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瘀血痹片对大鼠胶原诱导性关节炎的干预作用及抗炎机制 被引量：12
1
作者 袁蓓 苏晓慧 +4 位作者 郭婉怡 汪倩 刘春芳 韩岚 林娜 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期52-62,共11页
目的:观察瘀血痹片对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的干预作用并探索抗炎相关机制。方法:建立大鼠CIA模型,给药组和阳性药组分别灌胃给予低、中、高剂量瘀血痹片(0.1,0.2,0.4 g·kg^(-1))和甲氨蝶呤(0.4 mg·kg^(-1)),每3 d检测发... 目的:观察瘀血痹片对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的干预作用并探索抗炎相关机制。方法:建立大鼠CIA模型,给药组和阳性药组分别灌胃给予低、中、高剂量瘀血痹片(0.1,0.2,0.4 g·kg^(-1))和甲氨蝶呤(0.4 mg·kg^(-1)),每3 d检测发病率、机械痛敏阈值及冷刺激痛敏;给药30 d后取材,外周血检测血小板计数(PLT)及纤维蛋白原(FIB)含量;苏木素-伊红染色法分析CIA大鼠关节组织病理变化;免疫组化法(IHC)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测CIA大鼠关节组织中白细胞介素(IL)-1β,IL-8,核转录因子-κB(NF-κB)p65,磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65),大鼠肉瘤(Ras)及Raf-1蛋白表达情况。此外,采用10μg·L^(-1)的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人类类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS),转移小室法检测RA-FLS迁移及侵袭能力。Western blot检测RA-FLS中Ras,Raf-1,p-NF-κB p65蛋白表达水平。结果:与正常组比较,CIA模型组发病率升高,机械痛阈值明显降低(P<0.05,P<0.01),冷刺激反应评分显著增高(P<0.01),外周血中PLT和FIB含量,大鼠关节组织病理评分,RA-FLS迁移和侵袭细胞个数及炎性相关因子的表达水平均显著升高(P<0.01);与模型组比较,瘀血痹片低、中、高剂量组均能降低CIA大鼠发病率,提高其机械痛阈值并降低冷刺激痛敏反应评分(P<0.05,P<0.01);降低CIA大鼠外周血中PLT和FIB含量(P<0.05,P<0.01),改善关节滑膜增生、骨及软骨破坏等病理变化(P<0.05,P<0.01),并抑制RA-FLS的迁移及侵袭。此外,瘀血痹片低、中、高剂量组均能不同程度地著抑制CIA大鼠关节组织中IL^(-1)β,IL-8,Ras,Raf-1和p-NF-κB p65的含量,以及RA-FLS细胞中Ras,Raf-1及p-NF-κB p65等蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:瘀血痹片具有降低大鼠CIA发病率、关节炎临床症状和改善关节组织病理变化、抑制滑膜生成等作用,并且这一作用可能与其对Ras/Raf-1/NF-κB信号通路的抑制有关。 展开更多
关键词 类风湿关节炎(RA) 瘀血痹片 成纤维样滑膜细胞(fls) 炎症因子 Ras/Raf-1/核转录因子-κB(NF-κB)
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类风湿关节炎大鼠滑膜细胞的类肿瘤样增生与相关基因表达的关系 被引量：12
2
作者 孟明 顾立刚 +2 位作者 张前 解华 王庆国 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期411-414,共4页
目的:探讨佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞的类肿瘤样增生和相关基因表达的机制。方法:将Wistar大鼠随机分两组,每组10只,并应用弗氏完全佐剂诱发大鼠AA实验性模型,定期观测踝关节肿胀度至第40天。分别取AA模型组和正常对照组大鼠踝关节... 目的:探讨佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞的类肿瘤样增生和相关基因表达的机制。方法:将Wistar大鼠随机分两组,每组10只,并应用弗氏完全佐剂诱发大鼠AA实验性模型,定期观测踝关节肿胀度至第40天。分别取AA模型组和正常对照组大鼠踝关节进行组织切片,用HE染色后观察病理学变化。取大鼠膝关节滑膜组织体外进行原代细胞培养,用MTT比色法检测大鼠滑膜细胞的增生。同时采用RTPCR法,检测模型组及正常对照组大鼠滑膜组织中相关基因Cmyc和ODCmRNA的转录水平。结果:①体外培养的AA模型组大鼠关节滑膜细胞的增殖显著高于正常组大鼠(P<0.01),并呈类肿瘤样增生。②AA模型组大鼠关节滑膜组织中,Cmyc和ODCmRNA的转录水平明显高于正常对照大鼠(P<0.01)。结论:AA模型组大鼠关节滑膜细胞的类肿瘤样增生,可能与其相关基因Cmyc和ODCmRNA的转录水平增高有关。 展开更多
