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入侵中国大陆的红火蚁的鉴定及发生为害调查 被引量：292
1
作者 曾玲 陆永跃 +2 位作者 何晓芳 张维球 梁广文 《昆虫知识》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期144-148,F003-F004,共7页
根据形态特征鉴定结果首次证实红火蚁SolenopsisinvictaBuren入侵中国大陆 ,并调查了广东省吴川市红火蚁发生为害情况。调查结果表明 ,发生区内部分地点红火蚁发生密度较高 ,主要发生于较稳定的生态环境中 ,如荒坡、草地、长满杂草的田... 根据形态特征鉴定结果首次证实红火蚁SolenopsisinvictaBuren入侵中国大陆 ,并调查了广东省吴川市红火蚁发生为害情况。调查结果表明 ,发生区内部分地点红火蚁发生密度较高 ,主要发生于较稳定的生态环境中 ,如荒坡、草地、长满杂草的田埂等。红火蚁已对当地农业生产、人们的身体健康、日常生活等造成了不利影响。此外 ,Cytb基因序列分析结果表明 ,采自美国佛罗里达和广东吴川的红火蚁与采自广东 4个地方的热带火蚁S .geminata (Fabr.)两物种间有 61个变异位点 ,种内变异为 0。限制性酶切多态实验 (RFLP)的结果显示 ,BamHI酶在红火蚁的特异扩增片段中有一个识别位点 ,而在热带火蚁中无酶切位点 ;MspI酶在热带火蚁的扩增片段中也有一个识别位点 ,而在红火蚁中无识别位点。有酶切位点的扩增产物在酶切后分别获得近 2 0 0bp与 2 5 0bp的片段各一带。因此 ,用PCR RFLP的方法可以简单快速地鉴别红火蚁和热带火蚁。 展开更多
关键词 红火蚁 中国大陆 发生为害调查 入侵 PCR-RFLP 识别位点 扩增片段 酶切位点 B基因序列 限制性酶切 鉴定结果 形态特征 为害情况 调查结果 发生密度 生态环境 农业生产 身体健康 不利影响 分析结果 佛罗里达 种内变异 扩增产物
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ISSR-PCR在石斛种间鉴别中的应用 被引量：73
2
作者 沈颖 徐程 +1 位作者 万小凤 张铭 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期423-427,共5页
目的 采用ISSR-PCR方法对石斛属9种植物进行鉴别,探讨不同种石斛在DNA分子水平上的差异。方法 选取10条由SSR组成的引物,对9种石斛进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳分析。结果 10条引物中有7条扩增出多态性条带。每条引物可检测的多态性位... 目的 采用ISSR-PCR方法对石斛属9种植物进行鉴别,探讨不同种石斛在DNA分子水平上的差异。方法 选取10条由SSR组成的引物,对9种石斛进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳分析。结果 10条引物中有7条扩增出多态性条带。每条引物可检测的多态性位点最少7个,最多14个,扩增片段大小为220-1260 bp。其中,引物UBC-807和UBC-864具有较高的多态性条带比率,均可以独立将所有被测种区分开来。结论ISSR-PCR作为一种简便、可靠的分子标记鉴定技术,可以作为石斛属种间鉴别的方法之一。 展开更多
关键词 石斛属 鉴别 引物 多态性位点 扩增片段 琼脂糖凝胶电泳 同种 ISSR-PCR 分子标记 鉴定技术
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中国玉米新品种DNA指纹库建立系列研究 Ⅲ.多重PCR技术在玉米SSR引物扩增中的应用 被引量：49
3
作者 王凤格 赵久然 +5 位作者 佘花娣 郭景伦 陈刚 廖琴 孙世贤 陈如明 《玉米科学》 CAS CSCD 2003年第4期3-6,共4页
