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人骨髓间充质干细胞定向诱导分化为成骨细胞及其鉴定 被引量:58
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作者 殷晓雪 陈仲强 +2 位作者 郭昭庆 马庆军 党耕町 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 2004年第2期88-91,共4页
目的 探讨将成人骨髓间充质干细胞 (MSCs)定向诱导分化为成骨细胞的方法 ,并对所诱导细胞的成骨特性进行鉴定。 方法 分离人骨髓 ,梯度离心并结合全骨髓法进行培养 ,培养基中添加成骨诱导剂地塞米松、β-甘油磷酸钠及抗坏血酸。贴壁... 目的 探讨将成人骨髓间充质干细胞 (MSCs)定向诱导分化为成骨细胞的方法 ,并对所诱导细胞的成骨特性进行鉴定。 方法 分离人骨髓 ,梯度离心并结合全骨髓法进行培养 ,培养基中添加成骨诱导剂地塞米松、β-甘油磷酸钠及抗坏血酸。贴壁细胞传代 ,取第 3代细胞鉴定其成骨特性 ;在倒置相差显微镜下观察细胞形态 ,钙 -钴法染色检测碱性磷酸酶 (AL P)表达 ,免疫组织化学检测 型胶原表达 ,原位杂交检测骨连接素 (ON)、骨桥素 (OP)表达 ,Von Kos-sa染色检测钙结节形成。 结果 第 3代人 MSCs呈典型的成骨细胞形态 ,可连续传代 10次 ;AL P染色阳性率达 85 % ; 型胶原、ON和 OP表达阳性 ;Von Kossa染色可见钙结节形成。 结论 成功地将人 MSCs诱导分化为成骨细胞 ,所诱导的细胞具有典型的成骨细胞特性。 展开更多
关键词 髓间充质干细胞 诱导 分化 细胞 细胞鉴定 组织工程 特性
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不同频率脉冲电磁场诱导人骨髓间充质干细胞成骨分化的研究 被引量:24
2
作者 宋晋刚 许建中 +2 位作者 周强 罗飞 李洪鹏 《中华物理医学与康复杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期134-137,共4页
目的探讨脉冲电磁场(PEMF)诱导人骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨分化的适合频率. 方法选用场强1.1 mT,频率分别为5,25,50,75,100和150 Hz的PEMF作用于MSCs,每日30 min,连续作用21 d,光镜下观察细胞形态变化,电镜下观察细胞超微结构,酶化学... 目的探讨脉冲电磁场(PEMF)诱导人骨髓间充质干细胞(MSCs)成骨分化的适合频率. 方法选用场强1.1 mT,频率分别为5,25,50,75,100和150 Hz的PEMF作用于MSCs,每日30 min,连续作用21 d,光镜下观察细胞形态变化,电镜下观察细胞超微结构,酶化学法和放免技术检测细胞的碱性磷酸酶(ALP)含量和骨钙素(OC)表达情况. 结果不同频率PEMF作用组均能诱导MSCs向成骨细胞分化;从5~50 Hz频段,PEMF的成骨诱导作用随着频率的增加而增强;从50~150 Hz频段,PEMF的成骨诱导作用随着频率的增加而减弱. 结论频率是PEMF诱导MSCs成骨分化的重要影响因素之一,50 Hz可能为诱导MSCs体外成骨分化的适合频率. 展开更多
关键词 分化 诱导 髓间充质干细胞 脉冲电磁场 MSC 作用 镜下观察 结论 频率 场强
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大鼠骨髓基质细胞的生长特点和在诱骨条件下的成骨特性 被引量:18
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作者 韩君 陈锐 +3 位作者 陈槐卿 邓力 唐方 田卫 《华西医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期235-239,共5页
目的 研究大鼠骨髓基质细胞 (r MSCs)的生长特点和在诱导条件下的成骨特性。方法 使用密度梯度法分离成年大鼠骨髓基质细胞进行培养 ,保留贴壁细胞传代 ,观察、测试在培养液中添加成骨诱导剂地塞米松 (Dex) 10 - 8mol/ L、β-甘油磷酸... 目的 研究大鼠骨髓基质细胞 (r MSCs)的生长特点和在诱导条件下的成骨特性。方法 使用密度梯度法分离成年大鼠骨髓基质细胞进行培养 ,保留贴壁细胞传代 ,观察、测试在培养液中添加成骨诱导剂地塞米松 (Dex) 10 - 8mol/ L、β-甘油磷酸钠 (β- GP) 10 mm ol/ L,抗坏血酸 (AA) 5 0 μg/ ml条件下骨髓基质细胞的生长变化和成骨分化。结果 形态学观察表明 ,r MSCs贴壁细胞呈集落生长 ,有成纤维细胞样外观。利用 MTT法和流式细胞术 (FCM)测定增殖的结果表明 ,传代次数增加 ,r MSCs的增殖活性升高。成骨诱导剂促进骨髓基质细胞的增殖 ,而且对多次传代细胞促增殖作用明显。成骨诱导剂促进骨髓基质细胞成骨 ,在诱导 3周时即出现明显的钙化结节。组织化学染色结果显示 ,非诱导条件下 MSCs的碱性磷酸酶 (AL P)水平会随传代而升高。传 3代 r MSCs的 AL P的表达较弱 ,诱导一周后 AL P的表达明显升高 ,超过未加诱导剂的传一代大鼠成骨细胞 (OB)的 AL P表达。结论 本实验表明所培养的 r MSCs仍处于低分化水平 ,具有骨祖细胞的特性。 展开更多
