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CD44^(+)膀胱癌干细胞中角蛋白6B的表达和调控 被引量:7
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作者 刘璐 杨宇明 +3 位作者 商艾晨 刘翠 孙策 王静 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2022年第1期76-83,共8页
背景:膀胱癌干细胞参与促进膀胱癌的术后复发及耐药性,而多项研究表明角蛋白6B参与多个不同类型肿瘤的发生和进展,并与肿瘤的预后密切相关。目的:观察角蛋白6B在CD44^(+)膀胱癌干细胞中的表达差异及其对膀胱癌干细胞增殖、迁移及自我更... 背景:膀胱癌干细胞参与促进膀胱癌的术后复发及耐药性,而多项研究表明角蛋白6B参与多个不同类型肿瘤的发生和进展,并与肿瘤的预后密切相关。目的:观察角蛋白6B在CD44^(+)膀胱癌干细胞中的表达差异及其对膀胱癌干细胞增殖、迁移及自我更新的影响,并进一步探讨角蛋白6B表达对膀胱癌患者预后的影响。方法:①使用免疫磁珠分选法分选出人CD44^(+)5637膀胱癌干细胞,使用RT-PCR检测分选后的相关干性基因SOX2,OCT4和NANOG的表达,采用体外肿瘤球形成实验进一步验证CD44^(+)细胞具有肿瘤干细胞的自我更新能力,RT-PCR检测CD44^(+)膀胱癌干细胞中的角蛋白6B的表达情况;②将CD44^(+)5637膀胱癌干细胞分为2组,其中角蛋白6B沉默组将角蛋白6B小干扰RNA转染至分选后的CD44^(+)膀胱癌干细胞,未转染的CD44^(+)膀胱癌干细胞作为空白对照组,转染2 d后收集细胞,分别用平板克隆实验、划痕实验和体外肿瘤球形成实验检测角蛋白6B沉默后膀胱癌干细胞的增殖,迁移和自我更新能力;③采用免疫组织化学染色检测膀胱癌患者24例膀胱肿瘤组织切片的角蛋白6B和CD44v6的表达;④利用ONCOMINE数据库比较膀胱肿瘤组织中角蛋白6B的表达情况对患者总生存率的影响。结果与结论:①分选后的CD44^(+)细胞中相关干性基因(SOX2,OCT4,NANOG)和角蛋白6B表达高于CD44-细胞(P<0.05),其细胞增殖,迁移和体外成球能力显著升高(P<0.05),角蛋白6B小干扰RNA可下调角蛋白6B在CD44^(+)膀胱癌干细胞中的表达(P<0.05);②与空白对照组相比,角蛋白6B小干扰RNA转染后的CD44^(+)膀胱癌干细胞增殖和迁移能力显著降低(P<0.05),肿瘤球的数量明显降低(P<0.05),而Notch1和Hes1 mRNA表达升高(P<0.05);③角蛋白6B与CD44v6在患者膀胱癌组织中的表达差异有显著性意义(P=0.006),其中角蛋白6B高表达的膀胱癌患者总生存率低于角蛋白6B低表达的患者;④上述数据证� 展开更多
关键词 干细胞 膀胱癌干细胞 角蛋白6B 膀胱癌 siRNA 自我更新 免疫磁珠 实验
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过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1β对乳腺癌干细胞干性表达的调控 被引量:3
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作者 赵菊芬 马荣 +4 位作者 曹佳 于传扬 陶翔 王嘉 王立斌 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第1期59-65,共7页
背景:研究表明,过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1β(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1beta,PGC-1β)通过PI3K/AKT/mTOR信号通路影响乳腺癌细胞的增殖、迁移及凋亡。而PGC-1β能否通过PI3K/AKT/m... 背景:研究表明,过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1β(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1beta,PGC-1β)通过PI3K/AKT/mTOR信号通路影响乳腺癌细胞的增殖、迁移及凋亡。