关键词 佐剂性关节炎(AA) 类肿瘤样增生 原癌基因(C—myc) 鸟氨酸脱羧酶(ODC) 成纤维样滑膜细胞(fls)
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改良组织块法分离培养佐剂性关节炎兔成纤维样滑膜细胞 被引量：1
3
作者 陈芳 陈利峰 +2 位作者 刘琴 王丽平 张宜 《实验动物与比较医学》 CAS 2016年第4期280-284,共5页
目的 通过改良组织块细胞培养法,建立一种简单、可行的佐剂性关节炎兔成纤维样滑膜细胞（FLS）体外培养方法并观察细胞生物学特性.方法 通过注射弗氏完全佐剂建立关节炎模型,无菌条件下取佐剂性关节炎兔膝关节滑膜组织,剔净后剪成碎块,... 目的 通过改良组织块细胞培养法,建立一种简单、可行的佐剂性关节炎兔成纤维样滑膜细胞（FLS）体外培养方法并观察细胞生物学特性.方法 通过注射弗氏完全佐剂建立关节炎模型,无菌条件下取佐剂性关节炎兔膝关节滑膜组织,剔净后剪成碎块,用灭菌滤纸吸掉组织上附着的水分,碎片接种于培养皿,观察细胞生长状况及形态特征.取第3代对数期细胞,用噻唑蓝（MTT）法绘制其生长曲线,并用免疫荧光法检测波形蛋白的表达情况.结果 体外培养的佐剂性关节炎兔FLS形态为长梭形纤维样,符合FLS的生长特征,免疫荧光检测显强表达波形蛋白.结论 改良组织块法可以分离培养出兔佐剂性关节炎成纤样维滑膜细胞,方法简便,成功率高,满足实验要求. 展开更多
关键词 关节炎 兔 成纤维样滑膜细胞(fls) 改良组织块法 Fibroblast-like SYNOVIOCYTES (fls)
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蜂毒注射液对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡影响的研究 被引量：4
4
作者 谭宁 王科澎 +3 位作者 贺守第 罗晓光 朱辉军 黄胜光 《新中医》 CAS 2015年第6期280-283,共4页
目的 ：探究蜂毒注射液对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（FLS-RA）凋亡的影响。方法 ：原代培养FLS-RA,MTT法测定蜂毒注射液对细胞增殖及细胞毒性作用,hoechst染色法观察凋亡小体,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率。结果：组织块培养... 目的 ：探究蜂毒注射液对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（FLS-RA）凋亡的影响。方法 ：原代培养FLS-RA,MTT法测定蜂毒注射液对细胞增殖及细胞毒性作用,hoechst染色法观察凋亡小体,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率。结果：组织块培养法培养2周后细胞向心性排列,呈梭形及三角形。经过3-5次传代,FLS-RA细胞逐渐纯化,以FLS为主（〉95%）,体外生长稳定。倒置相差显微镜观察细胞形态：细胞排列整齐,向心性排列,呈梭形或三角形,偶见圆形细胞,细胞核成卵圆形,居细胞中央,胞质均匀透亮。干预24 h：各组生存率低于空白对照组（P〈0.05）,浓度越高,生存率越低;蜂毒注射液处理48 h：各组生存率低于空白对照组（P〈0.05）,浓度越高,生存率越低;同浓度蜂毒注射液处理24 h生存率与48 h比较：48 h组小于24h组（P〈0.05）。利用ORIGIN 5.0软件计算蜂毒注射液的半数抑制浓度（IC50）为（16.79±0.13）mg/L。实验组与阳性对照组中凋亡小体形态相似,细胞核呈致密浓染,颜色发白,而阴性对照组未见明显凋亡小体,细胞核未见固缩的染色质。B1区为细胞碎片,B2区为晚期凋亡和死亡的细胞,B3区为正常细胞,B4区为早期凋亡的细胞。由于B2区包含死亡的细胞,多选择B4区比较早期凋亡率。低浓度组蜂毒注射液作用FLS-RA细胞24 h,早期凋亡率大于空白对照组（P〈0.05）;高浓度组蜂毒注射液早期凋亡率明显高于空白对照组（P〈0.01）,且大于低浓度组（P〈0.05）。结论：蜂毒注射液可诱导成纤维样滑膜细胞凋亡,这可能是蜂毒治疗类风湿关节炎的机理之一。 展开更多
关键词 类风湿关节炎(RA) 蜂毒注射液 成纤维样滑膜细胞(fls-RA) 细胞凋亡