关键词 大鼠 髓基质细胞 诱导 细胞增殖 分化 rMSCs
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骨形成蛋白2活性多肽体外定向诱导骨髓间充质干细胞向成骨方向分化的剂量依赖性研究 被引量:25
4
作者 段智霞 郑启新 +2 位作者 郭晓东 袁泉 陈顺广 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1118-1122,共5页
目的探讨自行合成的骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein2,BMP-2)活性多肽对大鼠骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)体外定向诱导成骨的能力,评价BMP-2活性多肽的成骨诱导性及诱导成骨的剂量依赖性。方法取4周龄... 目的探讨自行合成的骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein2,BMP-2)活性多肽对大鼠骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)体外定向诱导成骨的能力,评价BMP-2活性多肽的成骨诱导性及诱导成骨的剂量依赖性。方法取4周龄Wistar大鼠分离培养MSCs,传至第3代时改用条件培养基,培养基中分别加入浓度为300、200、100、50及0μg/ml的BMP-2活性多肽,并依次记为A、B、C、D和E组。细胞培养至5、10、15及20d,检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,测定钙含量,采用实时荧光定量PCR(fluorescent quantitativePCR,FQ-PCR)检测型胶原、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)及骨钙素(osteocalcin,OCN)mRNA的表达,检测不同浓度BMP-2活性多肽体外诱导成骨的能力。结果倒置相差显微镜下观察,用条件培养基培养3~4d后,培养细胞由长梭形转变为短梭形或多角形。随条件培养基中BMP-2活性多肽浓度的增加,细胞发生成骨样改变的时间提前。ALP活性和钙含量检测显示,A组和B组较其他组增加明显,且差异有统计学意义(P<0.05),但A、B组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。FQ-PCR检测发现不同浓度条件培养基培养14d后,型胶原、OPN和OCN mRNA在各组均有表达。Ct值表明其表达量的大小顺序为A、B、C、D组,E组无表达,A组和B组的Ct值明显大于C组和D组,差异有统计学意义(P<0.05),但A组和B组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论BMP-2活性多肽能有效地促进MSCs向成骨方向分化,其诱导作用存在剂量依赖关系,最佳诱导剂量为200μg/ml。 展开更多
关键词 蛋白2活性多肽 髓间充质干细胞 诱导 剂量依赖性
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iRoot BP Plus对脱落乳牙牙髓干细胞和人牙髓干细胞生物学行为的影响 被引量:25
5
作者 王静 方滕姣子 刘鹤 《上海口腔医学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期251-258,共8页
目的:评估iRoot BP Plus和ProRoot MTA作为盖髓剂对脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)和人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,DPSC)生物学行为的影响.方法:选择处于生理性牙根吸收期... 目的:评估iRoot BP Plus和ProRoot MTA作为盖髓剂对脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)和人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,DPSC)生物学行为的影响.方法:选择处于生理性牙根吸收期的乳牙和无龋的正畸减数前磨牙或第三磨牙,体外提取、分离和培养SHED和DPSC,制备iRoot BP Plus和ProRoot MTA标准膜片并提取浸提液,通过CCK-8法检测l、3、5、7d时iRoot BP Plus和MTA浸提液对SHED和DPSC增殖能力的影响;Transwell小室和划痕修复实验观察iRoot BP Plus和MTA浸提液对SHED和DPSC迁移能力的影响;SHED和DPSC分别接种于iRoot BP Plus和MTA样品表面进行培养,分别在1、3、5d使用鬼笔环肽(phalloidin)和DAPI(4',6-diamidino-2-phenylindole)进行免疫荧光染色,观察细胞骨架变化;SHED和DPSC分别在成骨诱导培养基、含MTA浸提液的成骨诱导培养基和含iRoot BP Plus浸提液的成骨诱导培养基中进行矿化诱导,7d和14d时进行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色以及ALP定量分析,21 d时进行茜素红染色和半定量分析钙盐沉积量,采用SPSS 19.0软件包对数据进行统计学分析.