而PGC-1β能否通过PI3K/AKT/mTOR信号通路影响乳腺癌干细胞的干性及其影响机制还不清楚。目的:探究PGC-1β对乳腺癌干细胞干性的影响及调控机制。方法:将PGC-1β空载体、过表达载体(Lv-PGC-1β)、干扰载体(Sh-PGC-1β)分别转染乳腺肿瘤MCF-7细胞,荧光显微镜观察转染效果;qRTPCR及Western blot验证慢病毒转染后PGC-1βmRNA和蛋白的相对表达。在干性培养基中分别培养未转染组、PGC-1β空载体组、PGC-1β过表达组及PGC-1β干扰组的MCF-7细胞使其成为乳腺癌干细胞,显微镜下观察并记录干细胞球体的形成过程,Western blot验证干性标志物(ABCG2、ALDH1、OCT4)、上皮-间充质转化标记物(E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin、Slug和ZEB1)及PI3K/AKT/mTOR通路核心蛋白的相对表达。结果与结论:①MCF-7贴壁细胞经干性培养基培养形成了折光性好、中间密度高的致密球干细胞;②乳腺癌干细胞干性蛋白的表达明显高于其贴壁细胞(P<0.01);③与未转染组、空载体组相比,PGC-1β过表达组乳腺癌干细胞的形成时间缩短,细胞球体数目增多、球体直径增大(P<0.01),而PGC-1β干扰组细胞球体数目减少、球体直径减小(P<0.01);④PGC-1β过表达组干性相关蛋白的表达高于未转染组、空载体组(P<0.01),上皮-间充质转化相关蛋白E-Cadherin表达低于未转染组、空载体组(P<0.01),而N-Cadherin、Vimentin、Slug和ZEB1的表达高于未转染组、空载体组(P<0.01);PI3K/AKT/mTOR相关蛋白及其磷酸化相关蛋白表达高于未转染组、空载体组(P<0.01),PGC-1β干扰组结果则与PGC-1β过表达组相反;⑤结果提示,PGC-1β能够通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路影响乳腺癌干细胞上皮-间充质转化,从而促进乳腺癌� 展开更多
关键词 PGC-1β MCF-7细胞 乳腺癌干细胞 干性 转染 上皮-间充质转化 PI3K/AKT/mTOR信号通路 实验
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干细胞转录因子Oct4及Sox2对宫颈癌细胞成瘤、迁移和浸润能力的影响 被引量:4
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作者 曼热帕·吐尔逊 马蓉 祖菲娅·艾力 《现代检验医学杂志》 CAS 2022年第1期145-148,共4页
目的探讨Oct4和Sox2对宫颈癌细胞(以下简称HeLa细胞)成瘤、迁移和浸润能力的影响。方法复苏并培养HeLa细胞,分别构建Oct4及Sox2过表达质粒及空载质粒,采用脂质体方法转染至HeLa细胞,按转染质粒的不同分为4组(正常对照组、Oct4过表达组、... 目的探讨Oct4和Sox2对宫颈癌细胞(以下简称HeLa细胞)成瘤、迁移和浸润能力的影响。方法复苏并培养HeLa细胞,分别构建Oct4及Sox2过表达质粒及空载质粒,采用脂质体方法转染至HeLa细胞,按转染质粒的不同分为4组(正常对照组、Oct4过表达组、Sox2过表达组和过表达空载组),铺至6孔板中,每组一个孔(细胞量为1×10^(6)),转染后48h进行PCR验证,转染成功后采取细胞划痕实验检测细胞迁移能力、Transwell检测细胞侵袭能力及成球实验检测细胞成瘤能力,并采用统计学方法对各组间差异进行分析。结果PCR验证结果显示,Oct4及Sox2过表达组HeLa细胞中Oct4(5376±208.7,2.429±0.1816)和Sox2(133±23.1,1991842±210370)表达显著高于空载组(2.182±0.5183,69.27±11.94)及对照组(0.8582±0.1579,0.7932±0.2134),差异均有统计学意义(F=662.8,89.64,均P<0.0001),表明转染成功;细胞划痕实验结果显示,HeLa细胞中Oct4过表达组迁移率(25.00±5.56)及Sox2(27.00±1.73)低于空载组(36.67±0.57)及对照组(35.67±0.57),差异有统计学意义(F=12.21,P<0.05);细胞侵袭实验结果显示,HeLa细胞中Oct4过表达组侵袭数量(378.3±97.59)及Sox2(374.3±43.89)表达显著低于空载组(552.7±41.48)及对照组(515.7±57.4),差异有统计学意义(F=6.22,P<0.05);成球实验结果显示,HeLa细胞中Oct4过表达组成球数量(8.667±2.082)及Sox2(8.333±1.155)低于空载组(14.67±2.517)及对照组(13.67±1.528),差异有统计学意义(F=9.11,P<0.05)。结论Oct4和Sox 2作为肿瘤干细胞的转录因子具有抑制宫颈癌细胞的侵袭、转移及生长的作用,为宫颈癌的早期治疗和预防提供新方向。 展开更多