根据21对玉米SSR引物扩增片段大小范围组成不同的引物组合进行多重PCR反应的研究。在与单一PCR相同的反应条件下,47个两重PCR组合出现5种不同的扩增情况,其中30个组合扩增正常;10个三重PCR组合中有9个组合扩增正常;两个四重PCR组合中有... 根据21对玉米SSR引物扩增片段大小范围组成不同的引物组合进行多重PCR反应的研究。在与单一PCR相同的反应条件下,47个两重PCR组合出现5种不同的扩增情况,其中30个组合扩增正常;10个三重PCR组合中有9个组合扩增正常;两个四重PCR组合中有1个扩增正常,这些筛选出的正常扩增的组合可应用于今后玉米DNA指纹库构建研究中。研究表明,应用与单一PCR完全相同的反应条件,大部分能够获得正常扩增的多重PCR组合,在此基础上提出了简化的多重PCR优化程序。 展开更多
关键词 中国 玉米 品种 DNA指纹库 多重PCR技术 SSR引物 扩增片段
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外来入侵植物加拿大一枝黄花居群间遗传差异分析 被引量：31
4
作者 黄华 郭水良 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期197-204,共8页
采用三种不同的方法提取外来入侵植物加拿大一枝黄花总DNA,并应用RAPD技术分析了浙沪地区4个加拿大一枝黄花居群间的遗传分化。结果表明: (1) 2×CTAB法提取的DNA具有较好的完整性,能较好地去除蛋白质、酚类和多糖杂质,是比较适合... 采用三种不同的方法提取外来入侵植物加拿大一枝黄花总DNA,并应用RAPD技术分析了浙沪地区4个加拿大一枝黄花居群间的遗传分化。结果表明: (1) 2×CTAB法提取的DNA具有较好的完整性,能较好地去除蛋白质、酚类和多糖杂质,是比较适合加拿大一枝黄花总DNA提取的方法; (2)加拿大一枝黄花的遗传多态性非常高, 13个引物在4个居群中共检测到102条扩增片段,多态带84条,多态率达到82. 35%;特有带41条,占40. 20%。居群之间的多态性分别是上海嘉定(73. 13% ) >嘉兴乍浦(68. 97% ) >杭州(68. 42% ) >金华(57. 14% ); (3)13个引物检测的平均纯合度(J)为0. 38,平均杂合度(H)为0. 62; (4)Nei基因相似系数、聚类分析和主成分分析表明,加拿大一枝黄花不同居群间的遗传差异程度较大,居群间的遗传分化与地理位置存在对应关系; (5)加拿大一枝黄花的入侵居群的适应性进化与杂草特性紧密相关。 展开更多
关键词 加拿大一枝黄花 外来入侵植物 居群 差异分析 总DNA提取 遗传分化 CTAB法 遗传多态性 平均杂合度 适应性进化 技术分析 RAPD 扩增片段 相似系数 聚类分析 遗传差异 对应关系 地理位置 蛋白质 纯合度 i基因 分析表 主成分
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单管多重PCR快速检测中国人三种常见缺失型α-地中海贫血基因 被引量：40
5
作者 周玉球 张永良 +4 位作者 李莉艳 李文典 莫秋华 郑勤 徐湘民 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期180-184,共5页
目的　建立一种简单快速、准确可靠、经济实用的检测常见缺失型α-地中海贫血(α-地贫)突变(- - SEA、- α3.7和- α4 .2 )的单管多重PCR技术以用于α-地贫的分子筛查和产前诊断。方法　采用gap- PCR方案设计4组PCR引物并对PCR反应条件... 目的　建立一种简单快速、准确可靠、经济实用的检测常见缺失型α-地中海贫血(α-地贫)突变(- - SEA、- α3.7和- α4 .2 )的单管多重PCR技术以用于α-地贫的分子筛查和产前诊断。方法　采用gap- PCR方案设计4组PCR引物并对PCR反应条件进行系统优化以扩增代表这3种地贫和α2 基因存在的特异性DNA片段。