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参龙煎剂调控细胞凋亡铁死亡抑制NFIL3防治特发性肺纤维化的机制 被引量:7
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作者 潘嘉祥 吕晓东 +5 位作者 庞立健 臧凝子 姜昕 刘创 张浩洋 于睿智 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期2481-2488,共8页
目的:探讨参龙煎剂对特发性肺纤维化(IPF)细胞铁死亡及凋亡与炎症的关系,以及抗IPF机制。方法:将60只Wistar大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、参龙煎剂组、吡非尼酮组。博来霉素(BLM)5 mg/kg诱导建立IPF模型,28 d取材。HE染色法... 目的:探讨参龙煎剂对特发性肺纤维化(IPF)细胞铁死亡及凋亡与炎症的关系,以及抗IPF机制。方法:将60只Wistar大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、参龙煎剂组、吡非尼酮组。博来霉素(BLM)5 mg/kg诱导建立IPF模型,28 d取材。HE染色法观察肺组织的病理变化,Masson染色观察肺纤维化状态,免疫组化明确肺泡上皮细胞α-SMA、E-cadherin表达水平。免疫荧光染色对肺组织凋亡和铁死亡水平进行检测,及其与NFIL3共定位,明确纤维组织中凋亡和铁死亡水平的差异,细胞铁死亡及凋亡与炎症的关系。结果:体内实验结果显示,参龙煎剂组可改善IPF大鼠一般情况,缓解呼吸急促,改善心率、精神状态等;改善肺组织病变程度;抑制肺组织胶原蛋白与α-SMA表达,提升E-cadherin表达水平;测序结果显示参龙煎剂明显减少NFIL3的表达水平;与模型组比较,参龙煎剂组Tunel与α-SMA共定位显著增多(P<0.01),FSP1与α-SMA共定位显著减少(P<0.01)。体外实验结果显示,与模型组比较,含药血清组凋亡水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,含药血清组细胞迁移水平下降,铁死亡抑制剂组迁移能力提高,铁死亡诱导剂组细胞迁移能力下降;与模型组比较,参龙煎剂组FSP1与NFIL3共定位显著减少(P<0.05);与模型组比较,参龙煎剂组Caspase12、Bax表达水平显著升高(P<0.01),Bcl-2、FSP1、NFIL3、TNF-α表达水平显著降低(P<0.01,P<0.05)。结论:参龙煎剂可能通过凋亡和铁死亡途径抑制炎症反应,进而抑制肌成纤维细胞转化防治IPF。 展开更多
关键词 参龙煎剂 铁死亡 凋亡 炎症 NFIL3 纤维细胞-纤维细胞转化 肺虚络瘀 特发性肺纤维
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柴胡含药血清通过Smad3/Rheb轴调节HFL1细胞凋亡和肌成纤维细胞转化 被引量:2
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作者 李妲 沈枭 +5 位作者 吴趋荟 郑蕾 赵四林 金朝晖 肖雪飞 范伏元 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期89-96,共8页
目的:利用转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))刺激人胚肺成纤维细胞(HFL1)模拟特发性肺纤维化(IPF)的病理过程,探讨柴胡含药血清对IPF的作用和机制。方法:采用10μg·L^(-1)TGF-β_(1)刺激HFL1细胞,给予不同体积分数柴胡含药血清(5%、... 目的:利用转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))刺激人胚肺成纤维细胞(HFL1)模拟特发性肺纤维化(IPF)的病理过程,探讨柴胡含药血清对IPF的作用和机制。方法:采用10μg·L^(-1)TGF-β_(1)刺激HFL1细胞,给予不同体积分数柴胡含药血清(5%、10%、15%、20%)干预24 h后,利用细胞增殖与活性检测试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖率。随后细胞分为空白血清组(20%空白血清)、TGF-β_(1)组(20%空白血清和10μg·L^(-1)TGF-β_(1))、TGF-β_(1)+柴胡含药血清组(5%空白血清、15%含药血清和10μg·L^(-1)TGF-β_(1))、TGF-β_(1)+SIS3组(3μmol·L^(-1)SIS3、20%空白血清和10μg·L^(-1)TGF-β_(1))。采用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡率;通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和肌成纤维细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达情况;通过免疫荧光法检测α-SMA、脑Ras同源蛋白(Rheb)、磷酸化(p)-Smad3蛋白表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Rheb、p-Smad3、Smad3蛋白表达。结果:与空白血清组比较,TGF-β_(1)组细胞增殖率明显上升(P<0.05)。与TGF-β_(1)组比较,TGF-β_(1)+15%柴胡含药血清组和TGF-β_(1)+20%柴胡含药血清组细胞增殖率显著降低(P<0.01)。与空白血清组比较,TGF-β_(1)组细胞凋亡率显著下降,Bcl-2、α-SMA mRNA表达增加,Bax mRNA表达减少,α-SMA、Rheb蛋白表达增加,Smad3磷酸化水平明显上升(P<0.05);与TGF-β_(1)组比较,TGF-β_(1)+柴胡含药血清组和TGF-β_(1)+SIS3组细胞凋亡率显著上升,Bcl-2、α-SMA mRNA表达减少,Bax mRNA表达增加,α-SMA、Rheb蛋白表达减少,Smad3磷酸化水平下降(P<0.05)。结论:柴胡能够抑制TGF-β_(1)诱导的HFL1细胞增殖和肌成纤维细胞转化,促进成纤维细胞凋亡,该作用可能与Smad3/Rheb轴有关。 展开更多
