5′端测序获得2642条有效序列,归并为1081条unigene。结果表明成功构建了扩展莫尼茨绦虫成虫全长cDNA文库,获得了较丰富的扩展莫尼茨绦虫成虫表达基因,为筛选扩展莫尼茨绦虫的功能基因全长序列奠定了基础。 展开更多
关键词 扩展莫尼茨绦虫 CDNA文库 SMART
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扩展莫尼茨绦虫烯醇化酶基因的原核表达及抗原性鉴定 被引量:3
6
作者 夏党荣 陈南颖 +3 位作者 马勋 薄新文 何延华 康立超 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期241-243,250,共4页
为表达扩展莫尼茨绦虫(Moniezia expansa)的烯醇化酶(Enolase),本研究采用RT-PCR方法以M.expansa组织总RNA为模板扩增enolase基因,将其克隆到原核表达载体pET-28a中,并转化BL21(DE3)感受态细胞,以IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE结果显示表... 为表达扩展莫尼茨绦虫(Moniezia expansa)的烯醇化酶(Enolase),本研究采用RT-PCR方法以M.expansa组织总RNA为模板扩增enolase基因,将其克隆到原核表达载体pET-28a中,并转化BL21(DE3)感受态细胞,以IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE结果显示表达的重组Enolase约为47 ku。Western blot分析表明,天然蛋白能够被重组表达产物免疫小鼠的血清识别,出现两条免疫印记条带,即天然蛋白以两种形式(约47 ku和40 ku)存在,并具有抗原性,为该蛋白功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 扩展莫尼茨绦虫 烯醇化酶基因 原核表达 抗原性
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扩展莫尼茨绦虫膜联蛋白B3基因组织表达差异分析 被引量:3
7
作者 王正荣 赵文娟 +1 位作者 王新华 薄新文 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1864-1869,共6页
【目的】探索膜联蛋白B3(Annexins B3)基因在扩展莫尼茨绦虫生长发育中的作用。【方法】研究以beta-Tubulin基因作为内参基因,采用SYBR Green real-time RT-PCR方法检测该基因在扩展莫尼茨绦虫四个不同发育阶段即头节、幼节、成节、孕... 【目的】探索膜联蛋白B3(Annexins B3)基因在扩展莫尼茨绦虫生长发育中的作用。【方法】研究以beta-Tubulin基因作为内参基因,采用SYBR Green real-time RT-PCR方法检测该基因在扩展莫尼茨绦虫四个不同发育阶段即头节、幼节、成节、孕节中的表达差异。【结果】标准曲线分析显示,Annexins B3和beta-Tubulin基因的Ct值与阳性质粒的浓度均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.991,溶解曲线分析表明,产物为特异的单峰,具有较高的特异性。【结论】膜联蛋白B3基因在虫体个发育阶段中的表达丰度存在差异,从高到低依次为孕节、头节、成节、幼节。 展开更多
关键词 ANNEXINS B3 扩展莫尼茨绦虫 RT-PCR 差异表达
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扩展莫尼茨绦虫不同体节翻译延伸因子和引发酶mRNA转录水平研究 被引量:3
8
作者 王正荣 薄新文 +1 位作者 赵文娟 康立超 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期250-252,共3页
