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第三代慢病毒包装系统优化及Rev表达质粒对慢病毒包装效率作用初探
被引量：
5
1
作者
阮峥
王文天
+2 位作者
杨洋
段永娟
胡晓
《生物技术通讯》
CAS
2014年第6期770-774,共5页
目的:对目前最为常用的三质粒慢病毒包装系统进行优化,以期明确各质粒表达的病毒成分对提高慢病毒包装效率的重要性。方法:在限定总质粒量为10μg的情况下,将表达绿色荧光蛋白(GFP)的目的质粒、表达gag/pol、Rev、VSVG的包装质粒按不同...
目的:对目前最为常用的三质粒慢病毒包装系统进行优化,以期明确各质粒表达的病毒成分对提高慢病毒包装效率的重要性。方法:在限定总质粒量为10μg的情况下,将表达绿色荧光蛋白(GFP)的目的质粒、表达gag/pol、Rev、VSVG的包装质粒按不同比例混合,转染293T细胞进行病毒包装,48 h后收集上清用于感染293T及K562细胞,72 h后经流式细胞术检测GFP+阳性细胞比例,分析所获病毒的感染效率。结果:采用不同的质粒混合比例包装的病毒感染效率具有明显差异,其中携带GFP的目的质粒量影响作用最为显著,当目的质粒量从15%(1.5μg)增至35%(3.5μg)时,GFP+293T细胞比例从14.2%升至45.1%,增加了3.2倍。当固定目的质粒量为35%,同时分别将表达gag/pol或Rev的质粒量从15%提高到25%时,改变Rev组的GFP+阳性率提升最明显,为1.5倍;而改变VSVG质粒量在已测试的混合比例中作用不显著。包装病毒感染K562细胞的结果与293T细胞类似。结论:通过对比包装病毒的感染效率,优化了慢病毒包装的混合质粒条件,并成功地应用于感染白血病细胞系;首次发现提高Rev质粒量可以更有效地提高病毒的包装效率,为利用慢病毒表达体系研究多种基因在血液系统中的功能奠定了技术基础。
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关键词
慢
病毒
表达
体系
包装质粒
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职称材料
过敏毒素C3a在肾小球足细胞中的分泌性表达试验
被引量：
1
2
作者
郑敬民
尹广
赵文紧
《东南国防医药》
2015年第3期225-228,共4页
目的建立过敏毒素C3a分泌性表达慢病毒体系和分泌性高表达过敏毒素C3a的足细胞株,为研究过敏毒素C3a对足细胞的作用创造条件。方法人工合成过敏素素C3a分泌性表达基因;以重组慢病毒为媒介,将过敏毒素C3a分泌性表达基因导入到人足细胞系(...
目的建立过敏毒素C3a分泌性表达慢病毒体系和分泌性高表达过敏毒素C3a的足细胞株,为研究过敏毒素C3a对足细胞的作用创造条件。方法人工合成过敏素素C3a分泌性表达基因;以重组慢病毒为媒介,将过敏毒素C3a分泌性表达基因导入到人足细胞系(human podocytes,HPC);利用药物筛选和连续梯度稀释克隆法获得稳定整合有过敏毒素C3a转基因结构的HPC细胞株;利用实时定量PCR从mRNA水平、酶联免疫吸附测定方法从蛋白质水平对过敏毒素C3a的表达和分泌情况进行鉴定。结果成功建立了过敏毒素C3a分泌性表达慢病毒体系;获得了分泌性高表达过敏毒素C3a的人肾小球足细胞株。结论所建立的过敏毒素C3a分泌性表达慢病毒体系和分泌性高表达过敏毒素C3a的足细胞株,为进一步分析过敏毒素C3a对足细胞的作用创造了条件。
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关键词
过敏毒素
C3A
慢
病毒
表达
体系
分泌性
表达
下载PDF
职称材料
题名
第三代慢病毒包装系统优化及Rev表达质粒对慢病毒包装效率作用初探
被引量：
5
1
作者
阮峥
王文天
杨洋
段永娟
胡晓
机构
中国医学科学院
出处
《生物技术通讯》
CAS
2014年第6期770-774,共5页
基金
国家重点基础研究发展计划(2012CB966504)
