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示差扣除杂交法及其在分子生物学中的应用 被引量:6
1
作者 李捷 印莉萍 刘维仲 《生物技术通报》 CAS CSCD 1999年第3期9-14,共6页
对示差扣除杂交方法中人们比较熟悉的示差筛选、扣除杂交和DDRT-PCR法,以及近几年新提出的RDA、SSH和RSDD法等六种主要的差异基因筛选法,从其原理、在分子生物学中的应用、优缺点及其改进方法进行了简要概述。
关键词 示差筛选 扣除杂交 MRNA 差别显示
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差异表达基因分离技术的研究进展 被引量:3
2
作者 高雪 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期71-74,共4页
分离并克隆差异表达基因是生命科学的研究热点。近年来,以差示筛选、扣除杂交等基本方法为基础,先后出现了抑制差减杂交,微阵列技术等多种分析差异表达基因的技术,使差异表达基因分离方法不断完善。对这些方法的优缺点、发展趋势及应用... 分离并克隆差异表达基因是生命科学的研究热点。近年来,以差示筛选、扣除杂交等基本方法为基础,先后出现了抑制差减杂交,微阵列技术等多种分析差异表达基因的技术,使差异表达基因分离方法不断完善。对这些方法的优缺点、发展趋势及应用前景进行了简要综述。 展开更多
关键词 差异表达基因 差示筛选 扣除杂交 MRNA差异显示技术 RNA指纹图谱技术 代表性差异分析 抑制差减 微阵列技术
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用扣除杂交法分离藏红花苷合成相关基因的克隆 被引量:1
3
作者 佘卫炜 郭志刚 刘瑞芝 《清华大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1592-1595,共4页
对藏红花苷合成的相关基因进行了初步分离与克隆实验研究,旨在分离与藏红花苷合成相关的特异性表达的cDNA克隆,为进一步从分子水平上研究藏红花素的合成机理奠定基础。实验采用经添加诱导子和合成前体、处于藏红花苷合成状态下的藏红花... 对藏红花苷合成的相关基因进行了初步分离与克隆实验研究,旨在分离与藏红花苷合成相关的特异性表达的cDNA克隆,为进一步从分子水平上研究藏红花素的合成机理奠定基础。实验采用经添加诱导子和合成前体、处于藏红花苷合成状态下的藏红花细胞和未添加诱导子和合成前体、处于生长状态的对照藏红花细胞为材料,采用扣除杂交法成功地分离到6条与藏红花苷合成相关的特异性表达的cDNA克隆。结果表明:其中一条与胡杨中由高盐环境引起的差异表达的一条mRNA的序列有较高的同源性。 展开更多
关键词 植物基因工程 CDNA克隆 扣除杂交 藏红花苷合成
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转录产物MALA1的高表达:与早期非小细胞型肺癌的转移有关(英文)
4
作者 王文兵 周密 +1 位作者 严丽荣 乌慧玲 《江苏大学学报(医学版)》 CAS 2008年第6期461-465,共5页
目的:研究转录产物MALA1的表达水平与早期非小细胞型肺癌(NSCLC)转移之间的关系。方法:用实时定量PCR分析了MALA1基因在70例NSCLC患者中的表达情况。结果:在对Ⅰ期和Ⅱ期NSCLC患者超过5年的随访期中发现,MALA1高表达的患者死亡率超过40%... 目的:研究转录产物MALA1的表达水平与早期非小细胞型肺癌(NSCLC)转移之间的关系。方法:用实时定量PCR分析了MALA1基因在70例NSCLC患者中的表达情况。结果:在对Ⅰ期和Ⅱ期NSCLC患者超过5年的随访期中发现,MALA1高表达的患者死亡率超过40%(12/28),而MALA1低表达的患者死亡率仅有9%(2/22)(P=0.01)。说明高表达量的MALA1很可能是早期NSCLC患者预后不良的一个指标。此外,也发现了MALA1基因与肿瘤组织的转移有关。结论:MALA1的转录水平不仅可以作为预测发生肿瘤转移的高危人群的生物学标记,并有望在今后用于早期NSCLC患者的诊断或治疗中。 展开更多
关键词 转移 非小细胞型肺癌 MALA1 表达 扣除杂交
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抑制性扣除杂交技术(SSH)及其在基因克隆上的研究进展 被引量:21
5
作者 顾克余 翟虎渠 《生物技术通报》 CAS CSCD 1999年第2期13-16,共4页
