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TMEM39A在原发性胆汁性胆管炎中的作用机制
1
作者 孙晓彤 韩崇旭 +2 位作者 王婵 任传利 张明明 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第17期2176-2182,共7页
目的探讨TMEM39A在原发性胆汁性胆管炎中的作用机制。方法为研究TMEM39A在原发性胆汁性胆管炎中如何调节自噬的表达,选用人肝胆管癌细胞RBE来进行研究。并用疏水性胆汁酸甘氨鹅脱氧胆酸(GCDC)处理人肝胆管癌细胞RBE分为3组:control组、... 目的探讨TMEM39A在原发性胆汁性胆管炎中的作用机制。方法为研究TMEM39A在原发性胆汁性胆管炎中如何调节自噬的表达,选用人肝胆管癌细胞RBE来进行研究。并用疏水性胆汁酸甘氨鹅脱氧胆酸(GCDC)处理人肝胆管癌细胞RBE分为3组:control组、500μmol/L组和1000μmol/L组。细胞计数试剂盒(CCK-8)、细胞克隆、细胞划痕和Hoechst染色实验检测细胞活力、增殖、伤口愈合率和凋亡。qPCR检测细胞中TMEM39A mRNA表达量;Western blot检测TMEM39A和LC3的蛋白表达量。结果与control组相比较,1000μmol/L组的细胞活力、增殖和伤口愈合率降低,细胞凋亡现象最明显。在构建的原发性胆汁性胆管炎的模型中,过表达TMEM39A会促进LC3的表达。结论TMEM39A的表达增高引起胆管细胞自噬增强使胆管受损,可能是引起原发性胆汁性胆管炎的机制之一。 展开更多
关键词 TMEM39A 原发性胆汁性胆管炎 人肝胆管癌细胞 微管相关蛋白3β 甘氨鹅脱氧胆酸
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长链非编码RNASNHG5在卵巢癌组织中表达及对卵巢癌细胞自噬影响 被引量：4
2
作者 沈晓萍 张金春 《中国计划生育学杂志》 2020年第11期1731-1735,1935,共6页
目的:观察卵巢癌组织中长链非编码RNA(lncRNA)核仁小RNA宿主基因5(SNHG5)的表达,并分析SNHG5表达对卵巢癌细胞自噬的影响。方法:选取2018年8月—2019年3月本院卵巢癌手术取得的卵巢癌组织73例(卵巢癌组),卵巢囊肿手术取得卵巢组织82例(... 目的:观察卵巢癌组织中长链非编码RNA(lncRNA)核仁小RNA宿主基因5(SNHG5)的表达,并分析SNHG5表达对卵巢癌细胞自噬的影响。方法:选取2018年8月—2019年3月本院卵巢癌手术取得的卵巢癌组织73例(卵巢癌组),卵巢囊肿手术取得卵巢组织82例(囊肿组),实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测两组组织中SNHG5表达并分析与卵巢癌患者临床病理关系。培养人卵巢癌细胞SKOV3作为对照组,应用Lipofectamine 2000试剂将转染空质粒pcDNA3.1(+)、pcDNA3.1-SNHG5重组质粒的SKOV3细胞分别作为阴性对照组、SNHG5过表达组。细胞计数试剂盒(CCK8)法检测各组SKOV3细胞增殖情况,通过透视电镜、单丹(磺)酰戊二胺(MDC)法检测各组SKOV3细胞自噬水平,应用免疫印迹法(WB)检测LC3-I、LC3-II、Beclin 1蛋白表达水平。结果:lnc RNA-SNHG5相对表达量卵巢癌组(0.49±0.06)低于囊肿组(1.13±0.23),且卵巢癌组组织学分级G3、FIGO分期III^IV期中lnc RNA-SNHG5低表达者占比更高(P<0.05);SNHG5相对表达量SNHG5过表达组(1.97±0.37)高于空白组(1.03±0.20)和阴性对照组(1.05±0.21)(P<0.05);转染48h、72h、96h时SKOV3细胞增殖抑制率SNHG5过表达组(23.64±4.73%、43.57±8.71%、57.82±11.56%)高于空白组和阴性对照组(P<0.05);与空白组和阴性对照组比较,MDC阳性细胞占比SNHG5过表达组(42.38±7.64)最高,LC3-I蛋白表达量(0.16±0.03)降低,LC3-II(0.86±0.18)、beclin 1(0.97±0.18)升高(均P<0.05)。结论:lncRNA-SNHG5在卵巢癌组织中低表达,lncRNA-SNHG5过表达可明显抑制人卵巢癌细胞活力,促进细胞自噬。 展开更多
关键词 卵巢癌 长链非编码RNA 核仁小RNA宿主基因5 自噬 微管相关蛋白轻链3-β
