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METTL7A通过m6A甲基化调控牙髓干细胞的衰老和成骨/成牙分化 被引量：1
1
作者 王宁 马华瑞 +1 位作者 苏丽 余日月 《口腔生物医学》 2024年第1期26-31,共6页
目的:探索甲基转移酶样7A(METTL7A)通过N6-甲基腺苷(m6A)甲基化对牙髓干细胞(DPSCs)衰老和成骨/成牙分化的影响。方法:利用慢病毒转染DPSCs获得METTL7A稳定敲低的DPSCs,利用逆转录病毒转染DPSCs获得METTL7A稳定过表达的DPSCs,实时荧光定... 目的:探索甲基转移酶样7A(METTL7A)通过N6-甲基腺苷(m6A)甲基化对牙髓干细胞(DPSCs)衰老和成骨/成牙分化的影响。方法:利用慢病毒转染DPSCs获得METTL7A稳定敲低的DPSCs,利用逆转录病毒转染DPSCs获得METTL7A稳定过表达的DPSCs,实时荧光定量PCR和Western blot实验检测敲低及过表达效率。在此基础上,利用衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色及定量检测METTL7A是否调控DPSCs的衰老,斑点杂交实验检测METTL7A是否调控DPSCs的m6A甲基化水平。METTL7A过表达组加入m6A甲基化抑制剂环亮氨酸(Cyc)后,利用SA-β-gal染色及定量检测和碱性磷酸酶(ALP)活性实验检测METTL7A通过m6A甲基化调控DPSCs的衰老和成骨/成牙分化。结果:利用慢病毒转染DPSCs,与对照组(Consh)相比,METTL7A基因和蛋白在METTL7A敲低组(METTL7Ash)的表达显著降低(P<0.01),METTL7Ash组的SA-β-gal染色及定量检测发现阳性细胞数量增加(P<0.05);利用逆转录病毒转染DPSCs,与对照组(Vector)相比,METTL7A在METTL7A过表达(HA-METTL7A)组的表达显著增加(P<0.01),HA-METTL7A组的SA-β-gal染色及定量检测显示阳性细胞数量减少(P<0.01)。此外,相比于Consh组,METTL7Ash组DPSCs的m6A甲基化修饰水平显著降低,而过表达METTL7A组DPSCs的m6A甲基化修饰水平明显升高。在此基础上,在METTL7A过表达组加入Cyc,SA-β-gal染色及其定量检测显著增加因METTL7A过表达而减少的阳性细胞数量(P<0.01),同时也显著抑制因METTL7A过表达促进的ALP活性(P<0.05)。结论:METTL7A可能通过调控m6A甲基化水平抑制DPSCs的衰老并促进其成骨/成牙分化。 展开更多
关键词 METTL7A m6A甲基化 牙髓干细胞 衰老 成骨/成牙分化
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GREM1对根尖牙乳头干细胞成骨/成牙分化功能的影响机制研究 被引量：4
2
作者 朱行燕 刁树 +1 位作者 杨东梅 范志朋 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期409-415,共7页
目的研究骨形态生成蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)拮抗剂Gremlin1(GREM1)对根尖牙乳头干细胞(stem cells from the apical papilla,SCAPs)功能的影响,并探索其机制。方法体外分离培养SCAPs,免疫荧光染色实验检测GREM1在SCAPs的... 目的研究骨形态生成蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)拮抗剂Gremlin1(GREM1)对根尖牙乳头干细胞(stem cells from the apical papilla,SCAPs)功能的影响,并探索其机制。方法体外分离培养SCAPs,免疫荧光染色实验检测GREM1在SCAPs的亚细胞定位;利用GREM1shRNA慢病毒转染,敲低GREM1;分别对GREM1敲低组和对照组SCAPs进行成骨诱导,实时荧光定量PCR(Real time-PCR)和Western blot检测转染后GREM1的敲低效果。取两组细胞,成骨诱导7 d后进行碱性磷酸酶(ALP)活性测定,成骨/成牙本质诱导3周后进行茜素红染色,并用Real time-PCR检测成骨诱导0周、1周、2周、3周后成骨/成牙相关基因骨钙素(OCN)、骨桥素(OPN)、骨涎蛋白(BSP)、牙本质基质蛋白(DMP1)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)以及成骨/成牙关键转录因子Runt相关转录因子2(RUNX2)、成骨细胞特异性转录因子(OSX)、同源盒基因2(DLX2)的表达。取两组细胞,CCK8和流式细胞术检测细胞增殖能力变化;Real time-PCR检测衰老相关基因p53、细胞周期调控因子1(Waf1)和干性相关基因krupple样因子4(KLF4)、性别决定区Y框蛋白2(SOX2)的表达,以及BMPs相关基因(BMP2、BMP4、BMP5、BMP6、BMP7、BMP9)的表达。结果免疫荧光实验表明GREM1在胞核内表达量比胞浆中更高;Real time-PCR和Western blot验证了GREM1敲低组的敲低效果。GREM1敲低组ALP活性高于对照组(P<0.05),茜素红染色浅于对照组;OCN、DMP1在1周、2周、3周时表达均有升高,OPN在2周时升高,BSP在3周时升高,DSPP在1周时升高,差异有统计学意义(P<0.05),成骨关键转录因子RUNX2、OSX、DLX2均在不同时段升高,差异有统计学意义(P<0.05)。CCK-8法和流式细胞术显示GREM1敲低组增殖能力较对照组下降(P<0.05)。与对照组相比,GREM1敲低组BMP2、BMP6、BMP7表达升高,SOX2、KLF4表达升高(P<0.05),P53、Waf1表达下降(P<0.05)。结论GREM1敲低后,能促进SCAPs成骨/成牙分化及干性,抑制SCAPs的增殖及衰老;GREM1对 展开更多
关键词 根尖牙乳头干细胞 GREM1 骨形态生成蛋白 成骨/成牙分化
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丹参注射液促进人脱落乳牙牙髓干细胞成骨/成牙分化的实验研究 被引量：4
3
作者 高润涛 范志朋 《北京口腔医学》 CAS 2018年第2期65-68,共4页
目的探讨中药丹参对人脱落乳牙牙髓干细胞(SHEDs)成骨/成牙分化功能的影响。方法利用50mg/ml的丹参注射液作用于SHEDs细胞,利用成骨/成牙分化诱导培养基诱导SHEDs定向分化。通过检测ALP活性、茜素红染色、钙离子定量分析、成骨/成牙分... 目的探讨中药丹参对人脱落乳牙牙髓干细胞(SHEDs)成骨/成牙分化功能的影响。方法利用50mg/ml的丹参注射液作用于SHEDs细胞,利用成骨/成牙分化诱导培养基诱导SHEDs定向分化。通过检测ALP活性、茜素红染色、钙离子定量分析、成骨/成牙分化相关基因的表达研究SHEDs体外成骨/成牙分化能力。Western Blot检测AKT信号分子的表达。结果 50mg/ml的丹参注射液促进SHEDs细胞ALP活性,体外矿化能力及成骨/成牙分化相关基因骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、牙本质涎磷蛋白(Dentin sialophosphoprotein,DSPP)的表达。50mg/ml的丹参注射液促进磷酸化AKT的表达。结论 50mg/ml的丹参注射液具有促进SHEDs细胞体外成骨/成牙分化的潜能,其作用可能与激活AKT信号通路相关。 展开更多
关键词 脱落乳牙牙髓干细胞 丹参 成骨/成牙分化
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