抑制性扣除杂交技术是一种基因克隆的新方法,它对研究细胞生殖、发育、分化、癌变、衰老及程序化死亡等生命过程有关基因的差异表达以及相关基因的分子克隆提供了有力的工具,本文简要介绍抑制性扣除杂交技术的主要原理,基本过程、优... 抑制性扣除杂交技术是一种基因克隆的新方法,它对研究细胞生殖、发育、分化、癌变、衰老及程序化死亡等生命过程有关基因的差异表达以及相关基因的分子克隆提供了有力的工具,本文简要介绍抑制性扣除杂交技术的主要原理,基本过程、优越性。 展开更多
关键词 抑制性扣除杂交 基因克隆 应用
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分离差异表达基因的方法 被引量:12
6
作者 黄薇 方孝东 +1 位作者 赵文明 林栖凤 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期521-524,共4页
了解不同细胞或同类细胞在不同发育阶段、不同生理状态下的基因表达状况 ,可以为研究生命活动过程提供重要信息。以差别筛选 ,扣除杂交等基本方法为出发点 ,研究基因表达差异的方法不断完善 ,先后出现了DDRT PCR ,RDA ,SSH ,cDNA微阵列 ... 了解不同细胞或同类细胞在不同发育阶段、不同生理状态下的基因表达状况 ,可以为研究生命活动过程提供重要信息。以差别筛选 ,扣除杂交等基本方法为出发点 ,研究基因表达差异的方法不断完善 ,先后出现了DDRT PCR ,RDA ,SSH ,cDNA微阵列 (基因芯片 )等技术。这里着重对这些方法的优缺点及改进进行了论述和评介 ,并对技术的发展趋势进行了分析。 展开更多
关键词 分离 差异表达基因 代表性差异分析 抑制性扣除杂交 CDNA微阵列
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胡杨(Populus euphratica)盐相关基因的克隆 被引量:19
7
作者 曾会明 沈昕 《内蒙古农业大学学报(自然科学版)》 CAS 2004年第2期76-80,共5页
以 2年生胡杨实生苗为研究材料 ,通过用 119mmol L的NaCl溶液浇灌处理 1h ,分别收集NaCl处理前后的细嫩白根设立对照样品与处理样品 ,分离mRNA。用抑制性扣除杂交技术建立胡杨盐处理的cDNA扣除文库 ,并以cDNA阵列杂交技术用32 P标记探... 以 2年生胡杨实生苗为研究材料 ,通过用 119mmol L的NaCl溶液浇灌处理 1h ,分别收集NaCl处理前后的细嫩白根设立对照样品与处理样品 ,分离mRNA。用抑制性扣除杂交技术建立胡杨盐处理的cDNA扣除文库 ,并以cDNA阵列杂交技术用32 P标记探针进行杂交 ,共筛选 6 72个有效克隆 ,从中确认 3个探针进行了序列分析 ,其中 1个为盐抑制表达基因片段 ,2个为盐诱导表达基因片段。分析表明 ,1个盐诱导表达基因片段为 1含 188氨基酸开放阅读框的EST ,该EST具有 10 79个核苷酸。该结果与我们早先检测到的 展开更多
关键词 胡杨 耐盐性 基因克隆 抑制性扣除杂交技术 序列分析
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与芒果子叶切段不定根形成相关基因的cDNA片段的克隆 被引量:11
8
作者 肖洁凝 黄学林 +2 位作者 张以顺 黎茵 李筱菊 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 2004年第2期136-140,共5页
在研究芒果子叶横切所形成的远轴面和近轴面的不定根形成时发现,只在近轴面形成不定根。该研究利用抑制性扣除杂交(suppressive subtractivehybridization,SSH)方法,以子叶切段远轴切面作为参照样品,近轴切面作为检测样品,构建正向差异c... 在研究芒果子叶横切所形成的远轴面和近轴面的不定根形成时发现,只在近轴面形成不定根。该研究利用抑制性扣除杂交(suppressive subtractivehybridization,SSH)方法,以子叶切段远轴切面作为参照样品,近轴切面作为检测样品,构建正向差异cDNA文库,分离与芒果子叶切段不定根形成相关基因的cDNA片段。经Virtual Northern杂交分析,获得6个阳性克隆。序列分析和同源性比较结果表明这些cDNA片段均为首次报告,它们分别与转运蛋白、转录调控因子及酶基因的DNA序列同源。 展开更多
关键词 抑制性扣除杂交(SSH) 芒果(Mangifera INDICA L.) 子叶 不定根形成 差异表达
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抑制性扣除杂交技术(SSH)及其研究进展 被引量:3
9
作者 罗文波 于淑娟 高大维 《生物技术》 CAS CSCD 2000年第3期37-40,共4页
关键词 抑制性扣除杂交技术 SSH
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利用抑制差减杂交技术分离棕色棉纤维特异表达基因 被引量:4
10