结果:iRoot BP Plus和MTA均能促进SHED和DPSC的细胞增殖;细胞迁移与黏附实验中,iRoot BP Plus和MTA均能促进SHED和DPSC的迁移与黏附,其中,iRoot BP Plus的作用更显著(p=0.000);经矿化诱导后,iRoot BP Plus组的SHED和DPSC的ALP活性强于MTA组,茜素红染色和半定量分析钙盐沉积量结果显示,iRoot BP Plus和MTA均能促进细胞矿化,且iRoot BP Plus促进细胞矿化的能力显著强于MTA (P=0.000).结论:iRoot BP Plus和MTA均具有较好的生物相容性,均能促进SHED和DPSC的细胞增殖,能够促进细胞黏附、迁移,具有较好的成骨分化能力;且iRoot BP Plus促进SHED和DPSC黏附、迁移和成骨分化的能力相对MTA更好,iRoot BP Plus和MTA均可作为乳牙和年轻恒牙牙髓治疗的盖髓剂. 展开更多
关键词 SHED DPSC iRoot BP PLUS MTA 增殖 迁移 黏附 诱导
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大鼠脂肪组织来源干细胞的分离、培养和生物学特性的研究 被引量:13
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作者 邓春华 孙祥宙 +3 位作者 高勇 罗道升 刘贵华 黄燕平 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2008年第2期99-105,共7页
目的:建立一种分离和培养大鼠脂肪干细胞的方法,并探讨获得的脂肪干细胞的部分生物学特性。方法:取SD大鼠腹股沟处的皮下脂肪,I型胶原酶消化法获取原代脂肪干细胞,接种至含10%胎牛血清的DMEM培养液,培养并适时传代,每日在倒置显微镜下... 目的:建立一种分离和培养大鼠脂肪干细胞的方法,并探讨获得的脂肪干细胞的部分生物学特性。方法:取SD大鼠腹股沟处的皮下脂肪,I型胶原酶消化法获取原代脂肪干细胞,接种至含10%胎牛血清的DMEM培养液,培养并适时传代,每日在倒置显微镜下观察记录细胞形态和增殖特征,测定其生长曲线,进行冻存复苏实验。第3代细胞使用成骨诱导液诱导其向成骨细胞分化,进行VonKossa染色;使用成脂诱导液诱导其向成脂细胞分化,进行油红O染色。结果:从大鼠脂肪组织中分离出脂肪干细胞,其在体外生长增殖迅速,呈成纤维样细胞生长。生长曲线表明第3代脂肪干细胞增殖能力最强,可以在地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠的诱导下,表现出成骨细胞特性,VonKossa染色出现矿化结节;在IBMX(3-异丁基-1-甲基黄嘌呤)、吲哚美辛、胰岛素的诱导下,表现出脂肪细胞特性,油红O染色后发现胞浆内有脂肪滴。脂肪干细胞在液氮中冻存1个月后,其生长增殖活性和多向分化能力没有明显降低。结论:成功建立了一种简单有效的分离和培养大鼠脂肪干细胞的方法,获得的脂肪干细胞生长增殖旺盛,具有多向分化能力,可以方便地保存,有望作为细胞治疗和组织工程的种子细胞。在分离大鼠的脂肪干细胞时,NH4Cl裂解红细胞这一步可以省略,地塞米松在成脂诱导过程中不是必需的。 展开更多
关键词 脂肪干细胞 大鼠 诱导 诱导
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枸杞多糖含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导过程及Wnt信号通路的影响 被引量:20
7
作者 王雨 苗永霸 +2 位作者 王银 张春 苗珍花 《宁夏医科大学学报》 2017年第5期525-529,F0002,共6页
目的探讨枸杞多糖含药血清对诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程及Wnt信号通路的影响。方法 4月龄SD雄性大鼠15只,随机分3组分别灌胃给予枸杞多糖(LBP)100、50mg·kg-1及蒸馏水,常规制备含药及空白血清;全骨髓培养法培养S... 目的探讨枸杞多糖含药血清对诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程及Wnt信号通路的影响。方法 4月龄SD雄性大鼠15只,随机分3组分别灌胃给予枸杞多糖(LBP)100、50mg·kg-1及蒸馏水,常规制备含药及空白血清;全骨髓培养法培养SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),经纯化鉴定后,随机分为培养基组、诱导剂组、空白血清+诱导剂组(空白血清组)、LBP血清高、低剂量+诱导剂组(LBP血清高、低剂量组),进行成骨诱导;采用碱性磷酸酶(ALP)、茜素红染色检测BMSCs的成骨活性和矿化能力,Western blot检测β-catenin和wnt10b蛋白的表达情况。结果 (1)与培养基组比较,诱导剂组、空白血清组、LBP血清高及低剂量组ALP、茜素红染色均为阳性,β-catenin、wnt10b表达均增加(P<0.05或<0.01);(2)与诱导剂组比较,空白血清组、LBP血清低剂量组ALP沉淀、矿化结节无明显差别,LBP血清高剂量组增多;与诱导剂组比较,LBP血清高、低剂量组β-catenin、wnt10b表达增加(P均<0.05),空白血清组差异无统计学意义(P>0.05);(3)与空白血清组比较,LBP血清低剂量组的ALP沉淀、矿化结节无明显差异,LBP血清高剂量组增多,LBP血清高、低剂量组β-catenin、wnt10b表达增加(P均<0.05)。结论含LBP血清能增加经成骨诱导的BMSCs的成骨活性和矿化能力,这种作用可能与激活Wnt信号通路相关蛋白β-catenin和wnt10b蛋白的表达有关。 展开更多