本研究以β微管蛋白基因作为内参基因,采用实时荧光定量PCR方法检测该基因在扩展莫尼茨绦虫(Moniezia expansa)4个不同发育阶段,即头节、幼节、成节和孕节中的表达差异。标准曲线分析显示,翻译延伸因子、引发酶基因和β微管蛋白基因标... 本研究以β微管蛋白基因作为内参基因,采用实时荧光定量PCR方法检测该基因在扩展莫尼茨绦虫(Moniezia expansa)4个不同发育阶段,即头节、幼节、成节和孕节中的表达差异。标准曲线分析显示,翻译延伸因子、引发酶基因和β微管蛋白基因标准质粒实时定量扩增Ct值与标准质粒的浓度均呈良好的线性关系,相关系数(R2)均大于0.99。同时实验结果显示,翻译延伸因子和引发酶基因在虫体各发育阶段中的转录水平存在差异。其中,翻译延伸因子和引发酶基因在扩展莫尼茨绦虫头节和幼节的转录水平均较高,提示这2个基因可能在头节和幼节的发育中有重要作用。 展开更多
关键词 扩展莫尼茨绦虫 翻译延伸因子 引发酶 mRNA转录水平
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扩展莫尼茨绦虫不同体节电压门控性钙通道β亚基和胶原纤维mRNA转录水平的研究 被引量:3
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作者 王正荣 薄新文 +2 位作者 赵文娟 何延华 康立超 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期566-571,共6页
为了研究电压门控性钙通道β亚基和胶原纤维基因在扩展莫尼茨绦虫不同体节的mRNA转录水平,以beta-Tubulin基因作为内参基因,采用SYBR Green real-time RT-PCR方法检测该基因在扩展莫尼茨绦虫4个不同发育阶段即头节、幼节、成节、孕节中... 为了研究电压门控性钙通道β亚基和胶原纤维基因在扩展莫尼茨绦虫不同体节的mRNA转录水平,以beta-Tubulin基因作为内参基因,采用SYBR Green real-time RT-PCR方法检测该基因在扩展莫尼茨绦虫4个不同发育阶段即头节、幼节、成节、孕节中的表达差异。结果显示,电压门控性钙通道β亚基、胶原纤维基因和beta-Tubulin基因的Ct值与阳性质粒的浓度均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.99;熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰,具有较高的特异性。试验结果表明,电压门控性钙通道β亚基以及胶原纤维基因在虫体各发育阶段中的表达丰度存在差异。电压门控性钙通道β亚基在幼节的表达水平较高,而胶原纤维基因在孕节的表达水平较高,提示这2个基因可能在幼节和孕节的发育中有重要作用。 展开更多
关键词 扩展莫尼茨绦虫 电压门控性钙通道β亚基 胶原纤维 mRNA转录水平
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绵羊莫尼茨绦虫的防治 被引量:1
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作者 井波 赵爱云 《黑龙江畜牧兽医(下半月)》 CAS 2009年第1期88-89,共2页
莫尼茨绦虫包括贝氏莫尼茨绦虫和扩展莫尼茨绦虫,成虫长约4~10米,宽1.6厘米,寄生于牛羊等反刍动物的小肠内,夺取大量的营养,严重影响动物的生长发育,对羔羊和犊牛的危害严重,有时甚至造成死亡。莫尼茨绦虫体在牛羊和地螨之间形成循环,... 莫尼茨绦虫包括贝氏莫尼茨绦虫和扩展莫尼茨绦虫,成虫长约4~10米,宽1.6厘米,寄生于牛羊等反刍动物的小肠内,夺取大量的营养,严重影响动物的生长发育,对羔羊和犊牛的危害严重,有时甚至造成死亡。莫尼茨绦虫体在牛羊和地螨之间形成循环,牛羊将虫卵或孕节随粪便排出体外,虫卵被地螨吞食后,在其体内逸出六钩蚴。 展开更多
关键词 莫尼 贝氏莫尼茨绦虫 扩展莫尼茨绦虫 孕节 六钩蚴 似囊尾蚴 硫双二氯酚 感染性 虫体 孕卵节片
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扩展莫尼茨绦虫DAZ基因的分离和cDNA序列分析 被引量:2
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作者 赵文娟 朱建军 +2 位作者 吕廷德 薄新文 王新华 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2010年第1期37-42,共6页