作者 李艳军 张新宇 +2 位作者 杨会娜 田新惠 孙杰 《分子植物育种》 CAS CSCD 2009年第1期194-198,共5页
采用棕色棉新彩棉5号为Tester,其白色近等基因系NIL-C5为Driver,通过抑制差减杂交法(suppressive subtractive hybridization,SSH)构建了一个棕色棉纤维色素差异表达基因差减文库。从文库中随机挑选400个克隆,将这些克隆的PCR产物点膜... 采用棕色棉新彩棉5号为Tester,其白色近等基因系NIL-C5为Driver,通过抑制差减杂交法(suppressive subtractive hybridization,SSH)构建了一个棕色棉纤维色素差异表达基因差减文库。从文库中随机挑选400个克隆,将这些克隆的PCR产物点膜进行反向Northern杂交检测,挑选20个差异明显的克隆进行序列分析,结果表明:有5个cDNA片段与已知的功能基因序列相似,其中1个cDNA片段与合成色素的重要酶基因4-香豆酸:CoA连接酶(4CL)基因有较高的同源性,其它cDNA片段在数据库中未找到同源序列。 展开更多
关键词 彩棉 抑制扣除杂交 差异基因
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基因表达差异显示方法研究进展 被引量:2
11
作者 项鹏 《国外医学(临床生物化学与检验学分册)》 2001年第4期179-181,共3页
分离差异表达基因 ,对于研究细胞生命过程的调节机制及研究致病机理具有重要意义。 90年以来 ,先后出现了mR NADD、RDA、SSH、SAGE、DNAmicroarray等多种分离差别表达基因的手段 ,本文对以上方法的原理、基本步骤及其应用作了简要综述。
关键词 MRNA差异显示 代表性差异分析 控制性扣除杂交 基因表达系列分析 DNA微阵列
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Identification of the Rice Vacuolar ATPase B Subunit Gene and Its Expression Pattern Analysis Under Phosphorus Deficiency 被引量:4
12
作者 夏铭 王小兵 +1 位作者 李海波 吴平 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2002年第5期573-578,共6页
A vacuolar ATPase (V-ATPase.) B subunit gene has been cloned and characterized front a phosphorus starvation induced rice root subtractive cDNA library by suppression subtractive hybridization (SSH) method and RT-PCR ... A vacuolar ATPase (V-ATPase.) B subunit gene has been cloned and characterized front a phosphorus starvation induced rice root subtractive cDNA library by suppression subtractive hybridization (SSH) method and RT-PCR amplification. This gene encodes a polypeptide of 487 amino acid residues, containing a conservative ATP binding site and with a molecular weight of 54.06 kD and an isoelectric point of 4.99, southern analysis of the. genomic DNA indicates that V-ATPase B subunit is encoded by a single gene in rice genome. The amino acid homologies of V-ATPase B subunits among different organisms range from 76% to 97% and reveals that the evolution of V-ATPase B subunit is accompanied with the biological evolution. Expression pattern analysis indicated that the maximal expression of V-ATPase B subunit gene occurred