关键词 枸杞多糖 髓间充质干细胞 诱导 Β-CATENIN wnt10b
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兔骨髓基质细胞在诱导条件下的成骨特性 被引量:12
8
作者 顾祖超 李起鸿 +1 位作者 赵玉峰 周红星 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期527-530,共4页
目的 观察兔骨髓基质细胞的生长特点及诱导条件下的成骨能力。方法 使用密度梯度离心分离兔骨髓基质细胞进行培养 ,保留贴壁细胞传代 ,观察在培养液中添加地塞米松、维生素C、β 甘油磷酸钠条件下骨髓基质细胞生长及成骨分化情况。结... 目的 观察兔骨髓基质细胞的生长特点及诱导条件下的成骨能力。方法 使用密度梯度离心分离兔骨髓基质细胞进行培养 ,保留贴壁细胞传代 ,观察在培养液中添加地塞米松、维生素C、β 甘油磷酸钠条件下骨髓基质细胞生长及成骨分化情况。结果 骨髓基质细胞呈成纤维细胞样表现 ,增殖能力强。诱导条件下第 2代细胞的碱性磷酸酶活性明显增高 ,10~ 12d达到最高峰 ,并且出现矿化结节。结论 使用本实验方法 ,获得的骨髓基质细胞成骨能力肯定 ,增殖能力强 ,可作为骨组织工程的种子细胞。 展开更多
关键词 髓基质细胞 地塞米松 诱导 分化
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BMP-2对大鼠骨髓间充质干细胞成骨作用的影响 被引量:17
9
作者 孙健 余优成 +2 位作者 顾章愉 顾亮 毕玮 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2011年第4期352-357,共6页
目的:携带骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)基因的慢病毒载体感染大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)后,观察BMP-2对BMSCs成骨作用的影响。方法:原代培养大鼠BMSCs并进行传代及鉴定,用携带BM... 目的:携带骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)基因的慢病毒载体感染大鼠骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)后,观察BMP-2对BMSCs成骨作用的影响。方法:原代培养大鼠BMSCs并进行传代及鉴定,用携带BMP-2的慢病毒感染第3代BMSCs后,进行骨向诱导,通过茜素红染色观察钙沉积。观察细胞黏附能力及对成骨标志分子骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)、胶原蛋白Ⅰ(Col-Ⅰ)及smad(drosophila mothersagainst decapentaplegic protein)表达的影响。采用SPSS11.0软件包对数据进行统计学分析。结果:①原代培养出大鼠骨髓间充质干细胞并进行鉴定;②携带BMP-2和EGFP的慢病毒感染第3代BMSCs后,免疫荧光检测和RT-PCR及WB检测感染成功;③大鼠骨髓间充质干细胞感染慢病毒后进行骨向诱导,钙沉积明显增加;④BMSCs细胞黏附能力增强;⑤OPN、OCN、Col-Ⅰ及smad表达增加。结论:BMP-2通路增强了细胞黏附及相关成骨分化因子的表达,可明显促进大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞定向分化,为BMSCs作为组织工程研究的种子细胞提供实验支持。 展开更多
关键词 形态发生蛋白2 髓间充质干细胞 诱导 大鼠
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左、右归丸对大鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导中转化生长因子β1及Smad2/3的影响 被引量:18
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作者 孙月娇 宋囡 +2 位作者 何文智 何丽娟 任艳玲 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第10期1496-1501,共6页
