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识别脊神经感觉神经元单克隆抗体的制备 被引量：15
1
作者 张沛云 顾晓松 +1 位作者 严志强 佘耀南 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1991年第1期130-132,共3页
将脊神经感觉神经元特有的蛋白组份作为抗原,注入BABL/c小鼠腹腔中。采集经免疫的小鼠脾细胞,以聚乙二醇(PEG)为促融剂,使之与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合。应用HAT选择性培养液培养杂交瘤细胞。三周后,以ABC法检测,筛选出仅对感觉神经元... 将脊神经感觉神经元特有的蛋白组份作为抗原,注入BABL/c小鼠腹腔中。采集经免疫的小鼠脾细胞,以聚乙二醇(PEG)为促融剂,使之与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合。应用HAT选择性培养液培养杂交瘤细胞。三周后,以ABC法检测,筛选出仅对感觉神经元起反应的Ⅱ6H杂交瘤细胞株,三次有限稀释,克隆化后,体外培养达一年之久,仍能稳定地分泌抗体。该抗体属IgG_1亚类,特异性地识别感觉神经元特有的蛋白组份。应用该单抗,可鉴别周围神经干中的感觉与运动纤维,亦可研究感觉神经的发育以及结构与功能的关系。 展开更多
关键词 脊神经 感觉蛋白 单克隆抗体
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钙敏感受体介导的人脐静脉内皮细胞钙内流及一氧化氮生成过程中TRPCI与STIM1的相互作用 被引量：1
2
作者 王腊梅 钟华 +3 位作者 唐娜 庞丽娟 张春军 何芳 《中华心血管病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期978-984,共7页
目的探讨经典瞬时受体电位通道1（TRPC1）与基质相互作用分子1（STIM1）在钙敏感受体（CaR）介导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）钙离子（Ca2＋）内流和一氧化氮（NO）生成中的相互作用。 方法取华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产... 目的探讨经典瞬时受体电位通道1（TRPC1）与基质相互作用分子1（STIM1）在钙敏感受体（CaR）介导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）钙离子（Ca2＋）内流和一氧化氮（NO）生成中的相互作用。 方法取华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科健康孕产妇剖宫产新生儿的新鲜脐带，原代培养HUVEC并传代。将所得HUVEC分别与CaR激动剂精胺[激活钙池操纵性钙通道（SOC）和受体操纵性钙通道（ROC）]、ROC模拟剂12－O－十四烷酰佛波醇－13－乙酸酯（TPA）＋CaR负性变构调节剂Calhex231（阻断SOC阻、激活ROC）、蛋白激酶C（PKC）抑制剂Ro31－8220及经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967（激活SOC、阻断ROC）共孵育。采用免疫荧光技术检测HUVEC中TRPC1与STIM1的蛋白表达，免疫共沉淀法检测TRPC1与STIM1之间的相互作用。取2～3代HUVEC进行分组，将构建的TRPC1、STIM1干扰质粒（shTRPC1、shSTIM1）联合转染HUVEC即shTRPC1＋shSTIM1组 （实验组）、vehicle－shTRPC1＋vehicle－shSTIM1组 （空质粒组）和对照组，将3组细胞分别加入上述4种不同的药物进行干预。采用荧光探针Fura－2/AM检测HUVEC细胞内钙离子浓度（[Ca2＋]i）的变化，NO荧光探针DAF－FM负载方法同步检测HUVEC中NO生成的变化。 结果（1） HUVEC中TRPC1与STIM1的蛋白表达：激光共聚焦显微镜下观察，正常对照组HUVEC中TRPC1和STIM1蛋白的表达呈阳性，二者共定位于胞浆。Calhex231＋TPA＋精胺＋Ca2＋组、Ro31－8220＋精胺＋Ca2＋组和Go6976＋精胺＋Ca2＋组HUVEC中定位于胞浆中的TRPC1、STIM1均减少，二者结合也减少。（2） HUVEC中TRPC1与STIM1的相互作用：Calhex231＋TPA＋精胺＋Ca2＋组、Ro31－8220＋精胺＋Ca2＋组和Go6976＋精胺＋Ca2＋组STIM1/TRPC1和TRPC1/STIM1的相对比值的百分数分别为（25.98±2.17）%和（44.10±4.01）%、（20.85±1.01）%和（46.31±3.47）%、（23.88±2.05）%和（39.65±2.91）%� 展开更多
关键词 内皮细胞 脐静脉 细胞内钙离子感觉蛋白质类 受体 钙敏感 钙 一氧化氮
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尼古丁对大鼠气道平滑肌细胞内钙离子浓度及膜瞬时受体电位通道mRNA表达的影响 被引量：1
3
作者 田艳 王健 冉丕鑫 《中华生物医学工程杂志》 CAS 2011年第2期110-114,共5页