at an early stage (6 - 12 h) after phosphorus starvation in roots, and lately stage (24 - 48 It) in leaves. Under phosphorus deficiency, the up-regulated expression of V-ATPase gene was presumed to strengthen the proton transport and provide the required energy to maintain an electrochemical gradient across the tonoplast to facilitate Phosphorus transport. 展开更多
关键词 Oryza sativa vacuolar ATPase B subunit gene phosphorus starvation suppression subtractive hybridization (SSH) gene cloning
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差异显示反转录-PCR及抑制性扣除杂交在基因表达差异分析中的应用 被引量:2
13
作者 黄升谋 邹应斌 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 2002年第2期183-185,共3页
差异显示反转录 -PCR和抑制性扣除杂交是目前广泛应用于基因表达差异分析的方法 ,它们分别具有灵敏度高假阳性率低等特点 ,对其原理、技术。
关键词 差异显示反转录-PCR 抑制性扣除杂交 基因表达差异分析 应用
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mRNA差异显示法及其在水稻分子生物学中的应用 被引量:1
14
作者 黄升谋 郭兆武 《长沙电力学院学报(自然科学版)》 2002年第1期91-94,共4页
对mRNA差异显示法中人们比较熟悉的示差筛选、扣除杂交和DDRT PCR法 ,以及近几年新提出的RDA、SSH 5种主要的差异基因筛选法 ,从其原理、在分子生物学中的应用。
关键词 示差筛选 代表性差示分析 抑制性扣除杂交 差异基因筛选法 MRNA差异显示法 水稻 分子生物学 应用
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鼻咽癌上皮细胞株HNE1差异表达基因的分离与鉴定 被引量:2
15
作者 张必成 周洁 +7 位作者 朱诗国 龚佳蕾 聂新民 吕红斌 何显锋 李小玲 胡赓熙 李桂源 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期743-750,共8页
为了分离鼻咽癌差异表达基因 ,应用抑制性扣除杂交技术 ,在正向抑制性扣除杂交中 ,以鼻咽癌上皮细胞株HNE1cDNA作为检测子 ,以人胚鼻咽上皮细胞cDNA作为驱赶子 ;在反向抑制性扣除杂交中 ,以人胚鼻咽上皮细胞cDNA作为检测子 ,以鼻咽癌上... 为了分离鼻咽癌差异表达基因 ,应用抑制性扣除杂交技术 ,在正向抑制性扣除杂交中 ,以鼻咽癌上皮细胞株HNE1cDNA作为检测子 ,以人胚鼻咽上皮细胞cDNA作为驱赶子 ;在反向抑制性扣除杂交中 ,以人胚鼻咽上皮细胞cDNA作为检测子 ,以鼻咽癌上皮细胞株HNE1cDNA作为驱赶子 ,分别通过抑制性扣除杂交 ,构建了鼻咽癌上皮细胞株HNE1表达下调和表达上调的两个扣除cDNA文库 .从鼻咽癌相关的扣除cDNA文库中随机挑取 1 2 0 0个克隆 ,采用菌落PCR扩增其插入cDNA片段 ,自动点膜制备成cDNA微阵列膜 ,分别用鼻咽癌上皮细胞株HNE1、人胚鼻咽上皮mRNA经逆转录标记cDNA探针 ,分别与cDNA微阵列膜杂交 ,通过杂交信号的自动扫描分析 ,对杂交信号存在 5倍差异的克隆进行测序 ,获得了 1 0个鼻咽癌差异表达基因的cDNA片段 ,其中 3个为新基因序列 ,其GenBank登录号为 :AF5 1 0 1 88、AF5 1 0 1 89和AF5 1 0 1 90 ,7个代表已知基因序列 .采用RT PCR证实S1 0 0A8,CK1 9和RBP1基因在人胚鼻咽上皮中高表达而在鼻咽癌细胞株HNE1中低表达 . 展开更多
关键词 鼻咽癌细胞株HNEl 抑制性扣除杂交 CDNA微阵列 差异表达基因
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胎儿间充质干细胞cDNA扣除文库的构建 被引量:1
16
作者 杨莉 王冬梅 +4 位作者 李梁 白慈贤 曹华 李廷玉 裴雪涛 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第2期89-92,共4页