背景:滋补肾阴左归丸、温补肾阳右归丸均可协同诱导剂诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,但其机制尚有待探讨。目的:观察左、右归丸含药血清对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中转化生长因子β1及其信号转导蛋白Sma... 背景:滋补肾阴左归丸、温补肾阳右归丸均可协同诱导剂诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,但其机制尚有待探讨。目的:观察左、右归丸含药血清对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程中转化生长因子β1及其信号转导蛋白Smad2/3表达的影响。方法:运用全骨髓贴壁法分离和培养大鼠骨髓间充质干细胞;分别以空白血清对照组,左归丸、右归丸、阳性对照药补佳乐制备的大鼠含药血清加诱导剂(地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠),以及诱导剂组为对照共5组对骨髓间充质干细胞进行干预。采用Western blot法检测Ⅰ型胶原蛋白表达,用免疫组化法检测转化生长因子和Smad2/3在细胞内的表达。结果与结论:左归丸、右归丸含药血清诱导骨髓间充质干细胞成骨后Ⅰ型胶原蛋白、转化生长因子β1、Smad2/3蛋白表达高于空白组、诱导剂组,差异有显著性意义(P<0.05),且左归丸优于右归丸(P<0.05)。提示左、右归丸含药血清能通过转化生长因子β1调节Smad2/3信号通路促进骨髓间充质干细胞成骨分化,且左归丸组效果更好,表明中医"滋肾阴"法更能有效的促进骨髓间充质干细胞的成骨分化。 展开更多
关键词 干细胞 髓干细胞 左归丸 右归丸 肾藏精 含药血清 髓间充质干细胞 诱导 Ⅰ型胶原蛋白 信号转导 转化生长因子Β1 信号转导蛋白 Smad2 3 国家自然科学基金
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从BMSCs探讨“肾主骨生髓”理论指导下中医药治疗骨质疏松症的研究 被引量:15
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作者 李建国 谢兴文 +5 位作者 李鼎鹏 李辉 贾元霞 丁聚贤 苏积亮 柳博 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1205-1207,1218,共4页
骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)是在一定条件下能够向成骨细胞分化的多能干细胞,其增殖分化与中医“肾主骨生髓”理论及骨质疏松症(osteoporosis,OP)关系密切,大量研究表明传统补肾中药诱导BMSCs增殖分化... 骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)是在一定条件下能够向成骨细胞分化的多能干细胞,其增殖分化与中医“肾主骨生髓”理论及骨质疏松症(osteoporosis,OP)关系密切,大量研究表明传统补肾中药诱导BMSCs增殖分化治疗OP疗效显著。本文以中医“肾主骨生髓”理论为指导,探讨“肾藏精-主骨生髓-BMSCs-OP”之间的科学内涵,并探讨“补肾生髓”理论指导下传统补肾中药通过诱导BMSCs成骨分化与OP的关系,结合补肾中药及复方诱导BMSCs治疗OP的现代医学研究,为进一步探索有效的中医药治疗方案及发挥中医药独特优势提供依据。 展开更多
关键词 髓间充质干细胞 肾主生髓 质疏松症 补肾中药 诱导
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二磷酸盐和骨碎补总黄酮对诱导后成骨细胞影响的实验研究 被引量:15
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作者 田坤 尹文哲 +2 位作者 刘伟 薛震 赵金东 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2007年第8期559-563,共5页
目的探索二磷酸盐和骨碎补总黄酮联合作用如何在分子水平发挥作用于成骨细胞,揭示其效果如何。方法使用诱导方法作用于骨髓基质干细胞,使之转化为成骨细胞;用RT-PCR检验成骨细胞;不同浓度的二磷酸盐或骨碎补总黄酮配制成条件培养基,作... 目的探索二磷酸盐和骨碎补总黄酮联合作用如何在分子水平发挥作用于成骨细胞,揭示其效果如何。方法使用诱导方法作用于骨髓基质干细胞,使之转化为成骨细胞;用RT-PCR检验成骨细胞;不同浓度的二磷酸盐或骨碎补总黄酮配制成条件培养基,作用于成骨细胞,并分析生长曲线,分析细胞基因碱性磷酸酶(alkaline phosphatase ALP)和胶原酶Ⅰ(collagenase colⅠ)表达情况。结果骨髓基质细胞经过4周诱导可转化为表达colⅠ和ALP的成骨细胞,经过生长曲线分析,二磷酸盐和骨碎补总黄酮10^-4^-10-6mmol·L^-1时,对诱导后的成骨细胞有抑制作用;10^-8mmol·L^-1有促进作用;10^-10-10^-12mmol·L^-1不明显,其中10^-8mmol·L^-1作用最强;基因分析后,发现二磷酸盐和骨碎补总黄酮促进成骨细胞表达colⅠ和ALP,且两者合用效果大于单独用药。结论二磷酸盐和骨碎补总黄酮合用均可促进成骨细胞基因表达,且两者合用效果大于单独用药。 展开更多
关键词 髓基质干细胞 诱导 二磷酸盐 碎补总黄酮
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补骨脂素对大鼠骨髓间充质干细胞成骨及成脂分化的影响 被引量:14
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作者 张洪跃 周潘宇 +2 位作者 汪洋 许硕贵 王秀会 《现代生物医学进展》 CAS 2017年第15期2813-2816,2832,共5页