关键词 特发性肺纤维 柴胡 纤维细胞 SMAD3 脑Ras同源蛋白 纤维细胞纤维细胞转化
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LYVE1+巨噬细胞在RA患者关节滑膜组织中表达变化及对RA-FLS细胞迁移、侵袭、FMT的抑制作用
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作者 李骁瀚 王洪星 +3 位作者 王玺龙 赵娜 刘治璞 张义 《山东医药》 CAS 2024年第6期34-38,共5页
目的观察淋巴管内皮受体-1(LYVE1)+巨噬细胞在类风湿性关节炎(RA)患者关节滑膜组织中的表达变化及对RA成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)迁移、侵袭、向肌成纤维细胞转化(FMT)的抑制作用。方法采用免疫荧光染色法对45例RA患者及45例骨关节炎(OA... 目的观察淋巴管内皮受体-1(LYVE1)+巨噬细胞在类风湿性关节炎(RA)患者关节滑膜组织中的表达变化及对RA成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)迁移、侵袭、向肌成纤维细胞转化(FMT)的抑制作用。方法采用免疫荧光染色法对45例RA患者及45例骨关节炎(OA)患者滑膜组织LYVE1、CD68进行定性、定量检测。取对数生长期人单核白血病细胞THP-1,在培养液中加入LYVE1过表达慢病毒,培养48 h获得表达LYVE1的THP-1细胞,在表达LYVE1的THP-1细胞中加入100 ng/mL的佛波酯(PMA)诱导培养48 h,获得LYVE1+巨噬细胞;另取部分THP-1细胞,仅加入100 ng/mL的PMA诱导培养48 h获得LYVE1-巨噬细胞。取对数生长期人类风湿性关节炎成纤维细胞MH7A分为LYVE1+巨噬细胞组、LYVE1-巨噬细胞组,分别加入LYVE1+巨噬细胞、LYVE1-巨噬细胞,另将仅含培养基的小室设为空白对照组,采用划痕实验观察各组细胞的迁移能力。取MH7A细胞分为A组、B组,分别加入LYVE1+巨噬细胞、LYVE1-巨噬细胞,将仅含培养基小室设为C组,采用Transwell侵袭实验观察各组细胞的侵袭能力。取MH7A细胞分为一组、二组,分别加入LYVE1+巨噬细胞、LYVE1-巨噬细胞,将仅含培养基小室设为空白组,培养48 h时采用实时定量PCR法检测各组MH7A细胞FMT相关基因(COL1A1、fibronectin、α-SMA)的mRNA。结果RA与OA患者滑膜组织中LYVE1、CD68表达位置基本重叠;RA与OA患者滑膜组织LYVE1相对表达量分别为0.319±0.033、1.000±0.159,二者比较,P<0.05。与LYVE1-巨噬细胞组、空白对照组比较,培养24、48 h时LYVE1+巨噬细胞组细胞划痕愈合比低(P均<0.05);与B组、C组比较,培养24 h时A组细胞穿膜细胞数少(P均<0.05);与二组、空白组比较,培养48 h时一组细胞COL1A1 mRNA、fibronectin mRNA、α-SMA mRNA相对表达量少(P均<0.05)。结论RA患者关节滑膜组织中LYVE1+巨噬细胞低表达。LYVE1+巨噬细胞可抑制RA-FLS的迁移、侵袭及FMT。 展开更多
关键词 淋巴管内皮受体-1 LYVE1+巨噬细胞 类风湿性关节炎 纤维样滑膜细胞 细胞侵袭 细胞迁移 纤维细胞纤维细胞转化
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基于TGF-β/Smad2/3信号通路探讨鸢尾素对哮喘气道重塑的实验研究
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作者 姚伟 余志宏 蓝海兵 《江西医药》 CAS 2023年第12期1440-1443,1505,共5页
目的探究鸢尾素(Irisin)对TGF-β1诱导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的调控及机制。方法体外培养人胚肺成纤维细胞HFL-1,用10 ng/mL TGF-β1诱导HFL-1细胞,同时用不同浓度(25、50、100、200)ng/mL的irisin干预细胞24 h、48 h和72 h... 目的探究鸢尾素(Irisin)对TGF-β1诱导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的调控及机制。方法体外培养人胚肺成纤维细胞HFL-1,用10 ng/mL TGF-β1诱导HFL-1细胞,同时用不同浓度(25、50、100、200)ng/mL的irisin干预细胞24 h、48 h和72 h。利用CCK8试剂盒检测细胞增殖率。