为了获得胎儿和成人间充质干细胞 (mesenchymalstemcells,MSC)的差异表达基因 ,尤其是在胎儿MSC中特异表达的基因 ,应用抑制扣除杂交技术构建了胎儿和成人MSCcDNA扣除文库。首先 ,分别从胎儿和成人MSC中提取总RNA ,按照SMARTPCR方法依... 为了获得胎儿和成人间充质干细胞 (mesenchymalstemcells,MSC)的差异表达基因 ,尤其是在胎儿MSC中特异表达的基因 ,应用抑制扣除杂交技术构建了胎儿和成人MSCcDNA扣除文库。首先 ,分别从胎儿和成人MSC中提取总RNA ,按照SMARTPCR方法依次合成单链和双链cDNA ,经RsaⅠ酶切后 ,胎儿MSCcDNA分别与两种不同的接头连接 ,再与成人MSCcDNA经过两次扣除杂交及两轮抑制性PCR扩增后 ,将产物与T载体连接构建成cDNA扣除文库 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增。结果 :文库扩增后共获得 890个克隆 ,对所获得的克隆进行PCR扩增鉴定 ,获得 76 8个阳性克隆 ,阳性率为 86 .3%。插入片段大小分布在 0 .2 - 1kb ,平均为 4 0 0 - 6 0 0bp。结论 :抑制扣除杂交技术是一种简便、有效的筛选差异表达基因的方法。胎儿MSCcDNA扣除文库的构建为进一步筛选、克隆胎儿MSC中特异性表达的功能相关基因奠定了基础。 展开更多
关键词 间充质干细胞 抑制扣除杂交 cDNA扣除文库 胎儿 构建 文库扩增 骨髓 成人 特异表达基因
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一种改进的固相扣除杂交法直接克隆全长差异表达基因 被引量:2
17
作者 刘美芹 沈昕 +1 位作者 卢存福 尹伟伦 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期67-72,共6页
该文集多种分离差异表达基因方法的优点于一体,自行优化了一种基于固相扣除杂交和聚合酶链式反应(PCR)技术直接克隆全长差异表达基因的策略.该策略中的所有操作步骤,包括poly(A)+mRNA的分离,cDNA的合成和扣除杂交都是在磁珠上进行的,操... 该文集多种分离差异表达基因方法的优点于一体,自行优化了一种基于固相扣除杂交和聚合酶链式反应(PCR)技术直接克隆全长差异表达基因的策略.该策略中的所有操作步骤,包括poly(A)+mRNA的分离,cDNA的合成和扣除杂交都是在磁珠上进行的,操作简单易行.扣除杂交是用结合在磁珠上的以oligo(dT)为引物合成的对照材料(Driver)的cDNA第一链,直接扣除加有接头的处理材料(Tester)cDNA第二链中的共有序列.多次反复使用Driver一链与Tester二链进行杂交,能有效去除Tester二链中的共有序列.磁珠的分离能最小限度地减少每次杂交造成的损失.最后一轮扣除后的Tester二链中,含有大量差异表达序列,用Tester二链特有的接头引物进行扩增,能进一步提高扣除效率.该文选用此扣除方法,成功分离到了低温驯化沙冬青幼苗和对照苗2个群体的18个差异表达克隆,其中有4个克隆是全长cDNA序列.经序列分析发现,这些基因都与低温相关,进一步说明,该方法可用于克隆未知差异表达基因. 展开更多
关键词 固相扣除杂交 聚合酶链式反应 低温诱导基因
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Identification of Phosphorus Starvation Inducible Genes in Rice by Suppression Subtractive Hybridization 被引量:2
18
作者 夏铭 王首锋 +2 位作者 王小兵 李海波 吴平 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2003年第6期736-741,共6页
Phosphorus is one of the three essential macroelements for plant growth. Plants respond to phosphorus starvation through adaptive mechanisms involved in morphological, biochemical and molecular changes. To investigate... Phosphorus is one of the three essential macroelements for plant growth. Plants respond to phosphorus starvation through adaptive mechanisms involved in morphological, biochemical