目的:探讨补骨脂素对大鼠骨髓间充质干细胞成骨及成脂分化的影响及其可能机制。方法:选取3月龄无特定病原体级健康雌性SD大鼠25只,通过切除卵巢建立绝经大鼠模型。6周后,通过全骨髓贴壁法分离BMSCs并进行原代和传代培养,传至3代后进行... 目的:探讨补骨脂素对大鼠骨髓间充质干细胞成骨及成脂分化的影响及其可能机制。方法:选取3月龄无特定病原体级健康雌性SD大鼠25只,通过切除卵巢建立绝经大鼠模型。6周后,通过全骨髓贴壁法分离BMSCs并进行原代和传代培养,传至3代后进行成骨和成脂诱导,并按补骨脂素浓度梯度0、5、10、15、20μmol/L进行处理。细胞增殖2周后,通过碱性磷酸酶(ALP)染色实验和油红O染色观察BMSCs成骨和成脂的分化,应用蛋白免疫印迹法测定核心结合蛋白因子RUNX2、骨钙素(OCN)、增强子结合蛋白β(C/EBP-β)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)的表达。结果:成骨诱导BMSCs在补骨脂素的作用下ALP染色呈阳性反应,且补骨脂素的浓度为15μmol/L时阳性反应最强。RUNX2、OCN蛋白的表达随着补骨脂素浓度的升高而升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与空白组比较,成脂诱导BMSCs在补骨脂素的作用下油红O染色阳性反应程度出现下降,补骨脂素浓度为20μmol/L时,油红O染色阳性率最低。C/EBP-β、PPAR-γ蛋白的表达均随着补骨脂素浓度的升高而降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:补骨脂素体外可增强BMSCs成骨分化作及抑制BMSCs成脂分化,可能与其调节RUNX2、OCN、C/EBP-β和PPAR-γ蛋白的表达有关。 展开更多
关键词 脂素 诱导 诱导 髓间充质干细胞
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全骨髓法培养C57小鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性 被引量:13
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作者 张荣耀 毕晓娟 +2 位作者 马艳 段显琳 江明 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第1期45-50,共6页
背景:饲养层细胞多数利用丝裂霉素C来处理,虽丝裂霉素C抑制了细胞增殖,但是细胞仍处于有分泌功能的活性状态,能够分泌不同的细胞因子。而骨髓中的非间充质骨髓细胞和血浆中的各种分泌因子,保持间充质细胞生长的微环境,提高间充质干细胞... 背景:饲养层细胞多数利用丝裂霉素C来处理,虽丝裂霉素C抑制了细胞增殖,但是细胞仍处于有分泌功能的活性状态,能够分泌不同的细胞因子。而骨髓中的非间充质骨髓细胞和血浆中的各种分泌因子,保持间充质细胞生长的微环境,提高间充质干细胞的产量。目的:探究全骨髓培养法分离培养的小鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性。方法:采用全骨髓贴壁法纯化扩增C57小鼠的骨髓间充质干细胞,检测细胞增殖的动力学变化、细胞表面的免疫标志物、多向分化的潜能及细胞周期的变化。结果与结论:全骨髓培养法获得的小鼠骨髓间充质干细胞具有黏附于塑料培养器皿的能力,流式细胞仪检测表达CD45,CD105和Sca-1,不表达CD34,CD133和C-kit等间充质干细胞的表面标记特征;细胞倍增时间(57.11±1.5)h;诱导后具有向成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞分化的能力;细胞周期分析表明64%的细胞处于G0-G1期。提示全骨髓培养法获取的C57小鼠骨髓间充质细胞具有间充质干细胞的生物学特征。 展开更多
关键词 干细胞 髓干细胞 培养 髓间充质干细胞 细胞培养 分化 诱导 诱导 诱导 新疆维吾尔自治区自然科学基金
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组织块贴壁法扩增兔脂肪干细胞 被引量:13
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作者 刘琴 王丽平 +3 位作者 喻晶 陈芳 刁波 张宜 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第1期88-93,共6页
背景:研究显示兔脂肪干细胞的体外分离方法大多数为Ⅰ型胶原酶消化法,采用组织块贴壁法扩增兔脂肪干细胞尚不多见。目的:采用组织块贴壁法从兔脂肪组织中分离培养兔脂肪干细胞,并进行成脂、成骨的诱导分化。方法:采用组织块贴壁法分离... 背景:研究显示兔脂肪干细胞的体外分离方法大多数为Ⅰ型胶原酶消化法,采用组织块贴壁法扩增兔脂肪干细胞尚不多见。目的:采用组织块贴壁法从兔脂肪组织中分离培养兔脂肪干细胞,并进行成脂、成骨的诱导分化。方法:采用组织块贴壁法分离出兔脂肪干细胞,进行体外培养,观察其形态特征。取对数生长期的第3代细胞,用MTT法绘制其生长曲线;流式细胞仪检测其表面抗原CD29、CD44、CD45的表达情况;分别用成脂和成骨诱导培养液诱导其向脂肪细胞和成骨细胞分化,油红O、茜素红染色定性鉴定。结果与结论:体外培养的兔脂肪干细胞呈梭形纤维样细胞形态,生长力旺盛。流式细胞术分析结果显示,第3代兔脂肪间充质干细胞强表达CD29,CD44,阴性表达CD45。兔脂肪干细胞经成脂诱导14 d后,油红O染色阳性;成骨诱导培养14 d后,茜素红染色阳性。提示组织块贴壁法可以分离培养出兔脂肪干细胞。 展开更多