为进一步研究扩展莫尼茨绦虫并以其作为模式生物提供基础。通过构建的扩展莫尼茨绦虫成虫cDNA文库,随机挑取重组阳性克隆进行测序,对部分序列进行引物步移法测序,获取其全长cDNA序列;采用生物信息学等技术对该cDNA序列进行开放阅读框(O... 为进一步研究扩展莫尼茨绦虫并以其作为模式生物提供基础。通过构建的扩展莫尼茨绦虫成虫cDNA文库,随机挑取重组阳性克隆进行测序,对部分序列进行引物步移法测序,获取其全长cDNA序列;采用生物信息学等技术对该cDNA序列进行开放阅读框(ORF)的寻找、编码氨基酸的推导、核苷酸和氨基酸同源性比较以及蛋白质结构的初步预测。结果显示:获得了1个扩展莫尼茨绦虫新基因DAZ基因,cDNA全长1905bp,包含1个完整的ORF,编码562个氨基酸,登录号为:GH291478。蛋白理论分子量为61.3169kD,等电点为4.77,不稳定系数50.27,脂肪系数65.04,总平均亲水性-0.472。二级结构预测该蛋白有1个跨膜区域,以无规卷曲(L)为主,没有二硫键结合位点。本研究成功分离扩展莫尼茨绦虫DAZ基因。 展开更多
关键词 扩展莫尼茨绦虫 DAZ基因 序列分析
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成年牦牛感染扩展莫尼茨绦虫的局部免疫细胞学反应 被引量:2
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作者 祁珊珊 王雯慧 +7 位作者 赵晋军 高强 许小红 扎西英派 何晚红 台立峰 关飞 杨祎程 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1094-1098,共5页
为明确扩展莫尼茨绦虫感染成年牦牛所引起的免疫细胞学反应及致病作用,对感染牛的寄生部位进行了观察与研究,并同正常成年牦牛进行了比较。结果表明,扩展莫尼茨绦虫成虫仅寄生于牦牛的小肠。寄生部位的黏膜可见少量出血点,表面附有较多... 为明确扩展莫尼茨绦虫感染成年牦牛所引起的免疫细胞学反应及致病作用,对感染牛的寄生部位进行了观察与研究,并同正常成年牦牛进行了比较。结果表明,扩展莫尼茨绦虫成虫仅寄生于牦牛的小肠。寄生部位的黏膜可见少量出血点,表面附有较多黏液,散在直径2-3 mm的溃疡灶,小肠黏膜集合淋巴小结较对照组发达,数量明显增多。光镜下可见小肠黏膜出血,部分黏膜上皮坏死、脱落,局部黏膜相关淋巴组织增生明显,黏膜层嗜酸性粒细胞大量浸润,浆细胞、杯状细胞和嗜银细胞显著增生,黏膜下层血管周围肥大细胞增多。非寄生部位的组织及器官无明显病变。扫描电镜结果显示寄生部位的肠绒毛断裂或脱落,圆顶区的数量较对照组多,圆顶区滤泡相关上皮中M细胞的数量也较对照组多。研究证实,扩展莫尼茨绦虫感染可引起成年牦牛感染部位强烈的免疫细胞学反应,表明成年牦牛肠道黏膜的抗感染能力较强,故寄生虫对其致病作用较弱。 展开更多
关键词 成年牦牛 扩展莫尼茨绦虫 免疫细胞 局部反应
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扩展莫尼茨绦虫感染对成年牦牛小肠不同部位黏膜固有免疫细胞的影响 被引量:1
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作者 曹婷婷 王雯慧 +2 位作者 祁珊珊 李淑娴 张学锋 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期973-978,共6页
为研究扩展莫尼茨绦虫对成年牦牛小肠黏膜固有免疫细胞的影响,采用组织学、组织化学染色与细胞数量检测以及统计分析的方法对感染组和对照组牦牛小肠不同部位黏膜固有免疫细胞进行了详细观察、分析,并做了比较。结果显示,感染组牦牛十... 为研究扩展莫尼茨绦虫对成年牦牛小肠黏膜固有免疫细胞的影响,采用组织学、组织化学染色与细胞数量检测以及统计分析的方法对感染组和对照组牦牛小肠不同部位黏膜固有免疫细胞进行了详细观察、分析,并做了比较。结果显示,感染组牦牛十二指肠、空肠和回肠黏膜中的黏膜固有免疫细胞即上皮内淋巴细胞、杯状细胞、嗜酸性粒细胞、浆细胞和肥大细胞数量均远远多于对照组牦牛的相应部位,差异都极显著(P<0.01)。但感染组和对照组从十二指肠到回肠,上述5种细胞的分布趋势一致:上皮内淋巴细胞和肥大细胞的数量逐渐减少,在小肠各段的数量分布均差异显著(P<0.05);杯状细胞、嗜酸性粒细胞从前至后呈增多趋势且差异显著(P<0.05);浆细胞呈增多趋势,然而空肠和回肠浆细胞数量差异不显著(P>0.05)。研究结果表明,扩展莫尼茨绦虫感染时,成年牦牛感染部位小肠黏膜固有免疫细胞大量增生,但其分布趋势没有发生改变。 展开更多