此外,还设计1对引物扩增L IS1基因3′-端非翻译区片段作为整个PCR体系扩增成功与否的内在对照。采用盲法分析对该技术的特异性、准确性和可靠性进行评价并应用于产前分子诊断中。结果　所建的单管多重PCR技术成功地检出这3种常见缺失型α-地贫突变的纯合子、杂合子和双重杂合子。正常人出现L IS1和α2 基因特异扩增片段,而- - SEA、- α3.7和- α4 .2杂合子除了出现正常人的2条扩增带外,还分别出现1条指示这些突变存在的特异性扩增片段。盲法分析结果显示,该技术对α-珠蛋白基因型经过Southern印迹法或DNA直接测序确证的DNA标本的诊断准确性达到10 0 % ,并被成功地应用于9个重症α-地贫高风险家庭的产前诊断中。结论　该技术可准确、快速地检测- - SEA、-α3.7和-α4 .2 3种常见缺失型α-地贫突变,且具有经济和实用的优点,非常适合于α-地贫的大人群分子筛查和临床样品的基因诊断。 展开更多
关键词 α-地中海贫血基因 快速检测 缺失型Α-地中海贫血 多重PCR技术 Southern DNA直接测序 中国 产前分子诊断 产前诊断 分子筛查 扩增片段 DNA片段 PCR引物 双重杂合子 诊断准确性 DNA标本 特异性 经济实用 系统优化 反应条件
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小麦抗叶锈病基因Lr45的AFLP分子标记 被引量：15
6
作者 张娜 杨文香 +4 位作者 闫红飞 刘大群 褚栋 孟庆芳 张汀 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期1364-1368,共5页
利用AFLP技术对小麦抗叶锈基因Lr45进行了标记,从60对AFLP引物中筛选出2对在亲本及TcLr45×ThatcherF2抗感群体间揭示多态性的引物P-AGG/M-GAG和P-ACA/M-GGT。其扩增片段为261bp和105bp,2个标记与Lr45的遗传距离分别为0.6cM和1.3cM... 利用AFLP技术对小麦抗叶锈基因Lr45进行了标记,从60对AFLP引物中筛选出2对在亲本及TcLr45×ThatcherF2抗感群体间揭示多态性的引物P-AGG/M-GAG和P-ACA/M-GGT。其扩增片段为261bp和105bp,2个标记与Lr45的遗传距离分别为0.6cM和1.3cM。测序比较261bp片段与大麦属VulgareHotrI基因部分序列同源性达86%,105bp片段与一粒小麦磷脂酰丝氨酸脱羧酶基因部分序列同源性高达96%。2个测序片段均包含开放阅读框(ORF)序列。 展开更多
关键词 AFLP分子标记 抗叶锈病基因 小麦 序列同源性 AFLP技术 磷脂酰丝氨酸 抗叶锈基因 开放阅读框 扩增片段 遗传距离 多态性 大麦属 I基因 酶基因 引物 测序 亲本 F2
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番茄叶霉病抗性基因Cf-5的CAPS标记建立 被引量：18
7
作者 于拴仓 柴敏 +1 位作者 郑晓鹰 姜立纲 《分子植物育种》 CAS CSCD 2005年第1期57-60,共4页
番茄是世界上最主要的蔬菜作物之一,叶霉病(Cladosporium fulvum Cooke)的发生和蔓延使保护地番茄生产受到严重影响,培育抗叶霉病的番茄品种是控制该病害最经济有效的方法.本研究根据Cf-5的基因序列设计特异扩增引物,以7个含有不同叶霉... 番茄是世界上最主要的蔬菜作物之一,叶霉病(Cladosporium fulvum Cooke)的发生和蔓延使保护地番茄生产受到严重影响,培育抗叶霉病的番茄品种是控制该病害最经济有效的方法.本研究根据Cf-5的基因序列设计特异扩增引物,以7个含有不同叶霉病抗病基因的品种为试材,扩增Cf-5基因2 558～3 523bp之间的单拷贝片段,7个材料均获得了约0.96Kb的特异扩增片段.用限制性内切酶Taq I对该片段进行酶切,含Cf-5基因的材料产生了一条256bp的特异片段,而不含Cf-5基因的材料产生一条225bp的特异片段.从而建立了Cf-5基因的共显性CAPS标记.这一研究结果为Cf-5基因的分子标记辅助育种奠定了良好基础. 展开更多
