目的:通过构建真核表达载体,在COS-7细胞中表达人成釉蛋白基因。方法:分别将人成釉蛋白基因克隆入非融合和融合真核表达载体pcDNA 3.1和pEGFP-C3中,证实克隆正确后,用脂质体介导将载体转染哺乳动物细胞COS-7,通过免疫组织化学、W estern...目的:通过构建真核表达载体,在COS-7细胞中表达人成釉蛋白基因。方法:分别将人成釉蛋白基因克隆入非融合和融合真核表达载体pcDNA 3.1和pEGFP-C3中,证实克隆正确后,用脂质体介导将载体转染哺乳动物细胞COS-7,通过免疫组织化学、W estern B lot等方法检测成釉蛋白在哺乳动物细胞中的表达。结果:表达的绿色荧光蛋白融合蛋白所发出的荧光位于细胞浆中,胞核中无荧光,与免疫组化结果一致,说明人成釉蛋白位于细胞浆中。W estern B lot检测显示在COS-7细胞中表达的成釉蛋白的分子量为65×103,分泌至培养基中的成釉蛋白的分子量为62×103。结论:成功在哺乳动物细胞中表达了人成釉蛋白,为研究成釉蛋白合成后的修饰加工和成釉蛋白的结构,为今后进一步研究成釉蛋白结构和功能的关系奠定了基础。展开更多
文摘目的:通过构建真核表达载体,在COS-7细胞中表达人成釉蛋白基因。方法:分别将人成釉蛋白基因克隆入非融合和融合真核表达载体pcDNA 3.1和pEGFP-C3中,证实克隆正确后,用脂质体介导将载体转染哺乳动物细胞COS-7,通过免疫组织化学、W estern B lot等方法检测成釉蛋白在哺乳动物细胞中的表达。结果:表达的绿色荧光蛋白融合蛋白所发出的荧光位于细胞浆中,胞核中无荧光,与免疫组化结果一致,说明人成釉蛋白位于细胞浆中。W estern B lot检测显示在COS-7细胞中表达的成釉蛋白的分子量为65×103,分泌至培养基中的成釉蛋白的分子量为62×103。结论:成功在哺乳动物细胞中表达了人成釉蛋白,为研究成釉蛋白合成后的修饰加工和成釉蛋白的结构,为今后进一步研究成釉蛋白结构和功能的关系奠定了基础。
