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重组刚地弓形虫MIC8 CTD蛋白及其多克隆抗体的制备 被引量:5
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作者 郑斌 尹志奎 +1 位作者 何蔼 詹希美 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2011年第8期581-584,共4页
目的制备弓形虫微线体蛋白8羧基端胞质尾(MIC8 CTD)重组蛋白及其多克隆抗体。方法以弓形虫基因组为模板,PCR扩增MIC8 CTD基因片段,构建MIC8 CTD/pGEX-4T-1原核表达系统;IPTG诱导表达GST-MIC8CTD融合蛋白;用纯化的融合蛋白加免疫佐剂免... 目的制备弓形虫微线体蛋白8羧基端胞质尾(MIC8 CTD)重组蛋白及其多克隆抗体。方法以弓形虫基因组为模板,PCR扩增MIC8 CTD基因片段,构建MIC8 CTD/pGEX-4T-1原核表达系统;IPTG诱导表达GST-MIC8CTD融合蛋白;用纯化的融合蛋白加免疫佐剂免疫新西兰兔,制备多克隆抗体,亲和层析纯化并分析抗体的特异性及效价。结果构建了MIC8 CTD原核表达系统,表达并纯化了GST-MIC8 CTD融合蛋白;获得了抗该蛋白的兔源性抗血清,纯化后的多克隆抗体能特异识别MIC8 CTD,ELISA测定抗体效价为1∶8 000。结论制备的GST-MIC8 CTD融合蛋白具有免疫原性,用该抗原免疫动物可获得高效价的多克隆抗体。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 线蛋白8 羧基末端胞质尾 多克隆抗
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刚地弓形虫MIC8 CTD作用蛋白的筛选及鉴定 被引量:1
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作者 郑斌 尹志奎 +2 位作者 史明珠 任红斌 詹希美 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第3期255-257,共3页
目的从刚地弓形虫速殖子裂解液中筛选并鉴定微线体蛋白8羧基端胞质尾(MIC8CTD)的作用蛋白。方法分别以GST—MIC8CTD蛋白和GST蛋白(对照)作为探针蛋白,采用GSTpull—down技术从弓形虫裂解液中筛选目标蛋白并进行SDS-PAGE分析;将目... 目的从刚地弓形虫速殖子裂解液中筛选并鉴定微线体蛋白8羧基端胞质尾(MIC8CTD)的作用蛋白。方法分别以GST—MIC8CTD蛋白和GST蛋白(对照)作为探针蛋白,采用GSTpull—down技术从弓形虫裂解液中筛选目标蛋白并进行SDS-PAGE分析;将目标蛋白转印至PVDF膜,测序,通过BLAST2在线对比搜索相似蛋白序列,初步确定目标蛋白;以目标蛋白抗体为一抗进行Westernblot,分析GSTpull—down产物与目标蛋白抗体的相互作用;分别用GST—MIC8CTD多克隆抗体和兔免疫前血清结合的sepharose与弓形虫裂解液进行免疫共沉淀试验,沉淀物进行SDS—PAGE和Westernblot分析。结果PAGE显示GST—MIC8CTD蛋白的pull—down产物中有一蛋白条带(分子质量单位约35~45ku),GST蛋白的pull—down产物中无此蛋白;BLAST2比对目标蛋白的氨基酸序列与弓形虫醛缩酶序列一致;ECM检测GST—MIC8CTD多克隆抗体的免疫共沉淀产物中有蛋白组分可被相应的抗体识别,免疫前血清的免疫共沉淀产物中无可被识别的蛋白。结论经GSTpull—down技术和免疫共沉淀试验筛选、鉴定,弓形虫MIC8CTD的作用蛋白为醛缩酶。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 线蛋白8羧基端胞质尾 GST pull—down 醛缩酶 免疫共沉淀
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