国家自然科学基金面上项目(81170459)
+4 种基金
协和医学院协和学者项目(2010-2013年)
天津市应用基础及前沿技术研究计划(11JCYBJC27400)
人事部留学人员择优资助项目(2012年)
实验血液学国家重点实验室自主课题(Z-12-02
Z-13-02)
文摘
目的:对目前最为常用的三质粒慢病毒包装系统进行优化,以期明确各质粒表达的病毒成分对提高慢病毒包装效率的重要性。方法:在限定总质粒量为10μg的情况下,将表达绿色荧光蛋白(GFP)的目的质粒、表达gag/pol、Rev、VSVG的包装质粒按不同比例混合,转染293T细胞进行病毒包装,48 h后收集上清用于感染293T及K562细胞,72 h后经流式细胞术检测GFP+阳性细胞比例,分析所获病毒的感染效率。结果:采用不同的质粒混合比例包装的病毒感染效率具有明显差异,其中携带GFP的目的质粒量影响作用最为显著,当目的质粒量从15%(1.5μg)增至35%(3.5μg)时,GFP+293T细胞比例从14.2%升至45.1%,增加了3.2倍。当固定目的质粒量为35%,同时分别将表达gag/pol或Rev的质粒量从15%提高到25%时,改变Rev组的GFP+阳性率提升最明显,为1.5倍;而改变VSVG质粒量在已测试的混合比例中作用不显著。包装病毒感染K562细胞的结果与293T细胞类似。结论:通过对比包装病毒的感染效率,优化了慢病毒包装的混合质粒条件,并成功地应用于感染白血病细胞系;首次发现提高Rev质粒量可以更有效地提高病毒的包装效率,为利用慢病毒表达体系研究多种基因在血液系统中的功能奠定了技术基础。
关键词
慢
病毒
表达
体系
包装质粒
Keywords
Rev
lentivector expression system
viral package
Rev
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
过敏毒素C3a在肾小球足细胞中的分泌性表达试验
被引量：
1
2
作者
郑敬民
尹广
赵文紧
机构
南京军区南京总医院国家肾脏疾病临床医学研究中心全军肾脏病研究所
出处
《东南国防医药》
2015年第3期225-228,共4页
基金
国家自然科学基金项目(81370828)
文摘
目的建立过敏毒素C3a分泌性表达慢病毒体系和分泌性高表达过敏毒素C3a的足细胞株,为研究过敏毒素C3a对足细胞的作用创造条件。方法人工合成过敏素素C3a分泌性表达基因;以重组慢病毒为媒介,将过敏毒素C3a分泌性表达基因导入到人足细胞系(human podocytes,HPC);利用药物筛选和连续梯度稀释克隆法获得稳定整合有过敏毒素C3a转基因结构的HPC细胞株;利用实时定量PCR从mRNA水平、酶联免疫吸附测定方法从蛋白质水平对过敏毒素C3a的表达和分泌情况进行鉴定。结果成功建立了过敏毒素C3a分泌性表达慢病毒体系;获得了分泌性高表达过敏毒素C3a的人肾小球足细胞株。结论所建立的过敏毒素C3a分泌性表达慢病毒体系和分泌性高表达过敏毒素C3a的足细胞株,为进一步分析过敏毒素C3a对足细胞的作用创造了条件。
关键词
过敏毒素
C3A
慢
病毒
表达
体系
分泌性
表达
Keywords
anaphylotoxin
C3a
lentiviral expression system
secretory expression
分类号
R363.1 [医药卫生—病理学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
第三代慢病毒包装系统优化及Rev表达质粒对慢病毒包装效率作用初探
阮峥
王文天
杨洋
段永娟
胡晓
《生物技术通讯》
CAS
2014
5
下载PDF
职称材料
2
过敏毒素C3a在肾小球足细胞中的分泌性表达试验
郑敬民
尹广
赵文紧
《东南国防医药》
2015
1
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职称材料
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