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微管相关蛋白1轻链3β在胃癌组织的表达及其临床意义
3
作者 邢文凤 朱恒利 +3 位作者 张碧涛 黄国全 钱昆 孙建华 《中华实验外科杂志》 CAS 2024年第2期230-234,共5页
目的基于单细胞测序技术解析微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)在胃癌中的表达及其与患者预后的关系。方法选用3对胃癌及配对的癌旁组织样本行单细胞转录组测序(scRNA-seq)。CellTypist对过滤后的单细胞表达数据进行亚群分类, 使用Wilcoxon ra... 目的基于单细胞测序技术解析微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)在胃癌中的表达及其与患者预后的关系。方法选用3对胃癌及配对的癌旁组织样本行单细胞转录组测序(scRNA-seq)。CellTypist对过滤后的单细胞表达数据进行亚群分类, 使用Wilcoxon rank-sum对测序数据进行拟时序分析, 探究不同细胞簇中LC3B的差异表达。通过癌症基因组图谱(TCGA)及免疫组织化学技术(IHC)分析LC3B在胃癌组织中的表达。采用单因素和多因素Cox比例风险回归模型确定影响胃癌患者预后的独立因素。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术分析胃癌细胞中LC3B的表达水平, 采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成、Transwell检测LC3B表达改变后, 胃癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的变化。两组间比较采用两独立样本t检验。结果 scRNA-seq分析结果显示, LC3B在胃癌组织中的表达量高于癌旁组织(2.001±2.706比1.010±1.634, t=44.094, P<0.01)且LC3B在内皮细胞、单核细胞中表达量高于其余细胞亚群(3.610±3.294, 3.214±3.889, F=1 039.267, P<0.01)。通过TCGA和IHC分析结果显示, LC3B在原发性胃癌组织中的表达高于正常组织[67.983(53.874, 83.827)比48.114(39.147, 78.174), P<0.01;60.3%比19.1%, χ^(2)=9.299, P<0.01]。生存分析显示, LC3B高表达的胃癌患者总体生存时间短于LC3B低表达的患者[风险比(HR)=4.143, 95%可信区间(CI):2.352~7.298, P<0.05]。多因素Cox回归分析显示, LC3B为总生存期相关的危险因素(HR=4.966, 95%CI:2.241~11.005, P<0.01)。CCK-8、Transwell迁移及侵袭实验、克隆形成实验检测分析发现, 过表达LC3B后胃癌细胞的活力、迁移、侵袭、增殖能力高于空载体组[(1.837±0.057)比(1.287±0.091)、(338.000±39.950)个比(152.333±4.509)个、(287.667±44.230)个比(148.667±27.465)个、(202.333±12.503)个比(104.667±11.240)个, t=8.883、7.999、4.624、10.062, P<0.05], 抑制LC3B表达后, 胃癌细胞的活力、迁移、侵袭� 展开更多
关键词 胃癌 单细胞转录组测序 自噬 微管相关蛋白1轻链3β 预后
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LC3B在心力衰竭中的研究进展
4
作者 张琪琪 崔英华 《医学诊断》 2024年第2期221-226,共6页
心力衰竭是各种心血管疾病的终末阶段,亦是医学界尚未攻克的最后堡垒,给患者、家庭、社会带来沉重负担。LC3B属于LC3/GABARAP蛋白家族,通过介导自噬底物的招募、自噬体的运动、自噬基因的转录,参与自噬调节,保护细胞应对饥饿、缺血、缺... 心力衰竭是各种心血管疾病的终末阶段,亦是医学界尚未攻克的最后堡垒,给患者、家庭、社会带来沉重负担。LC3B属于LC3/GABARAP蛋白家族,通过介导自噬底物的招募、自噬体的运动、自噬基因的转录,参与自噬调节,保护细胞应对饥饿、缺血、缺氧,抗线粒体氧化应激,在心肌梗死、心肌病、心肌肥大中有重要作用。本综述对LC3B的生物学特点、功能及其通过调节自噬改善心力衰竭进行综述,并为心力衰竭的治疗提供新思路。 展开更多