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芍药苷上调lncRNA MALAT1抑制Wnt1/β-catenin通路促进人类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞凋亡 被引量：4
5
作者 杨帆 沈俊逸 蔡辉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期692-698,共7页
目的探讨芍药苷(PAE)对体外培养类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养RA-FLS,噻唑蓝(MTT)法检测(20、40、80)μmol/L PAE培养24、48、72 h的细胞生存率,流式细胞术检测细胞凋亡率;合成3条... 目的探讨芍药苷(PAE)对体外培养类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养RA-FLS,噻唑蓝(MTT)法检测(20、40、80)μmol/L PAE培养24、48、72 h的细胞生存率,流式细胞术检测细胞凋亡率;合成3条长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1的小干扰RNA(si-MALAT1)片段,脂质体转染48 h后,实时定量PCR检测筛选出敲除效果最佳si-MALAT1。将细胞分对照组、PAE组、si-NC组、si-MALAT1组、PAE联合si-MALAT1组。敲低MALAT1表达后,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时定量PCR检测各组Wnt1、β联蛋白(β-catenin)、胱天蛋白酶3(caspase-3)、caspase-9、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)的mRNA表达;Western blot法检测各组Wnt1、β-catenin、caspase-3、caspase-9、Bcl2、BAX的蛋白表达。结果不同浓度PAE对RA-FLS均有抑制作用,相同浓度RA-FLS活力呈时间依赖性下降;与FLS对照组相比,RA-FLS组MALAT1表达下调,经PAE处理后细胞凋亡率增加;RA-FLS中si-MALAT1组细胞凋亡率最低,而PAE联合si-MALAT1组显著增高;PAE组较对照组Bcl2、Wnt1、β-catenin的mRNA表达降低,caspase-3、caspase-9、BAX的mRNA表达则升高;si-MALAT1组的Bcl2表达显著增高,PAE联合si-MALAT1组的Bcl2表达则显著下调,BAX、caspase-3、caspase-9表达显著升高。结论PAE通过上调MALAT1抑制Wnt1/β-catenin通路促进RA-FLS凋亡。 展开更多
关键词 芍药苷 长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1(lncRNA MALAT1) WNT1 β联蛋白(β-catenin) 成纤维细胞样滑膜细胞(fls) 细胞凋亡
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新风胶囊通过抑制成纤维细胞样滑膜细胞的长链非编码RNA和NF-κB表达减轻类风湿关节炎的炎症反应 被引量：1
6
作者 文建庭 刘健 +1 位作者 王馨 王杰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期640-645,共6页
目的 研究长链非编码RNA ENST00000619282(lncRNA ENST00000619282)、 miR-148b-5p、核因子κB(NF-κB)在肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)中的表达,以及新风胶囊(XFC)的干预作用。方法 收集正... 目的 研究长链非编码RNA ENST00000619282(lncRNA ENST00000619282)、 miR-148b-5p、核因子κB(NF-κB)在肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)中的表达,以及新风胶囊(XFC)的干预作用。方法 收集正常人和XFC治疗前后RA患者外周血单个核细胞(PBMC)各30例,观察ENST00000619282的表达、与临床指标的相关性分析及XFC的治疗作用;建立RA-FLS永生化细胞系,制备XFC含药血清,观察XFC含药血清对RA-FLS ENST00000619282、 miR-148b-5p及NF-κB通路表达的影响。