关键词 干细胞 脂肪干细胞 培养 组织块贴壁培养 细胞鉴定 诱导分化 诱导 诱导
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异体脱钙骨基质骨粒骨水泥骨形态发生蛋白复合材料的成骨诱导活性 被引量:10
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作者 周勇 范清宇 +2 位作者 蒋维中 蔡和平 文艳华 《第四军医大学学报》 1999年第12期1085-1087,共3页
探讨异体脱钙骨基质(DBM)骨粒、骨水泥(BC)及重组人骨形态发生蛋白一2(rhBMP-2)复合骨缺损修复材料成骨诱导活性.方法:小鼠股部肌袋内植入复合材料,不同时间分别取材HE染色观察复合骨缺损修复材料的异位诱导成骨活性;检测不... 探讨异体脱钙骨基质(DBM)骨粒、骨水泥(BC)及重组人骨形态发生蛋白一2(rhBMP-2)复合骨缺损修复材料成骨诱导活性.方法:小鼠股部肌袋内植入复合材料,不同时间分别取材HE染色观察复合骨缺损修复材料的异位诱导成骨活性;检测不同复合质量比的复合材料的聚合温度.结果:第7日时材料外周即形成间充质组织包膜,并沿材料不规则裂隙向植入材料内部长人间充质组织.第14日间充质组织继续大量长入且逐渐深火材料内部,部分增生的间充质组织细胞向软骨细胞分化.第ZI田间充质组织细胞继续分化,软骨样细胞及软骨样组织生成量增多,并可见DBM骨粒部分被新生软骨样组织包裹、爬行吸收替代现象;软骨样组织逐渐成熟,间有新骨生成.第28日始,较多量的新骨生成,并可见类似哈佛氏系统样组织.复合材料中骨水泥聚合热不影响材料中诱导成骨成分的活性.结论:复合材料具有一定的诱导成骨活性;复合材料中的脱钙骨基质骨粒可降解.即DBM骨粒诱导成骨因子及复合其中的rhBMP-2在诱导新骨不断充填材料内部不规则裂隙后,仍可在DBM骨粒被爬行吸收的空间中继续有新生骨组织生成. 展开更多
关键词 诱导 脱钙基质 缺损修复 水泥 RHBMP2
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体外诱导条件下大鼠骨髓基质细胞骨钙素和Ⅰ型胶原mRNA的表达 被引量:6
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作者 陈槐卿 韩君 +3 位作者 李良 卢江华 张文胜 陈锐 《华西医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期200-203,共4页
目的 研究体外培养大鼠骨髓基质细胞诱导条件下 ,成骨分化标志骨钙素和 型胶原 m RNA水平的表达。方法 采用成骨诱导剂 (含地塞米松 10 - 8mol/ L、β甘油磷酸钠 10 mm ol/ L和抗坏血酸 AA 5 0μg/ml)对培养状态下的不同代大鼠骨髓... 目的 研究体外培养大鼠骨髓基质细胞诱导条件下 ,成骨分化标志骨钙素和 型胶原 m RNA水平的表达。方法 采用成骨诱导剂 (含地塞米松 10 - 8mol/ L、β甘油磷酸钠 10 mm ol/ L和抗坏血酸 AA 5 0μg/ml)对培养状态下的不同代大鼠骨髓基质细胞进行成骨诱导 ,提取 RNA,采用 RT- PCR方法 ,以β-肌动蛋白 c DNA为内参照 ,检测骨钙素和 型胶原 m RNA的表达。结果 与对照组相比 ,接受成骨诱导剂作用的大鼠骨髓基质细胞随诱导时间的延长骨钙素和 型胶原 m RNA出现高表达 ,且维生素 D为诱导骨钙素 m RNA表达的必需成分。结论 体外培养的大鼠骨髓基质细胞保持成骨未分化状态 ,无骨钙素和 型胶原 m RNA的表达 ,诱导后可向成骨分化 ,骨钙素和 型胶原 m 展开更多
关键词 大鼠 髓基质细胞 诱导 钙素 MRNA Ⅰ型胶原
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左、右归丸含药血清通过p38MAPK信号通路干预BMSCs成骨诱导的研究 被引量:12
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作者 曲宁宁 何丽娟 +1 位作者 何文智 任艳玲 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2016年第6期1326-1329,I0005,共5页
目的:基于p38信号通路探讨左、右归丸含药血清对BMSCs成骨诱导的机制。方法:运用全骨髓贴壁法分离和培养大鼠BMSCs;分别以左归丸、右归丸、两方共同药、滋肾阴药、补肾阳药、阳性对照药补佳乐制备的大鼠含药血清加诱导剂(地塞米松、维生... 目的:基于p38信号通路探讨左、右归丸含药血清对BMSCs成骨诱导的机制。方法:运用全骨髓贴壁法分离和培养大鼠BMSCs;分别以左归丸、右归丸、两方共同药、滋肾阴药、补肾阳药、阳性对照药补佳乐制备的大鼠含药血清加诱导剂(地塞米松、维生素C、β-甘油磷酸钠)、诱导剂和空白含药血清组共8组对BMSCs进行干预,采用改良钙钴染色法检测碱性磷酸酶(ALP)表达,采用茜素红染色法检测钙化结节,采用Western blotting法检测核结合因子α1(Cbfα1)和Ⅰ型胶原(ColⅠ)、p38、p-p38蛋白表达,采用real time PCR法检测Cbfα1、ColⅠmRNA表达。结果:左、右归丸及滋阴药组可以上调ALP表达,促进BMSCs矿化结节形成,增强Cbfα1、ColⅠmRNA和蛋白的表达并且可以促进p38蛋白的磷酸化;给予p38特异性阻滞剂SB203580后,各组BMSCs ALP表达下调,矿化结节形成减少,p38蛋白磷酸化水平降低,并且Cbfα1、ColⅠmRNA和蛋白的表达下降。结论:左、右归丸及其拆方含药血清可能部分通过p38 MAPK信号通路对BMSCs成骨分化产生调控作用的。 展开更多