关键词 心力衰竭 自噬 自噬体 微管相关蛋白1轻链3β
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基于mTOR/Beclin1/LC3信号轴探讨制萎扶胃丸对胃癌前病变大鼠胃窦组织自噬的影响 被引量：4
5
作者 封壮壮 宋瑞平 +3 位作者 豆鹏程 陈心怡 左娇娇 舒劲 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2023年第4期361-370,共10页
目的:探讨制萎扶胃丸(ZWFW)对胃癌前病变(PLGC)大鼠胃窦组织哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1)/微管相关蛋白1轻链3(LC3)信号轴关键分子表达的影响。方法:SPF级SD大鼠随机分为正常组,模型组,叶酸组,ZWF... 目的:探讨制萎扶胃丸(ZWFW)对胃癌前病变(PLGC)大鼠胃窦组织哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1)/微管相关蛋白1轻链3(LC3)信号轴关键分子表达的影响。方法:SPF级SD大鼠随机分为正常组,模型组,叶酸组,ZWFW低、中、高剂量组,除正常组常规饲养外,模型组、叶酸组、ZWFW低、中、高剂量组,采用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)联合饥饱失常、乙醇灌胃、氨水自由饮用以及雷尼替丁饲料喂养五因素复合造模法建立PLGC大鼠模型后,分别用生理盐水、叶酸片水溶液(0.002 g/kg)、ZWFW低、中、高剂量水溶液(0.42,0.84,1.67 g/kg)予以治疗4周后剖腹取胃。采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠胃窦组织病理学变化,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)及免疫组化检测大鼠胃窦组织mTOR、Beclin1、微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)的mRNA及蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠胃窦组织胀大,胃壁变薄,胃黏膜色泽苍白,皱襞萎缩浅平,走行紊乱,可见结节及赘生物;HE染色示:与正常组比较,模型组胃黏膜腺体排列拥挤、紊乱,细胞形态不一,可见大量杯状细胞,细胞浆嗜碱性,细胞核大、深染、不规则,黏膜肌层浸润破坏;与模型组比较,ZWFW显著改善了胃黏膜腺体结构排列紊乱和细胞异型性等病理表现。与正常组比较,模型组大鼠胃窦组织m TOR mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05),Beclin1和LC3B mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,ZWFW中、高剂量组胃窦组织mTOR mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),ZWFW低剂量组胃窦组织Beclin1、LC3B蛋白表达升高(P<0.05),中、高剂量组胃窦组织Beclin1、LC3B mRNA和蛋白表达升高(P<0.05)。结论:ZWFW可显著改善PLGC模型大鼠胃黏膜异常组织病理学表现,其机制可能与下调mTOR表达,上调Beclin1、LC3B表达进而促进自噬相关。 展开更多
关键词 胃癌前病变 制萎扶胃丸 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR) 自噬关键分子酵母Atg6同系物(Beclin1) 微管相关蛋白1轻链3β(LC3B) 自噬
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α-常春藤皂苷对小鼠急性肝损伤自噬相关蛋白表达的影响 被引量：3
6
作者 刘宇 王园园 +1 位作者 李智涛 王梅林 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期226-230,共5页