关键词 牦牛 扩展莫尼茨绦虫 上皮内淋巴细胞 杯状细胞 嗜酸性粒细胞 浆细胞 肥大细胞
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扩展莫尼茨绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因serpin部分片段克隆及不同体节mRNA转录水平分析 被引量:1
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作者 叶倩 马勋 +2 位作者 薄新文 王正荣 张艳艳 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期16-22,共7页
旨在初步了解丝氨酸蛋白酶抑制剂基因在扩展莫尼茨绦虫生长发育中的作用。采用分子克隆获得扩展莫尼茨绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin基因部分片段,应用MEGA软件对其进行进化分析。同时以beta-Tubulin基因作为内参基因,采用SYBR Green re... 旨在初步了解丝氨酸蛋白酶抑制剂基因在扩展莫尼茨绦虫生长发育中的作用。采用分子克隆获得扩展莫尼茨绦虫丝氨酸蛋白酶抑制剂serpin基因部分片段,应用MEGA软件对其进行进化分析。同时以beta-Tubulin基因作为内参基因,采用SYBR Green real-time RT-PCR技术检测该基因在扩展莫尼茨绦虫4个不同发育阶段即头节、幼节、成节、孕节中的表达差异,最终克隆获得749bp的serpin基因片段。进化分析表明,扩展莫尼茨绦虫serpin基因与多方棘球蚴serpin基因有较近的亲缘关系。标准曲线分析显示,serpin和beta-Tubulin基因的Ct值与阳性质粒的浓度均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.99,熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰,具有较高的特异性。同时试验结果显示,serpin基因在虫体各发育阶段中的表达丰度存在差异,从高到低依次为孕节、头节、成节、幼节。由此初步推测,此基因可能在扩展莫尼茨绦虫虫卵发育为六钩蚴的过程中发挥一定作用。 展开更多
关键词 SERPIN 扩展莫尼茨绦虫 RT-PCR
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10个生殖发育相关基因在扩展莫尼茨绦虫不同发育节片的mRNA转录水平分析 被引量:1
15
作者 王正荣 薄新文 +1 位作者 张艳艳 马勋 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期75-77,共3页
根据扩展莫尼茨绦虫转录组测序结果,选取在虫体不同发育节片(即头颈节、幼节、成节和孕节)差异表达的10个基因KIFC1、Kif17、Smad D、β转录生长因子、β转录生长因子受体、HSD5、嘌啉毒素胺基肽酶、甲硫氨酸胺基肽酶2,以及转录因子fork... 根据扩展莫尼茨绦虫转录组测序结果,选取在虫体不同发育节片(即头颈节、幼节、成节和孕节)差异表达的10个基因KIFC1、Kif17、Smad D、β转录生长因子、β转录生长因子受体、HSD5、嘌啉毒素胺基肽酶、甲硫氨酸胺基肽酶2,以及转录因子fork和Sox,利用实时定量PCR技术验证上述基因在扩展莫尼茨绦虫各发育阶段节片中m RNA转录情况。结果表明,与靶标基因在虫体头颈节的转录水平相比,KIFC1,Kif17基因在幼节的表达呈明显的上调趋势(P<0.01)。KIFC1、Kif17、β转录生长因子受体和嘌啉毒素胺基肽酶基因在成节的表达呈上调趋势(P<0.01)。HSD5、β转录生长因子受体和甲硫氨酸胺基肽酶2基因在孕节的表达呈上调趋势(P<0.01)。 展开更多
关键词 扩展莫尼茨绦虫 节片 实时定量PCR
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扩展莫尼茨绦虫vasa基因的原核表达及多克隆抗体的制备 被引量:1
16