结果 与正常组相比,RA患者ENST00000619282表达显著升高,受试者工作特征(ROC)曲线结果显示ROC曲线下面积(AUC)为0.7166, Spearman相关性分析结果表明,ENST00000619282与病程、 IgA呈负相关,与28关节疾病活动度评分(DAS28)、视觉模拟评分(VAS)、血沉(ESR)、 C反应蛋白(CRP)呈正相关;XFC治疗后,ENST00000619282表达显著下降。CCK-8法结果显示,TNF-α对RA-FLS最佳处理剂量和时间分别为10 ng/mL和48 h, XFC对RA-FLS的最佳干预浓度和时间分别为648 mg/100 gXFC和72 h。实时定量PCR结果显示,与RA-FLS组相比,TNF-α处理的RA-FLS组ENST00000619282、 B细胞κ多肽基因增强子抑制蛋白激酶γ(IKBKG)、核因子κB抑制蛋白激酶α(IKKα)、 IKKβ、核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、 NF-κB p65的表达显著升高,miR-148b-5p的表达显著降低;经XFC处理后,ENST00000619282、 IKBKG、 IKKα、 IKKβ、 IκBα、 NF-κB p65的表达显著降低,miR-148b-5p的表达显著升高。免疫荧光结果显示,与RA-FLS相比,TNF-α处理的RA-FLS组IKBKG蛋白的表达显著升高;经XFC处理后,IKBKG蛋白的表达显著降低。结论 ENST00000619282在RA-PBMC和RA-FLS中表达均升高,XFC通过下调ENST00000619282和NF-κB的表达、上调miR-148b-5p的表达,抑制RA炎症免疫反应和细胞凋亡。 展开更多
关键词 新风胶囊(XFC) 成纤维细胞样滑膜细胞(fls) 外周血单个核细胞(PBMC) ENST00000619282 核因子κB(NF-κB)
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N-乙酰半胱氨酸通过阻断Nrf2/Keap1通路抑制(H_(2)O_(2))处理的佐剂性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞增殖 被引量：1
7
作者 杨珺 黄焱平 +5 位作者 刘梅梅 汪陶荣 张晔 周文瀚 瞿子庭 陈晓宇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期687-692,共6页
目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对低浓度过氧化氢(H_(2)O_(2))处理的佐剂性关节炎(AA)大鼠成纤维细胞样滑膜细胞(AA-FLS)增殖的影响及机制。方法SD大鼠分为正常对照组和模型组(均为10只),模型组采用足趾皮下注射Freund完全佐剂造模,28 d... 目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对低浓度过氧化氢(H_(2)O_(2))处理的佐剂性关节炎(AA)大鼠成纤维细胞样滑膜细胞(AA-FLS)增殖的影响及机制。方法SD大鼠分为正常对照组和模型组(均为10只),模型组采用足趾皮下注射Freund完全佐剂造模,28 d后处死大鼠。硫代巴比妥酸法检测血清丙二醛(MDA)含量、羟胺法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,免疫组织化学染色法检测踝关节滑膜组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)、Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)蛋白表达;体外培养和鉴定AA-FLS,CCK-8法检测(0、0.3、0.9、3、10、30、90、180)μmol/L NAC对5μmol/L H_(2)O_(2)处理的AA-FLS活力的影响,采用MitoSOX线粒体活性氧荧光探针检测AA-FLS中线粒体活性氧(ROS)含量,Western blot法检测(0、3、10、30)μmol/L NAC对低浓度H_(2)O_(2)处理AA-FLS的Nrf2、Keap1蛋白表达的影响。结果与正常对照组比较,AA模型大鼠血清MDA水平增加、SOD、GSH-Px水平降低,滑膜组织中Nrf2表达升高、Keap1表达降低;免疫细胞化学染色证实分离培养的细胞是AA-FLS,NAC可浓度依赖性抑制H_(2)O_(2)处理的AA-FLS增殖,且线粒体ROS含量下降,Nrf2、Keap1蛋白表达降低。结论NAC可抑制H_(2)O_(2)处理后的AA-FLS增殖,其机制可能与阻断Nrf2/Keap1通路有关。 展开更多
关键词 N-乙酰半胱氨酸(NAC) 核因子E2相关因子2(Nrf2) Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1) 氧化应激 佐剂性关节炎(AA) 成纤维细胞样滑膜细胞(fls)
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