关键词 肿瘤干细胞 OCT4 SOX2 Transwell侵袭实验 实验
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成球实验在胶质瘤干细胞培养中的局限性及未来展望 被引量:2
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作者 邓一帆 杨光 赵世光 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期311-313,共3页
在过去的十多年中。肿瘤干细胞(cancerstemcell,CSC)成为癌症研究的新热点。CSC理论认为,肿瘤细胞具有异质性,而对肿瘤的发生、发展起决定性作用的仅仅是其中的一小部分细胞。这一小部分细胞与正常组织中的干细胞同样具有两个关键... 在过去的十多年中。肿瘤干细胞(cancerstemcell,CSC)成为癌症研究的新热点。CSC理论认为,肿瘤细胞具有异质性,而对肿瘤的发生、发展起决定性作用的仅仅是其中的一小部分细胞。这一小部分细胞与正常组织中的干细胞同样具有两个关键特性:自我更新和多向分化潜能。CSC由此得名。自从1995年Bonnet和DickN从急性非淋巴细胞性白血病中发现CSC以来,人类已经在乳腺癌、胰腺癌、结肠癌、肺癌等多种肿瘤中发现CSC。 展开更多
关键词 实验 胶质瘤干细胞 细胞培养
原文传递
瘢痕疙瘩皮损及其周边皮肤干细胞的分布和增殖的比较 被引量:1
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作者 殷旭峰 张珂 +4 位作者 马委委 Lorna Martin Kasyanju Carrero 陈旭 布文博 周炳荣 《中国皮肤性病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期133-138,共6页
目的观察瘢痕疙瘩皮损处、边缘处及其周边外观正常组织中来源细胞的类干细胞特性。方法分别从瘢痕疙瘩皮损处、边缘处及手术切缘外0.5 cm的外观正常组织中分离真皮细胞,进行原代培养。采用实时定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-P... 目的观察瘢痕疙瘩皮损处、边缘处及其周边外观正常组织中来源细胞的类干细胞特性。方法分别从瘢痕疙瘩皮损处、边缘处及手术切缘外0.5 cm的外观正常组织中分离真皮细胞,进行原代培养。采用实时定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)及流式细胞术检测部分间充质干细胞、造血干细胞及胚胎干细胞相关表型标志物。成球实验根据球体数量来评估自我增殖及形成细胞克隆能力。CCK-8法检测上述三处原代细胞对丝裂霉素C耐药性差异。结果流式细胞术显示瘢痕疙瘩皮损处、边缘处及切缘外外观正常组织来源的原代细胞均高表达间充质干细胞表型标志物(CD13、CD44、CD90),低表达造血干细胞表型标志物CD34。qRT-PCR显示C-kit在瘢痕疙瘩中的表达低于正常组织,其余造血干细胞、间充质干细胞、胚胎干细胞等表型标志物在三处来源细胞之间均未见明显差异。此外,对铺板的6000个细胞形成的球体数量进行分别计数,瘢痕疙瘩皮损处为(22.13±5.62)个,边缘处为(16.73±4.6)个,周边外观正常组织来源为(20.42±2.01)个,三处间差异无统计学意义(P>0.05)。丝裂霉素C(0.0025~0.08 mg/L)对三处来源细胞均有显著的抑制作用,在低浓度(0.05 mg/L)时,瘢痕疙瘩来源细胞较周边外观正常组织来源细胞具有更显著的耐药性(P<0.05)。结论人瘢痕疙瘩皮损处、边缘处及周边正常组织来源细胞均显著表达间充质干细胞表型。 展开更多
关键词 瘢痕疙瘩 干细胞 表型标志物 实验 丝裂霉素C
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非受体酪氨酸激酶BMX对宫颈癌C-33 A细胞成球能力的影响