作者 钱凌霄 王正荣 +5 位作者 李红欢 刘乙 张艳艳 王炜烨 薄新文 马勋 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1136-1141,共6页
试验旨在表达、纯化扩展莫尼茨绦虫VASA蛋白,并制备兔抗VASA多克隆抗体。根据扩展莫尼茨绦虫全基因核苷酸序列设计特异性引物,利用PCR方法扩增vasa基因片段;将扩增产物与原核表达载体pET-22b(+)连接,获得重组质粒pET-22b-VASA;经Amp抗... 试验旨在表达、纯化扩展莫尼茨绦虫VASA蛋白,并制备兔抗VASA多克隆抗体。根据扩展莫尼茨绦虫全基因核苷酸序列设计特异性引物,利用PCR方法扩增vasa基因片段;将扩增产物与原核表达载体pET-22b(+)连接,获得重组质粒pET-22b-VASA;经Amp抗性筛选阳性菌,双酶切、PCR测序鉴定后,将其转化大肠杆菌(DE3)感受态细胞中,并进行IPTG诱导表达;重组融合蛋白经镍柱纯化后,进行Western blot鉴定;将融合蛋白免疫兔,制备多克隆抗体。结果显示,重组质粒pET-22b-VASA构建正确,通过IPTG诱导获得大小约32200的VASA重组融合蛋白;Western blot分析表明其与鼠抗His单克隆抗体呈阳性反应。纯化的VASA蛋白免疫兔获得了多克隆抗体,ELISA检测其效价为1∶128000。本试验成功制备了具有免疫原性的VASA蛋白及其兔源多克隆抗体,为VASA蛋白生物学功能及该蛋白在绦虫体内的分布等研究奠定基础。 展开更多
关键词 扩展莫尼茨绦虫 VASA 原核表达 多克隆抗体 ELISA
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扩展莫尼茨绦虫α-tubulin基因的克隆及序列分析 被引量:1
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作者 王鹏 孙德江 闫江林 《新疆畜牧业》 2011年第11期45-47,共3页
分离和鉴定扩展莫尼茨绦虫(Moniezia expansa)新基因,为进一步研究该基因的功能奠定基础。利用构建扩展莫尼茨绦虫成虫cDNA文库,随机挑取重组阳性克隆进行测序,对部分序列进行引物步移法测序,获取其全长cDNA序列;采用生物信息学等分析... 分离和鉴定扩展莫尼茨绦虫(Moniezia expansa)新基因,为进一步研究该基因的功能奠定基础。利用构建扩展莫尼茨绦虫成虫cDNA文库,随机挑取重组阳性克隆进行测序,对部分序列进行引物步移法测序,获取其全长cDNA序列;采用生物信息学等分析技术对该cDNA序列进行开放阅读框(ORF)的寻找、编码氨基酸的推导、核苷酸和氨基酸同源性比较及蛋白质二级结构的初步预测。获得了1个扩展莫尼茨绦虫新基因α-tubulin,全长1522bp,编码225个氨基酸,CDS预测属于Tubu-lin_FstZ超家族。编码蛋白的理论分子质量为25808.6KDa,等电点为9.15。获得了扩展莫尼茨绦虫α-tubulin的全长cDNA序列,为该基因功能的试验性鉴定工作奠定基础。 展开更多
关键词 扩展莫尼茨绦虫 α–tubulin 序列分析
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扩展莫尼茨绦虫蛋白激酶C相互作用蛋白(PICK1)基因的克隆及序列分析
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作者 赵文娟 康立超 +1 位作者 薄新文 王新华 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1307-1312,共6页
【目的】分离和鉴定扩展莫尼茨绦虫(Moniezia expansa)新基因,为进一步研究该基因的功能奠定基础。【方法】构建扩展莫尼茨绦虫成虫cDNA文库,随机挑取重组阳性克隆进行测序,对部分序列进行引物步移法测序,获取其全长cDNA序列;采用生物... 【目的】分离和鉴定扩展莫尼茨绦虫(Moniezia expansa)新基因,为进一步研究该基因的功能奠定基础。【方法】构建扩展莫尼茨绦虫成虫cDNA文库,随机挑取重组阳性克隆进行测序,对部分序列进行引物步移法测序,获取其全长cDNA序列;采用生物信息学等分析技术对该cDNA序列进行开放阅读框(ORF)的寻找、编码氨基酸的推导、核苷酸和氨基酸同源性比较及蛋白质二级结构的初步预测。【结果】获得了1个扩展莫尼茨绦虫新基因蛋白激酶C相互作用蛋白,全长1 527 bp,编码447个氨基酸,CDS预测存在明显的BAR,PDZ结构域。编码蛋白的理论分子质量为50.173 3 ku,等电点为5.22。【结论】获得了扩展莫尼茨绦虫蛋白激酶C相互作用蛋白的全长cDNA序列,为该基因功能的试验性鉴定工作奠定基础。 展开更多