关键词 叶霉病 番茄叶 特异片段 CAPS 抗性基因 保护地番茄 扩增片段 标记 研究结果 限制性内切酶
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牛Myostatin基因单核苷酸多态性分析 被引量：14
8
作者 史明艳 昝林森 +2 位作者 李保兰 刘霞 张自富 《中国农学通报》 CSCD 2005年第6期24-25,45,共3页
Myostatin基因即肌肉生长抑制素,是一种肌肉生长的负调控因子。应运PCR-SSCP和测序的方法对中国秦川牛、南阳牛以及国外引入品种皮埃蒙特牛双肌基因的第三外显子进行了多态性分析。结果表明:第三外显子938处G→A的单核苷酸的突变造成了... Myostatin基因即肌肉生长抑制素,是一种肌肉生长的负调控因子。应运PCR-SSCP和测序的方法对中国秦川牛、南阳牛以及国外引入品种皮埃蒙特牛双肌基因的第三外显子进行了多态性分析。结果表明:第三外显子938处G→A的单核苷酸的突变造成了南阳牛、皮埃蒙特牛第三外显子扩增片段多态性,秦川牛则不然。 展开更多
关键词 MYOSTATIN基因 多态性分析 单核苷酸 肌肉生长抑制素 皮埃蒙特牛 负调控因子 外显子 SSCP 双肌基因 引入品种 扩增片段 秦川牛 南阳牛 PCR 938
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天敌对烟粉虱捕食作用的SCAR标记检测 被引量：16
9
作者 吕志创 张桂芬 +1 位作者 万方浩 邓国荣 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期1167-1173,共7页
以烟粉虱和捕食性天敌为研究对象,采用特征序列扩增区域(SCAR)标记法,通过对目的片段的克隆与测序设计烟粉虱特征片段扩增引物,检验该引物的种、虫态及性别特异性,并利用该引物检测捕食性天敌对棉田烟粉虱的捕食作用。研究结果表明,利用... 以烟粉虱和捕食性天敌为研究对象,采用特征序列扩增区域(SCAR)标记法,通过对目的片段的克隆与测序设计烟粉虱特征片段扩增引物,检验该引物的种、虫态及性别特异性,并利用该引物检测捕食性天敌对棉田烟粉虱的捕食作用。研究结果表明,利用SCAR标记法获得了长度为347bp的烟粉虱特异性片段(GenBank登录号为AY841800),根据此片段的碱基序列设计烟粉虱特异引物1对TB-F/TB-R94585,其扩增片段约为240bp;种特异性检验结果表明,该引物只对烟粉虱具有扩增能力,对温室粉虱及其它相关种类不具有扩增效果;同时该引物对不同虫态、不同性别的烟粉虱具有同样的扩增效应。田间检测结果表明,同种天敌昆虫幼体捕食作用检出率高于成虫;在所检测的4类群9种捕食性天敌中,龟纹瓢虫幼虫、异色瓢虫幼虫、草蛉幼虫及东亚小花蝽成虫和蜘蛛对烟粉虱捕食作用的检出率高于50%。 展开更多
关键词 捕食作用 烟粉虱 SCAR标记 捕食性天敌 东亚小花蝽 特征序列 研究结果 序列设计 扩增片段 检验结果 种特异性 扩增效果 温室粉虱 检测结果 天敌昆虫 龟纹瓢虫 异色瓢虫 标记法 检出率 引物 幼虫 性别 虫态 成虫 棉田 田间
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栉孔扇贝×虾夷扇贝子一代杂种优势的RAPD分析 被引量：16
10
作者 滕丽莉 杨爱国 +3 位作者 赵峰 刘志鸿 周丽青 王清印 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期97-101,共5页