and molecular changes. To investigate the molecular background of the adaptive mechanisms, the suppression subtractive hybridization (SSH) method was used to construct a rice phosphorus-starvation ( Pi-starvation) induced cDNA library. Through screening of the cDNA library and sequencing of the enriched cDNAs, 18 known genes and 47 novel genes were identified. The known genes are involved in different metabolic processes, including phosphate uptake and transport, signal transduction, protein synthesis and degradation, carbon metabolism and stress response. Northern analysis was performed to detect the expression patterns of some known genes and novel genes under different phosphorus levels. Different expression patterns of the selected genes were identified, which suggests that genes involved in different pathways may have different responses to Pi-starvation. 展开更多
关键词 phosphorus starvation suppression subtractive hybridization (SSH) gene expression RICE
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烟草突变体T-cldf叶片差异ESTs的克隆与分析 被引量:2
19
作者 蔡刘体 郑少清 +2 位作者 叶定勇 陈雅平 黄学林 《烟草科技》 EI CAS 北大核心 2008年第1期50-55,共6页
为了获得烟叶生长发育过程中相关的基因信息,以烟草突变体T-cldf叶片为Tester材料,以烟草K346叶片为Driver材料,应用抑制性扣除杂交(Suppression subtractive hybridization,SSH)技术构建了基因差异表达文库,代表在突变体T-cldf叶片中... 为了获得烟叶生长发育过程中相关的基因信息,以烟草突变体T-cldf叶片为Tester材料,以烟草K346叶片为Driver材料,应用抑制性扣除杂交(Suppression subtractive hybridization,SSH)技术构建了基因差异表达文库,代表在突变体T-cldf叶片中特异表达的cDNA。对随机挑选的部分克隆,经过PCR检测和点杂交筛选的阳性克隆进行序列测定,并与GenBank数据库中的序列进行BLAST比较分析,获得62个表达序列标签(ESTs,已登录GenBank数据库),按照其功能可以分为7类。其中与烟草光合作用相关的ESTs有9个,与结构蛋白相关的有4个,与生理代谢相关的有11个,还有11个基因功能信息未知的ESTs和20个在烟草中首先获得的ESTs。 展开更多
关键词 烟草 突变体 抑制性扣除杂交(SSH) 表达序列标签(ESTs)
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抑制性扣除杂交(SSH)技术原理及在水稻基因表达差异分析中的应用 被引量:1
20
作者 黄升谋 《孝感学院学报》 2002年第3期36-39,共4页
抑制性扣除杂交法运用了杂交二极动力学和链内退火优先于链间的原理 ,使原丰度有差别的单链cDNA相对含量基本一致 ,使非目的片段两端反向重复序列退火时产生“发卡”结构 ,不能与引物配对 ,从而选择性地抑制了非目的片段扩增。该方法假... 抑制性扣除杂交法运用了杂交二极动力学和链内退火优先于链间的原理 ,使原丰度有差别的单链cDNA相对含量基本一致 ,使非目的片段两端反向重复序列退火时产生“发卡”结构 ,不能与引物配对 ,从而选择性地抑制了非目的片段扩增。该方法假阳性率低 ,灵敏度高 。 展开更多
关键词 抑制性扣除杂交 基因表达 差异分析
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