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荧光标记抗狂犬病病毒核蛋白单克隆抗体的制备及初步应用 被引量：2
1
作者 李洁 宋云 +3 位作者 王文娟 唐青 于鹏程 朱武洋 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期372-376,共5页
抗狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)核蛋白荧光抗体具有价格昂贵、保质期短和购买周期长等缺点,非常不利于各级疾病预防控制系统对该试剂的紧急使用。作为国家狂犬病实验室,亟需研发具有自主知识产权的异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothio... 抗狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)核蛋白荧光抗体具有价格昂贵、保质期短和购买周期长等缺点,非常不利于各级疾病预防控制系统对该试剂的紧急使用。作为国家狂犬病实验室,亟需研发具有自主知识产权的异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)标记抗RABV核蛋白单克隆抗体(Monoclonal antibody,MAb),并且商品化,使其广泛应用于流行病学调查和实验室的病原学和血清学诊断,实现国家狂犬病监测和检测相关试剂的标准化,从而为我国狂犬病防控提供技术支持。制备FITC标记的抗RABV核蛋白MAb,并将其初步应用于直接免疫荧光实验(Direct fluorescent assay,DFA)和快速荧光灶抑制试验(Rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)。将本实验室制备的抗RABV核蛋白MAb 3B12进行FITC标记,通过DFA确定荧光标记抗体(FITC--3B12)工作浓度,以市售FITC标记MAb作为阳性对照,对狂犬病相关临床样本进行DFA和RFFIT检测。DFA实验结果显示,FITC--3B12的工作浓度为1∶80,与市售荧光抗体的检测结果符合率为100%。RFFIT结果显示,FITC-3B12与市售荧光抗体的检测结果无统计学差异,且具有良好的重复性(CV<15%)。以上结果表明,本实验室所制备的抗RABV核蛋白荧光抗体可应用于狂犬病相关的DFA及RFFIT检测。 展开更多
关键词 狂犬病 狂犬病病毒(RABV) 异硫氰酸荧光素(FITC) 单克隆抗体(MAb) 直接免疫荧光实验(DFA) 快速荧光灶抑制试验(rffit)
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一种人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的瞬时表达及性质分析
2
作者 宋宪铭 安晨 +3 位作者 张超 熊颖 张祺 陈继军 《微生物学免疫学进展》 2019年第2期17-21,共5页
目的瞬时表达人源重组抗狂犬病病毒单克隆抗体,并对抗体性质进行分析。方法 PCR法扩增抗体轻、重链可变区并分别构建真核表达质粒;瞬时转染HEK293 EBNA1细胞;抗体经亲和纯化后,CE-SDS法分析纯化后抗体单体比例,用快速荧光灶抑制试验(RFF... 目的瞬时表达人源重组抗狂犬病病毒单克隆抗体,并对抗体性质进行分析。方法 PCR法扩增抗体轻、重链可变区并分别构建真核表达质粒;瞬时转染HEK293 EBNA1细胞;抗体经亲和纯化后,CE-SDS法分析纯化后抗体单体比例,用快速荧光灶抑制试验(RFFIT)分析抗体体外抗狂犬病病毒中和活性,ELISA分析抗体与3aG、CTN、PV及CVS株的结合。结果提取瞬时表达质粒的A260/280 nm比值在2.0～2.1之间纯化后抗体非还原CE-SDS单体纯度为74.4%;还原CE-SDS抗体轻、重链峰合计占比超过95%;抗体RFFIT体外中和活性为293.37 IU/mL,比活达628.21 IU/mg,抗体与3aG、CTN、PV及CVS株交叉反应均为阳性。结论该株抗体具有较高体外抗狂犬病病毒中和活性,与主要疫苗株均有较强结合。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 单克隆抗体 快速荧光灶抑制试验(rffit) 瞬时表达
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ELISA与RFFIT 2种方法检测人狂犬病抗体的比较 被引量：2
3
作者 吴小红 董关木 +1 位作者 L.Audry H.Bourhy 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1966-1968,共3页
目的:比较酶联免疫吸附试验(ELISA)与快速免疫荧光灶抑制试验(RFFIT)检测狂犬病疫苗免疫后血清抗体。方法:临床狂犬病疫苗免疫前、免疫后血清共123份,分别用2种方法检测血清抗狂犬病抗体,比较一致性、敏感性和特异性。结果:ELISA与RFFI... 目的:比较酶联免疫吸附试验(ELISA)与快速免疫荧光灶抑制试验(RFFIT)检测狂犬病疫苗免疫后血清抗体。方法:临床狂犬病疫苗免疫前、免疫后血清共123份,分别用2种方法检测血清抗狂犬病抗体,比较一致性、敏感性和特异性。结果:ELISA与RFFIT的一致性为92.7%。结论:2种方法检测结果无明显差异,均可适用于抗狂犬病毒抗体检测。 展开更多
关键词 酶联免疫吸附试验(ELISA) 快速免疫荧光灶抑制试验(rffit) 抗体检测 狂犬病毒
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