应用RAPD技术对栉孔扇贝×虾夷扇贝子一代的杂种优势进行了研究,对栉孔扇贝(C)、虾夷扇贝(P)及其正交F1(C♀×P♂)、反交F1(P♀×C♂)共4个群体的RAPD扩增带谱进行了分析.从40个随机引物中筛选出16个扩增带丰富的引物进行扩... 应用RAPD技术对栉孔扇贝×虾夷扇贝子一代的杂种优势进行了研究,对栉孔扇贝(C)、虾夷扇贝(P)及其正交F1(C♀×P♂)、反交F1(P♀×C♂)共4个群体的RAPD扩增带谱进行了分析.从40个随机引物中筛选出16个扩增带丰富的引物进行扩增,共得到l15条清晰稳定的扩增带,扩增片段大小在200～2000bp之间,其中有82个扩增位点具有多态性,多态性位点比率为71.3%.栉孔扇贝与正反交子代的相对遗传距离分别为0.0852和0.2886;虾夷扇贝与正反交子代的相对遗传距离分别为0.2327和0.0559,杂种子代与两亲本的遗传差异不是对等的,而是偏向各自的母本,系统树、Shannon多样性指数同样证明了这一点.两亲本群体内相似性指数分别为0.8392和0.8451,均大于正交子代的群体内相似性指数,而小于反交子代的群体内相似性指数,表明正交子代群体的遗传多样性水平升高,产生杂种优势;反交降低,未产生明显的杂种优势,与4个群体Shannon遗传多样性指数计算分析结果一致. 展开更多
关键词 杂种优势 虾夷扇贝 栉孔扇贝 RAPD分析 子一代 SHANNON多样性指数 相似性指数 RAPD技术 RAPD扩增 遗传距离 多态性位点 遗传多样性 随机引物 扩增片段 扩增位点 遗传差异 分析结果 正反交 子代 正交 群体 系统树 体内 亲本
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小麦多酚氧化酶(PPO)活性的SSR标记筛选与验证 被引量：15
11
作者 孙道杰 张立平 +4 位作者 夏先春 何中虎 葛秀秀 徐兆华 王辉 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期1295-1299,共5页
小麦多酚氧化酶(PPO)活性是引起面条和面团储存期间颜色褐变的主要因素。发掘可应用于籽粒PPO活性辅助选择的分子标记,将有助于小麦面粉颜色性状的遗传改良。本研究选用来自全国不同麦区的203份冬小麦品种,验证SSR(simplesequencerepeat... 小麦多酚氧化酶(PPO)活性是引起面条和面团储存期间颜色褐变的主要因素。发掘可应用于籽粒PPO活性辅助选择的分子标记,将有助于小麦面粉颜色性状的遗传改良。本研究选用来自全国不同麦区的203份冬小麦品种,验证SSR(simplesequencerepeat)引物Xgwm312的PCR扩增片段大小与籽粒PPO活性的关系。结果表明,198bp扩增片段的有无同籽粒PPO活性大小密切相关,该片段的出现通常意味着籽粒PPO活性较高。Xgwm312可应用于籽粒PPO活性的分子标记辅助育种。 展开更多
关键词 多酚氧化酶 标记筛选 验证 SSR PPO活性 分子标记辅助育种 扩增片段 冬小麦品种 辅助选择 遗传改良 颜色性状 小麦面粉 籽粒 储存期 PCR 应用 麦区
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花椰菜叶色突变的RAPD分析 被引量：11
12
作者 李梅 赵前程 +2 位作者 孙德岭 申书兴 孙振英 《天津农业科学》 CAS 2004年第4期10-12,共3页
应用随机扩增多态性DNA(RAPD)分析方法,对花椰菜灰绿色叶片正常植株及其绿色叶片突变体的基因组DNA进行差异分析,使用122个10bp随机引物进行RAPD反应,扩增片段分子量在0.3～2.5kb之间,其中S140在植株间扩增出差异片段1条。结果表明,花... 应用随机扩增多态性DNA(RAPD)分析方法,对花椰菜灰绿色叶片正常植株及其绿色叶片突变体的基因组DNA进行差异分析,使用122个10bp随机引物进行RAPD反应,扩增片段分子量在0.3～2.5kb之间,其中S140在植株间扩增出差异片段1条。结果表明,花椰菜不同叶色基因组DNA之间存在明显差异,扩增出的差异片段对进一步研究花椰菜叶色基因调控具有重要的价值。 展开更多