关键词 扩展莫尼茨绦虫 PICK1 序列分析
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扩展莫尼茨绦虫β微管蛋白基因的克隆及序列分析
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作者 夏党荣 王涛 +4 位作者 薄新文 马勋 何延华 康立超 王新华 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期324-329,共6页
【目的】从扩展莫尼茨绦虫中克隆β微管蛋白基因,进行序列测定和生物信息学分析,为进一步研究该基因的功能奠定基础。【方法】构建扩展莫尼茨绦虫成虫cDNA文库,随机挑取重组阳性克隆进行测序,对部分序列进行引物步移法测序,获得其全长c... 【目的】从扩展莫尼茨绦虫中克隆β微管蛋白基因,进行序列测定和生物信息学分析,为进一步研究该基因的功能奠定基础。【方法】构建扩展莫尼茨绦虫成虫cDNA文库,随机挑取重组阳性克隆进行测序,对部分序列进行引物步移法测序,获得其全长cDNA序列;采用生物信息学等技术对该cDNA序列进行开放阅读框(ORF)的寻找、编码氨基酸的推导、核苷酸和氨基酸同源性比较以及蛋白二级结构的初步预测。【结果】获得了1个扩展莫尼茨绦虫新基因——β微管蛋白基因,全长1 571 bp,编码444个氨基酸,与日本血吸虫的β微管蛋白氨基酸序列具有78.6%的同源性。编码蛋白的理论分子量为49.6 ku,等电点为4.96;1~4位氨基酸MREI为β微管蛋白转录后调控信号,140~146位GGGTGAG存在一个微管蛋白标志信号片段,在99~106位和391~410位存在两个典型的β微管蛋白保守区;亚细胞定位分析其为细胞的骨架蛋白。【结论】获得了扩展莫尼茨绦虫β微管蛋白基因的全长cDNA序列,为该基因功能的实验性鉴定工作奠定基础。 展开更多
关键词 扩展莫尼茨绦虫 β微管蛋白 克隆 序列分析
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扩展莫尼茨绦虫RNA结合蛋白基因的克隆及不同体节mRNA转录水平的分析
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作者 王正荣 薄新文 +2 位作者 赵文娟 何延华 康立超 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期999-1005,共7页
为研究RNA结合蛋白在扩展莫尼茨绦虫生长发育中的功能,克隆了该基因的全长序列;同时以beta-Tubulin基因作为内参基因,采用SYBR Green real-time RT-PCR方法检测了该基因在扩展莫尼茨绦虫4个不同发育阶段,即头节、幼节、成节、孕节中的m... 为研究RNA结合蛋白在扩展莫尼茨绦虫生长发育中的功能,克隆了该基因的全长序列;同时以beta-Tubulin基因作为内参基因,采用SYBR Green real-time RT-PCR方法检测了该基因在扩展莫尼茨绦虫4个不同发育阶段,即头节、幼节、成节、孕节中的mRNA转录水平。结果显示,扩展莫尼茨绦虫RNA结合蛋白基因全长为1 905bp,编码562个氨基酸。进化分析表明,该基因与人类DAZ基因有一定的同源性;mRNA转录水平分析显示,目的基因和beta-Tubulin基因的Ct值与阳性质粒的浓度均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.99。熔解曲线分析表明,产物为特异的单峰,具有较高的特异性。结果表明,此RNA结合蛋白在虫体各发育阶段中的表达丰度存在明显差异,在虫体成节的表达水平最高,其次为幼节、孕节和头节,初步推测该基因可能与人类DAZ基因有相似的功能,对扩展莫尼茨绦虫生殖细胞的发育具有一定的调控作用。 展开更多
关键词 扩展莫尼茨绦虫 RNA结合蛋白 克隆 mRNA转录水平
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