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作者 李媛媛 宫小勇 +2 位作者 代引海 杨文婷 郑鹏生 《甘肃科学学报》 2020年第4期24-28,共5页
为探索非受体酪氨酸激酶BMX(也称Etk)对宫颈癌C-33 A细胞成球能力的影响,应用免疫细胞化学和Western blot检测BMX在宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、C-33 A、HT-3、CaSki中的表达及定位,构建BMX过表达质粒载体,转染至C-33 A细胞中,筛选稳定过... 为探索非受体酪氨酸激酶BMX(也称Etk)对宫颈癌C-33 A细胞成球能力的影响,应用免疫细胞化学和Western blot检测BMX在宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、C-33 A、HT-3、CaSki中的表达及定位,构建BMX过表达质粒载体,转染至C-33 A细胞中,筛选稳定过表达的细胞株,利用细胞成球实验检测BMX对C-33 A细胞成球能力的影响。免疫细胞化学染色显示,BMX主要在细胞浆中表达,在细胞核中也有部分表达,在HeLa、SiHa、HT-3及CaSki细胞系中BMX高表达,而在C-33A细胞中低表达。Western blot检测也得出同样的结果。将BMX过表达质粒载体转染至C-33A细胞系中,鉴定稳定过表达的细胞株(C-33 A-AcGFP,C-33 A-BMX)。对照组和BMX过表达组细胞成球实验显示,对照组球体较为松散而过表达组较为密实,两组细胞成球率无明显差异(P>0.05),但是过表达组球体直径明显大于对照组(P<0.001)。上述结果表明:非受体酪氨酸激酶BMX促进宫颈癌C-33 A细胞的成球能力。 展开更多
关键词 BMX 宫颈癌 C-33 A 实验
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CD44^+CD24^(-/low)乳腺癌干细胞活性与多药耐药的相关性 被引量:6
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作者 翟晓建 张浩 +2 位作者 张旖旎 倪鸣 王征 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2016年第32期4758-4763,共6页
背景:肿瘤干细胞与肿瘤的复发、转移以及耐药等之间存在十分密切的联系。目的:探讨CD44^+CD24^(-/low)乳腺癌干细胞活性与多药耐药的相关性。方法:运用免疫磁珠法从多药耐药乳腺癌细胞株MCF-7/ADR中分选出CD44^+CD24^(-/low)乳腺癌干细... 背景:肿瘤干细胞与肿瘤的复发、转移以及耐药等之间存在十分密切的联系。目的:探讨CD44^+CD24^(-/low)乳腺癌干细胞活性与多药耐药的相关性。方法:运用免疫磁珠法从多药耐药乳腺癌细胞株MCF-7/ADR中分选出CD44^+CD24^(-/low)乳腺癌干细胞。流式细胞仪测定分选后CD44^+CD24^(-/low)乳腺癌干细胞亚群比例和细胞膜P-gp荧光强度,RT-PCR法检测多药耐药基因MDR m RNA表达水平。结果与结论:(1)获得的CD44^+CD24^(-/low)乳腺癌干细胞比例在90%以上;(2)CD44^+CD24^(-/low)细胞亚群成球比例明显强于non-CD44^+CD24^(-/low)细胞亚群;(3)CD44^+CD24^(-/low)细胞亚群的细胞膜P-gp荧光强度显著高于MFC-7/ADR细胞株(P<0.05);(4)CD44^+CD24^(-/low)细胞亚群的MDR mRNA表达水平显著高于MFC-7/ADR细胞株(P<0.05);(5)结果表明,分选得到的CD44^+CD24^(-/low)乳腺癌干细胞具有很强的体外成球能力,高表达P-gp蛋白和MDR mRNA可能是导致多药耐药的原因之一。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 肿瘤干细胞 P糖蛋白 抗药性 肿瘤 抗原 CD44 抗原 CD24 组织工程 干细胞 乳腺癌 细胞活性 细胞分选 多药耐药 体外实验 耐药基因
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