关键词 花椰菜 叶色 菜叶 植株 RAPD分析 扩增片段 基因组DNA 突变 正常 基因调控
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花椰菜自交不亲和性的分子标记研究 被引量：6
13
作者 宋丽娜 张赛群 +2 位作者 张丽芳 陈德海 周涵韬 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第B06期140-143,共4页
运用随机扩增多态性DNA(RAPD)和inter简单重复序列(ISSR)等分子标记技术,分别对5组花椰菜自交不亲和系和对应的自交亲和系的基因组进行指纹差异分析.采用10个10mer随机引物和5个ISSR引物进行PCR扩增,结果表明,扩增片段分子量在0.3～5kb... 运用随机扩增多态性DNA(RAPD)和inter简单重复序列(ISSR)等分子标记技术,分别对5组花椰菜自交不亲和系和对应的自交亲和系的基因组进行指纹差异分析.采用10个10mer随机引物和5个ISSR引物进行PCR扩增,结果表明,扩增片段分子量在0.3～5kb之间,指纹图谱的稳定性和重复性较好.经过3次以上重复发现,ISSR4引物扩增图谱中,自交亲和系比不亲和系多扩增出3800bp片段;ISSR6引物扩增图谱中,除第3组外,不亲和系比亲和系多扩增出1100bp片段.结果表明,花椰菜自交不亲和系与自交系基因组DNA之间存在差异,扩增出的差异片段与花椰菜自交不亲和性相关,并可作为自交不亲和系和自交亲和系育种筛选的分子标记.初步探讨了花椰菜自交不亲和性的遗传机制及RAPD和ISSR技术在自交不亲和系选育过程中的应用前景. 展开更多
关键词 自交不亲和性 花椰菜 随机扩增多态性DNA(RAPD) 自交不亲和系 分子标记技术 简单重复序列 基因组DNA 扩增图谱 PCR扩增 SSR引物 SSR技术 随机引物 差异分析 扩增片段 指纹图谱 选育过程 遗传机制 分子量 重复性 稳定性
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两个不同地区东方田鼠杂交子代RAPD标记分析 被引量：10
14
作者 邵伟娟 谢建云 +1 位作者 王胜昌 高诚 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2001年第2期93-98,共6页
目的　研究不同地区东方田鼠杂交后产下的子代的遗传特性。方法　筛选 4条 1 0bp随机引物对宁夏和洞庭湖地区东方田鼠杂交子代的基因组进行随机扩增多态DNA(RAPD)分析 ,并对不同地区亲代以及子代相互之间的基因组DNA进行相似性分析。结... 目的　研究不同地区东方田鼠杂交后产下的子代的遗传特性。方法　筛选 4条 1 0bp随机引物对宁夏和洞庭湖地区东方田鼠杂交子代的基因组进行随机扩增多态DNA(RAPD)分析 ,并对不同地区亲代以及子代相互之间的基因组DNA进行相似性分析。结果　①所有东方田鼠均有相同的扩增片段出现 ;②两个不同地区的亲代分别有特异性片般 ;③亲代的DNA带型均能在子代中找到 ;④同一胎次东方田鼠之间基因共享度大约在 72 %～ 96%之间。结论　RAPD分析能在一定程度上反映出东方田鼠种的特性以及亚种的特异性 。 展开更多
关键词 东方田鼠 子代 特异性 基因 鼠种 DNA 地区 胎次 RAPD标记分析 扩增片段
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DNA分子标记及其在保护生物学中的应用 被引量：3
15
作者 陈婴芳 徐宏发 《浙江师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2003年第1期60-64,共5页