随后,将细胞分为空白对照组(NC组)、TGF-β1组(10 ng/mL)、TGF-β1+irisin组(10 ng/mL TGF-β1和100 ng/mL irisin)。采用细胞划痕实验检测不同组细胞的迁移能力。通过免疫荧光法检测不同处理组细胞α-SMA蛋白的表达情况。Western blot法检测不同处理组细胞α-SMA、胶原蛋白I(collagen I)、Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3的蛋白表达水平。结果与NC组相比,TGF-β1能有效促进HFL-1细胞的增殖和迁移(P<0.05);与TGF-β1组相比,加入irisin进行干预后能有效抑制TGF-β1诱导的HFL-1细胞的增殖和迁移(P<0.01)。与NC组相比,TGF-β1能有效促进HFL-1细胞α-SMA、collagen I、p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达(P<0.05);与TGF-β1组相比,加入irisin进行干预后能有效抑制TGF-β1诱导的HFL-1细胞α-SMA、collagen I、p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达(P<0.05)。结论Irisin能够抑制TGF-β1诱导的HFL-1细胞增殖、迁移及向肌成纤维细胞转化,其发挥作用的机制可能与TGF-β/Smad2/3信号通路有关。 展开更多
关键词 哮喘 TGF-Β1 鸢尾素 纤维细胞纤维细胞转化
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纤维连接蛋白能通过ILK和p-smad2诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化 被引量:3
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作者 张晓光 刘新民 《现代生物医学进展》 CAS 2010年第1期40-42,共3页
目的:探讨纤维连接蛋白(Fibronectin,Fn)能否诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化及其可能机制。方法:在包被有Fn的培养皿上培养肺成纤维细胞,并在不同的时间点(6h、12h、24h、48h),在应用和不应用TGF-βR激酶抑制剂条件下,采用免疫细... 目的:探讨纤维连接蛋白(Fibronectin,Fn)能否诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化及其可能机制。方法:在包被有Fn的培养皿上培养肺成纤维细胞,并在不同的时间点(6h、12h、24h、48h),在应用和不应用TGF-βR激酶抑制剂条件下,采用免疫细胞化学、western blot等技术检测相关蛋白的表达情况。结果:肺成纤维细胞在Fn上生长72h后,a-SMA的表达显著增加(p<0.05),ILK在6h即出现表达,持续到12h(p<0.05),p-Smad2在12h出现表达,持续到24h(p<0.05),SB525334能够部分抑制肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化过程中a-SMA的表达(p<0.05)。结论:Fn能通过ILK和p-smad2诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化。 展开更多
关键词 纤维 纤维连接蛋白 纤维细胞纤维细胞转化
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PPAR-γ激动剂罗格列酮能抑制纤维连接蛋白诱导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化
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作者 张晓光 刘新民 《现代生物医学进展》 CAS 2010年第7期1235-1237,共3页
目的:探讨PPAR-γ激动剂罗格列酮能否抑制纤维连接蛋白(Fibronectin,Fn)诱导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化及其可能机制。方法:在包被Fn的培养皿上培养肺成纤维细胞,在不应用和应用罗格列酮的条件下,在不同的给药浓度下,采用免疫细... 目的:探讨PPAR-γ激动剂罗格列酮能否抑制纤维连接蛋白(Fibronectin,Fn)诱导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化及其可能机制。方法:在包被Fn的培养皿上培养肺成纤维细胞,在不应用和应用罗格列酮的条件下,在不同的给药浓度下,采用免疫细胞化学、Western blot等技术检测相关蛋白的表达情况。结果:罗格列酮能够抑制Fn诱导的肺成纤维细胞a-SMA的表达(p<0.05)。a-SMA表达量会随着给药浓度增加而降低(p<0.05)。PPAR-γ的表达量在低浓度(2.5~20μmol/L)下,会随着给药浓度的增加而增加(p<0.05)。罗格列酮能降低成纤维细胞向肌成纤维细胞转化过程中ILK的表达(p<0.05)。结论:PPAR-γ激动剂罗格列酮能够抑制Fn诱导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化。 展开更多
关键词 纤维 纤维连接蛋白 纤维细胞纤维细胞转化
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