目的 研究α-常春藤皂苷(α-hederin)对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤自噬相关蛋白表达的影响。方法 按体重将ICR小鼠随机分为正常组(等体积2%吐温80溶液),模型组(急性肝损伤模型,等体积2%吐温80溶液),低、高2个剂量实验组(急性肝损... 目的 研究α-常春藤皂苷(α-hederin)对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤自噬相关蛋白表达的影响。方法 按体重将ICR小鼠随机分为正常组(等体积2%吐温80溶液),模型组(急性肝损伤模型,等体积2%吐温80溶液),低、高2个剂量实验组(急性肝损伤模型,40,80 mg·kg^(-1)α-常春藤皂苷)和阳性对照组(急性肝损伤模型,150 mg·kg^(-1)联苯双酯)。酶法测定血清谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)活力,酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定小鼠血清中炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的水平。苏木精-伊红染色(HE)观察组织病理变化。蛋白质印迹法检测肝组织中细胞自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3β-Ⅱ(LC3B-Ⅱ)和血管内皮组织酵母自噬基因-1(Beclin-1)蛋白表达水平。结果 在CCl4所致急性肝损伤小鼠实验中,正常组、模型组、低剂量实验组、高剂量实验组和阳性对照组小鼠血清GPT酶活力分别为(10.12±3.86),(97.96±17.07),(48.76±22.23),(34.80±14.38)和(51.57±17.13)U·L^(-1);血清GOT酶活力分别为(14.56±3.13),(39.04±6.21),(27.93±6.66),(24.39±2.60)和(31.44±3.32)U·L^(-1);正常组、模型组、低剂量实验组、高剂量实验组和阳性对照组小鼠血清中TNF-α含量分别为(110.73±24.54),(187.55±28.08),(160.51±14.30),(121.96±20.50)和(114.90±24.65)pg·mL^(-1);这5组小鼠血清中IL-6量分别为(26.38±3.11),(42.01±5.47),(34.13±3.89),(28.62±5.15)和(29.62±4.25)pg·mL^(-1);正常组、模型组和低、高2个剂量实验组LC3BⅡ蛋白表达量分别为2.23±0.36,1.00±0.17,2.47±0.62和3.41±0.49;这4组Beclin-1蛋白表达量分别为1.51±0.14,1.00±0.03,1.23±0.10和1.38±0.12。上述指标,模型组与正常组相比,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);低、高2个剂量实验组与模型组相比,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 α-常春藤皂苷对小鼠急性肝损伤具有保护作用,其机制可能与抗炎症反应有关;α-常春藤� 展开更多
关键词 α-常春藤皂苷 急性肝损伤 肿瘤坏死因子Α 白细胞介素-6 微管相关蛋白1轻链3βⅡ 血管内皮组织酵母自噬基因1
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一种优化小鼠成纤维细胞中自噬小体示踪的方法 被引量：1
7
作者 杨侃 李晓宁 +3 位作者 OmaribaGideon 李凯 周宇荀 肖君华 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2017年第1期65-71,共7页
目的为了提高对自噬小体示踪的精确度和清晰度,全面展示细胞自噬相关进程,优化基于绿色荧光蛋白-微管相关蛋白1轻链3β(GFP-LC3β)标记物的自噬小体示踪方法。方法组织块贴壁法原代培养小鼠耳成纤维细胞,脂质体转染过表达GFP-LC3β;GFP-... 目的为了提高对自噬小体示踪的精确度和清晰度,全面展示细胞自噬相关进程,优化基于绿色荧光蛋白-微管相关蛋白1轻链3β(GFP-LC3β)标记物的自噬小体示踪方法。方法组织块贴壁法原代培养小鼠耳成纤维细胞,脂质体转染过表达GFP-LC3β;GFP-LC3β充分表达后给予药物刺激以激活或阻断细胞自噬通路,然后进行免疫荧光染色。对染色操作进行优化:首先,延长多聚甲醛的固定细胞时间(从15min延长至45min);其次,提高Triton X-100处理时间,除第一次和最后一次使用PBS润洗,其余每一次使用的PBS都添加0.2%Triton X-100;最后,提升抗体稀释液中BSA和Triton X-100含量,BSA从3%提升至5%,TritonX-100的含量从0.1%提升至0.2%。结果拍照后统计自噬小体发现,新方法更加准确地标记GFP-LC3β指示物,自噬激活条件下示踪准确度显著提升(达4.2倍);新方法更加清晰地呈现自噬小体的形态和胞内分布,将自噬小体示踪的清晰度显著提升(达2.5倍);新方法还能使用不同荧光通道,同时标记其他自噬相关基因。结论本研究提供的一种优化小鼠成纤维细胞中自噬小体示踪的方法将为全面展示细胞自噬进程、深入了解细胞自噬相关机制提供有力的技术支持。 展开更多