根据国内外最新资料,论述了限制性片段长度多态性、随机扩增多态性、扩增片段多态性和微卫星等DNA分子标记的基本原理及其优缺点;同时,论述了DNA分子标记在保护生物学中检测遗传多样性、遗传管理及确定分类地位和保护地位、系统进化、... 根据国内外最新资料,论述了限制性片段长度多态性、随机扩增多态性、扩增片段多态性和微卫星等DNA分子标记的基本原理及其优缺点;同时,论述了DNA分子标记在保护生物学中检测遗传多样性、遗传管理及确定分类地位和保护地位、系统进化、性别鉴定、基因图谱和基因定位等方面的应用. 展开更多
关键词 DNA分子标记 扩增片段 保护地 遗传多样性 性别鉴定 随机扩增多态性 基因定位 保护生物学 分类地位 系统进化
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PCR在猴B病毒鉴定中的应用研究 被引量：9
16
作者 田克恭 蔺会云 +3 位作者 遇秀玲 李敬云 鲍作义 吴娜 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2001年第4期213-215,共3页
目的　为鉴定新分离毒株是否为B病毒。方法　根据ScinicarielloF报道的引物 ,用PCR方法扩增BV147、HSV 1、HSV 2 ,对扩增产物进行SacⅡ内切酶消化。结果　这一对引物可同时对这 3种病毒进行扩增 ,但只有BV147的扩增产物可被SacⅡ内切酶... 目的　为鉴定新分离毒株是否为B病毒。方法　根据ScinicarielloF报道的引物 ,用PCR方法扩增BV147、HSV 1、HSV 2 ,对扩增产物进行SacⅡ内切酶消化。结果　这一对引物可同时对这 3种病毒进行扩增 ,但只有BV147的扩增产物可被SacⅡ内切酶切开。对BV147扩增片段克隆测序的结果证实 ,其与美国B病毒E2 490株部分基因 (UL2 7)相对应位置的核苷酸同源性为 10 0 %。结论　初步建立了检测B病毒DNA的PCR方法并测定了新分离病毒毒株的部分基因序列 。 展开更多
关键词 BV 病毒DNA 扩增产物 HSV-1 HSV-2 切开 PCR方法 病毒鉴定 引物 扩增片段
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16S rDNA多重PCR检测牙周组织感染菌及混合感染与慢性牙周炎病变程度关系的研究 被引量：6
17
作者 占定凤 刘志伟 +3 位作者 夏肖萍 胡建成 陈莉丽 严杰 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期120-123,共4页
目的　建立多重 16SrDNAPCR检测慢性牙周炎 (CP)标本中牙龈卟啉单胞菌 (Pg)、伴放线杆菌 (Aa)和齿垢密螺旋体 (Td) ,了解不同感染情况与CP严重程度的关系。方法　将轻、中和重度15 2例CP患者牙周袋标本和 30名牙周健康者龈沟标本置于 2 ... 目的　建立多重 16SrDNAPCR检测慢性牙周炎 (CP)标本中牙龈卟啉单胞菌 (Pg)、伴放线杆菌 (Aa)和齿垢密螺旋体 (Td) ,了解不同感染情况与CP严重程度的关系。方法　将轻、中和重度15 2例CP患者牙周袋标本和 30名牙周健康者龈沟标本置于 2 0 0 μl裂解缓冲液中 ,10 0℃水浴 10min后取 10 μl上清液作为聚合酶链反应 (PCR)模板。常规酚 氯仿法提取的PgATCC332 77株、AaY4株、TdFM株和E .coliDH5α株DNA分别作为PCR阳性和阴性对照。采用Pg、Aa和Td 16SrDNA特异性引物 ,建立多重PCR检测上述标本。 3例Pg、Aa和TdPCR结果均阳性标本的目的扩增片段T A克隆后测序。采用 χ2 检验分析不同混合感染情况与牙周炎严重程度之间的关系。结果所建立的多重 16SrDNAPCR最低可检出 10个Pg、2 0个Aa和 2 0个Td细胞。Pg、Aa和Td 16SrDNA扩增片段与已报道的序列比较 ,相似性分别高达 99.4 5 %、97.0 8%和 96 .5 9%。 30名牙周健康者龈沟标本中 ,仅有 1名Pg(3.3% )、2名Aa(6 .7% )的 16SrDNA扩增结果阳性 ,其余标本均阴性。 15 2例CP患者牙周袋标本中 ,14 7例 (96 .7% )检出Pg、Aa和 /或Td的 16SrDNA ,5例 (3.3% )扩增结果均阴性。Pg的PCR检测阳性率 (91.5 % ,139 15 2 )明显高于Aa(72 .4 % ,110 15 2 )或Td(80 .9% ,12 3 展开更多