目的 观察尼古丁刺激大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）后细胞内基础钙离子浓度的改变及平滑肌细胞膜瞬时受体电位通道（TRPC1,TPRC6）mRNA表达水平变化.方法 不同浓度尼古丁[O（对照组）、10、20、50、100μg/L]刺激大鼠气道平滑肌细胞,作用2... 目的 观察尼古丁刺激大鼠气道平滑肌细胞（ASMC）后细胞内基础钙离子浓度的改变及平滑肌细胞膜瞬时受体电位通道（TRPC1,TPRC6）mRNA表达水平变化.方法 不同浓度尼古丁[O（对照组）、10、20、50、100μg/L]刺激大鼠气道平滑肌细胞,作用24及48 h后,采用Incyte细胞内钙浓度检测系统观察细胞内钙离子浓度的变化.提取细胞总RNA,反转录成cDNA,实时定量PCR方法检测细胞TRPC1和TRPC6 mRNA表达量变化.结果 20、50、100μg/L的尼古丁刺激大鼠气道平滑肌细24和48 h后,细胞内基础钙离子浓度均较对照组明显升高[（117.99±19.39）、（122.89±17.91）、（124.70±17.93）nmol/L比（85.85±12.60）nmol/L;（142.07±18.99）、（162.27±19.91）、（207.30±26.56）nmol/L比（98.04±2.39）nmol/L,均P＜0.05].而细胞中TRPC1和TPRC6 mRNA相对浓度也均较对照组显著升高（P＜0.05）,其中,100μg/L尼古丁刺激气道平滑肌细胞48 h后,细胞内基础钙离子浓度和TRPC6 mRNA相对表达量均较刺激24 h后的明显升高（P＜0.05）.结论 尼古丁可能通过上调大鼠气道平滑肌细胞膜瞬时受体电位通道TRPC1和TPRC6的表达而导致大鼠气道平滑肌细胞内基础钙离子浓度增加. 展开更多
关键词 尼古丁 瞬时受体电位通道 肌细胞 平滑肌 细胞内钙离子感觉蛋白质类 鼠科
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感觉神经元29KD蛋白的生化分析
4
作者 曹铮 张沛云 +3 位作者 严志强 沈勤 李炳源 顾晓松 《交通医学》 1996年第4期1-3,共3页
感觉神经元29KD蛋白的结构与功能研究,是神经科学领域中的一个重要方面。本实验从兔神经组织中分离、提取脊神经节感觉神经元特异蛋白,采用高效液相色谱二级分离法,纯化了感觉特异蛋白,电泳结果显示该蛋白的分子量为29KD,p17.8,经Water... 感觉神经元29KD蛋白的结构与功能研究,是神经科学领域中的一个重要方面。本实验从兔神经组织中分离、提取脊神经节感觉神经元特异蛋白,采用高效液相色谱二级分离法,纯化了感觉特异蛋白,电泳结果显示该蛋白的分子量为29KD,p17.8,经Waters氨基酸自动分析仪分析和Beckman LF-3200蛋白/多肽测序仪测试,揭示该蛋白的氨基酸组份及N端的15个氨基酸序列。研究结果显示,29KD蛋白是脊神经节感觉神经元特有的物质。 展开更多
关键词 脊神经感觉蛋白 氨基酸组份 氨基酸序列
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从感觉神经特异蛋白29KD的分子生物学特性探讨经络实质及作用机理 被引量：3
5
作者 孟凡迅 邵政一 徐济良 《中国针灸》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期87-88,共2页
根据感觉神经特异蛋白 2 9KD的分子生物学特性 ,提出经络的实质是“2 9KD蛋白桥接”感觉神经末梢 ,形成跨皮节传递信息的假说。并认为经脉—中枢协同作用 。
关键词 经络实质 信息交流 感觉神经特异蛋白 29KD 分子生物学
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大鼠脊神经节感觉神经特异蛋白35kD(SSP-35)的纯化及鉴定(英文) 被引量：4
6
作者 解建勋 蒲小平 +3 位作者 包金风 李玉珍 陈宇航 李长龄 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期306-310,共5页
以大鼠脊髓背根神经节及背根纤维组织为材料 ,通过离子交换层析 ,FPLC凝胶过滤等技术分离纯化了脊感觉神经特异蛋白 35kD(SSP 35) .经SDS PAGE分析 ,该蛋白特异地存在于脊感觉神经而不存在于脊运动神经 .非还原电泳结果表明 ,该蛋白分... 以大鼠脊髓背根神经节及背根纤维组织为材料 ,通过离子交换层析 ,FPLC凝胶过滤等技术分离纯化了脊感觉神经特异蛋白 35kD(SSP 35) .经SDS PAGE分析 ,该蛋白特异地存在于脊感觉神经而不存在于脊运动神经 .非还原电泳结果表明 ,该蛋白分子内含有巯基 ,有二聚体存在 .根据HPLC测定 ,蛋白纯度达 90 %以上 .将此蛋白给予培养的PC 1 2细胞 ,观察到它具有神经营养作用 . 展开更多
关键词 脊感觉神经特异蛋白35kD 纯化 神经营养作用 PC12细胞 大鼠
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脊神经节感觉神经特异蛋白的分离纯化和鉴定 被引量：3
7
作者 蒲小平 汪家政 +1 位作者 范明 李长龄 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期315-319,共5页
为进一步研究感觉神经特异蛋白２９ＫＤ的结构和功能，我们以兔脊神经节及背根纤维为材料，通过制备匀浆，离子交换层析ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ，高压液相凝胶过滤层析分离纯化了感觉神经特异蛋白２９ＫＤ，薄层扫描鉴定纯度为８０... 为进一步研究感觉神经特异蛋白２９ＫＤ的结构和功能，我们以兔脊神经节及背根纤维为材料，通过制备匀浆，离子交换层析ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ，高压液相凝胶过滤层析分离纯化了感觉神经特异蛋白２９ＫＤ，薄层扫描鉴定纯度为８０％以上，用蛋白质印迹法鉴定了该蛋白，并进行了该蛋白的稳定性观察。为该蛋白作为鉴定感觉神经元及其纤维的标志物。 展开更多
关键词 脊神经节 感觉神经蛋白 纯化 鉴定
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血清抗感觉神经特异蛋白抗体的检测和意义
8
作者 关鸿志 蒲小平 +3 位作者 任海涛 赵燕环 陈琳 郭玉璞 《中华神经科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期165-165,共1页
关键词 血清 抗感觉神经特异蛋白抗体 临床意义 感觉神经元 周围神经病
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