关键词 细胞自噬 绿色荧光蛋白-小鼠微管相关蛋白1轻链3β 自噬小体示踪 原代培养
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自噬相关哺乳动物雷帕霉素靶蛋白、微管相关蛋白1轻链3—β在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义 被引量：4
8
作者 宋孟绮 薛寅凯 +3 位作者 孙运秀 窦东伟 程平 陈立波 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1108-1110,共3页
目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、微管相关蛋白1轻链3-β（LC3-Ⅱ）在肝细胞癌（HCC）中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学方法检测48例肝细胞癌组织及正常肝组织中mTOR、LC3—Ⅱ的表达，并分析其存癌组织中表达的相... 目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、微管相关蛋白1轻链3-β（LC3-Ⅱ）在肝细胞癌（HCC）中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学方法检测48例肝细胞癌组织及正常肝组织中mTOR、LC3—Ⅱ的表达，并分析其存癌组织中表达的相关性及与临床病理因素的关系。结果mTOR在HCC中的表达阳性率（54．17％）明显高于正常肝组织（20．00％，P〈0．05），且与分化程度、包膜侵犯明显相关（P〈0．05）；LC3-Ⅱ存HCC中的表达阳性率（47．92％）明显低于正常肝组织（83．33％，P〈0．05），且与TNM分期、分化程度相关（P〈0．05）；mTOR与LC3-Ⅱ在HCC中的表达呈负相关（r=0．35，P〈0．05）。结论肝细胞癌中的自噬活性或自噬潜能降低，可能参与肝癌的发生、发展。联合检测自噬相关mTOR、LC3-Ⅱ可明显提高肝细胞癌的诊断敏感性。 展开更多
关键词 癌 肝细胞 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 微管相关蛋白1轻链3-β 自噬 免疫组织化学
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大鼠LC3蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备 被引量：2
9
作者 倪志华 张瑞英 +1 位作者 张玉明 周艳芬 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期739-741,共3页
微管相关蛋白1轻链3-β(LC3)在哺乳动物细胞中定位于自噬泡上,可作为一种特定的标记用来检测自噬。从SD大鼠脑组织提取总RNA,经RT-PCR扩增得到LC3全长编码基因,并克隆到pMD1 8-T载体。以测序验证正确的重组子为模板扩增LC3基因,并构建pU... 微管相关蛋白1轻链3-β(LC3)在哺乳动物细胞中定位于自噬泡上,可作为一种特定的标记用来检测自噬。从SD大鼠脑组织提取总RNA,经RT-PCR扩增得到LC3全长编码基因,并克隆到pMD1 8-T载体。以测序验证正确的重组子为模板扩增LC3基因,并构建pUC18-LC3重组质粒,将其转化到E.coli BL21(DE3)中。SDS-PAGE结果表明,菌体诱导后形成包涵体形式的表达产物,以电泳回收目的蛋白并免疫新西兰白兔,获得大鼠LC3蛋白多克隆抗体。western blot结果显示,制备的多克隆抗体可特异性识别LC3蛋白。 展开更多
关键词 微管相关蛋白1轻链3-β 原核表达 多克隆抗体 制备
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