基于网络药理学及计算机辅助药物设计探讨慈菇消脂方(Cigu Xiaozhi Formula)对缺氧微环境下肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)HSC-T6活性的影响,预测并验证其可能作用的靶点及相关信号通路。通过中药系统药理学数据库与分析平台(...基于网络药理学及计算机辅助药物设计探讨慈菇消脂方(Cigu Xiaozhi Formula)对缺氧微环境下肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)HSC-T6活性的影响,预测并验证其可能作用的靶点及相关信号通路。通过中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)、中医药百科全书在线数据库(Encyclopaedia of Traditional Chinese Medicine,ETCM)及中药分子机制的生物信息学分析工具(Bioinformatics Analysis Tool for Molecular Mechanism of Traditional Chinese Medicine,BATMAN-TCM)数据库检索筛选出慈菇消脂方的潜在活性成分及作用靶点,并借助Gene Cards和Pharm GK数据库检索到的肝纤维化相关靶点进行交集整合,获得慈菇消脂方治疗肝纤维化的潜在作用靶点。在Omic Share平台进行GO(gene ontology)富集分析和KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)信号通路富集分析,利用Cytoscape软件构建出“潜在活性成分-关键靶点-通路”网络。利用Auto Dock软件对活性成分和靶点蛋白进行分子对接分析,根据分子动力学模拟和结合自由能计算结果,将degree值排名前5的活性成分进行对接打分,对君药山慈菇活性成分豆甾醇和β-谷甾醇进行分子对接。体外实验应用氯化钴(CoCl_(2))诱导HSC-T6细胞构建缺氧模型,通过CCK-8实验检测细胞活力,确定100μmol·L^(-1)CoCl_(2)作用24 h为构建HSC-T6细胞缺氧模型的最佳作用时间和浓度。细胞划痕愈合实验和免疫荧光检测发现,在缺氧状态下HSC-T6细胞被活化,划痕愈合率显著升高,活化标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)荧光信号显著增强,而6%含药血清能抑制HSC-T6细胞活化,细胞划痕愈合率显著降低,α-SMA荧光信号显著减弱。进一步研究发现,在缺氧状态下HSC-T6细胞中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、α-SMA和刺猬信号通路(hedgehog,Hh)关键蛋白Pa展开更多
文摘基于网络药理学及计算机辅助药物设计探讨慈菇消脂方(Cigu Xiaozhi Formula)对缺氧微环境下肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)HSC-T6活性的影响,预测并验证其可能作用的靶点及相关信号通路。通过中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)、中医药百科全书在线数据库(Encyclopaedia of Traditional Chinese Medicine,ETCM)及中药分子机制的生物信息学分析工具(Bioinformatics Analysis Tool for Molecular Mechanism of Traditional Chinese Medicine,BATMAN-TCM)数据库检索筛选出慈菇消脂方的潜在活性成分及作用靶点,并借助Gene Cards和Pharm GK数据库检索到的肝纤维化相关靶点进行交集整合,获得慈菇消脂方治疗肝纤维化的潜在作用靶点。在Omic Share平台进行GO(gene ontology)富集分析和KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)信号通路富集分析,利用Cytoscape软件构建出“潜在活性成分-关键靶点-通路”网络。利用Auto Dock软件对活性成分和靶点蛋白进行分子对接分析,根据分子动力学模拟和结合自由能计算结果,将degree值排名前5的活性成分进行对接打分,对君药山慈菇活性成分豆甾醇和β-谷甾醇进行分子对接。体外实验应用氯化钴(CoCl_(2))诱导HSC-T6细胞构建缺氧模型,通过CCK-8实验检测细胞活力,确定100μmol·L^(-1)CoCl_(2)作用24 h为构建HSC-T6细胞缺氧模型的最佳作用时间和浓度。细胞划痕愈合实验和免疫荧光检测发现,在缺氧状态下HSC-T6细胞被活化,划痕愈合率显著升高,活化标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)荧光信号显著增强,而6%含药血清能抑制HSC-T6细胞活化,细胞划痕愈合率显著降低,α-SMA荧光信号显著减弱。进一步研究发现,在缺氧状态下HSC-T6细胞中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、α-SMA和刺猬信号通路(hedgehog,Hh)关键蛋白Pa