关键词 左归丸 右归丸 髓间充质干细胞 P38 诱导
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人重组骨形态发生蛋白-2和碱性成纤维细胞生长因子在诱导成骨中的调节作用及其机制 被引量:7
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作者 杜俊杰 罗卓荆 +7 位作者 胡蕴玉 李明全 袁志 曹艳杰 崔庚 李丹 吕荣 王建波 《中国临床康复》 CSCD 2004年第8期1448-1449,共2页
目的:采用原位杂交的方法检测I、II型胶原mRNA的变化及其变化规律,对骨组织中的碱性磷酸酶(ALP)活性进行测定,以分析人重组骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在诱导成骨中的调节作用及其调节机制。方法:BALB/c小... 目的:采用原位杂交的方法检测I、II型胶原mRNA的变化及其变化规律,对骨组织中的碱性磷酸酶(ALP)活性进行测定,以分析人重组骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在诱导成骨中的调节作用及其调节机制。方法:BALB/c小鼠110只采用掷硬币方法随机分为2组,每组55只,设立rhBMP-2/bFGF为实验组,rhBMP-2为对照组,分别于术后3~21d共8个时间点取材,采用原位杂交方法对新生骨组织中的I,II型胶原mRNA进行检测;对ALP活性进行定量分析,观察2组在诱导成骨中I,II型胶原mRNA及ALP的表达情况。结果:①II型胶原mRNA的出现是和成软骨、软骨细胞的出现相伴随的。②作为成骨细胞成熟标志物的I型胶原mRNA、ALP在软骨形成期即有表达,但是随着成骨细胞的出现,骨组织的形成I型胶原mRNA仍表现为高表达,而ALP的表达则呈下降趋势。③实验组I,II型胶原mRNA及ALP的表达早于对照组,在术后7,14,21d,实验组ALP分别为(63.85±6.87),(27.12±4.23),(8.93±1.49)IU/g;对照组ALP分别为(27.26±4.13),(70.65±5.92),(39.46±4.72)IU/g(t=12.40,20.85,17.52,P<0.01)。结论:bFGF增强了rhBMP-2诱导成骨中I、II型胶原mRNA及ALP的表达。 展开更多
关键词 人重组形态发生蛋白-2 碱性纤维细胞生长因子 诱导 调节作用 原位杂交 胶原 碱性磷酸酶活性
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成骨诱导的兔骨髓基质干细胞成骨活性的表达及维持 被引量:6
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作者 陈光兴 杨柳 +5 位作者 唐康来 段小军 李忠 周红星 顾祖超 林炎水 《中华创伤骨科杂志》 CAS CSCD 2004年第7期735-739,共5页
目的观察成骨诱导的兔骨髓基质干细胞(BMSCs)体内、外环境下成骨活性的表达及维持。方法观察BMSCs在体外成骨诱导培养条件下的成骨分化特性;构建兔BMSCs与活骨组织共培养模型模拟体内“成骨环境”,将成骨诱导的MSCs置于共培养及普通传... 目的观察成骨诱导的兔骨髓基质干细胞(BMSCs)体内、外环境下成骨活性的表达及维持。方法观察BMSCs在体外成骨诱导培养条件下的成骨分化特性;构建兔BMSCs与活骨组织共培养模型模拟体内“成骨环境”,将成骨诱导的MSCs置于共培养及普通传代培养条件下进行传代培养,观察经成骨诱导的BMSCs在体外及模拟体内的培养条件下细胞的表型维持情况。结果药物成骨诱导培养的BMSCs,其ALP活性及骨钙素均显著高于普通培养组(P<0.05);经过诱导培养的BMSCs,其Ⅰ型胶原、骨钙素免疫组化阳性。RT-PCR法半定量测定Ⅰ型胶原mRNA,成骨诱导培养的Ⅰ型胶原mRNA表达量明显高于普通传代培养对照组。药物成骨诱导后的细胞在体外普通传代培养传5代后,细胞碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素水平及Ⅰ型胶原表达稳定维持在较高水平,保持其成骨细胞的表型;在共培养条件下,ALP活性、骨钙素水平Ⅰ型胶原表达保持在高水平,且ALP活性、骨钙素水平在大部分时间点均高于普通传代培养。结论药物成骨诱导培养呈现促BMSCs向成骨方向转化的特点,能使ALP、骨钙素及Ⅰ型胶原表达短期内达到高水平;经成骨诱导的BMSCs在体外或模拟的体内传代培养条件下,均能维持成骨表型,保持成骨活力。 展开更多
关键词 髓基质干细胞 分化 共培养 诱导
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