关键词 CP 标本 多重PCR检测 DNA 严重程度 患者 慢性牙周炎 混合感染 扩增片段 放线杆菌
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军团菌双重PCR检测方法的建立及应用 被引量：9
18
作者 王中民 杨国芬 +2 位作者 谭崇阳 王武芳 孔伟 《中国卫生检验杂志》 CAS 2005年第3期297-299,共3页
目的建立双重PCR以检出环境水体中的军团菌。方法设计2对引物,分别扩增军团菌的5SrRNA和Mip基因,扩增片段长各为10 4bp和996bp。结果该方法检测军团菌的灵敏度为5 8×102 cfu/ml, 6株标准嗜肺军团菌均扩增出104bp和996bp两条带, 4... 目的建立双重PCR以检出环境水体中的军团菌。方法设计2对引物,分别扩增军团菌的5SrRNA和Mip基因,扩增片段长各为10 4bp和996bp。结果该方法检测军团菌的灵敏度为5 8×102 cfu/ml, 6株标准嗜肺军团菌均扩增出104bp和996bp两条带, 4株非嗜肺军团菌均扩增出104bp条带, 4株非军团菌无条带;检测71份环境水样, 5份出现2条条带, 2份可见104bp条带,阳性率为7 0%。结论该方法快速、灵敏、特异,为水体中的嗜肺军团菌检测提供了有效方法。 展开更多
关键词 嗜肺军团菌 扩增片段 检出 P基因 阳性率 RNA PCR检测方法 引物 应用 水体
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聚合酶链式反应检测猪细小病毒方法的研究 被引量：7
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作者 戎伟 杨润德 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期465-467,共3页
本研究依据编码猪细小病毒结构蛋白VP2基因序列,合成了一对寡核苷酸引物,通过减少病毒核酸的提取时间、费用及优化聚合酶链式反应(PCR)的条件,成功地从猪细小病毒(PPV)感染的细胞中扩增出预期的158bp片段,经EcoRⅠ酶切鉴定,证实了该扩... 本研究依据编码猪细小病毒结构蛋白VP2基因序列,合成了一对寡核苷酸引物,通过减少病毒核酸的提取时间、费用及优化聚合酶链式反应(PCR)的条件,成功地从猪细小病毒(PPV)感染的细胞中扩增出预期的158bp片段,经EcoRⅠ酶切鉴定,证实了该扩增片段的特异性。经敏感性试验测定,PCR的最低检出量为0 008病毒血凝(HA)单位。这些结果表明本试验建立的PCR对PPV的检测人有快速、简便、经济、灵敏度高和特异性强的特点。 展开更多
关键词 聚合酶链式反应 特异性 PCR 病毒核酸 血凝 HA 感染 猪细小病毒 PPV 扩增片段
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引物浓度与退火温度对ISSR扩增片段大小的选择性 被引量：7
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作者 彭海 张静 +1 位作者 李晓斐 陈禅友 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第17期5089-5090,共2页
用ISSR法,在不同浓度与不同退火温度下,对长豇豆中基因组的不同分子量片段进行扩增,结果表明,引物浓度对扩增片段大小具有强烈选择性,对退火温度也具有一定的选择性。
关键词 引物 ISSR 扩增片段
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