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细胞自噬的研究方法 被引量：70
1
作者 马泰 孙国平 李家斌 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2012年第3期204-209,共6页
细胞自噬的研究是目前生物医学领域热点之一,广泛参与各种生理和病理过程.目前普遍采用的自噬检测方法包括电镜、免疫荧光、蛋白质印迹等方法检测自噬体及其标志蛋白.研究的深入对自噬的检测方法也提出了更高的要求,自噬功能障碍包括自... 细胞自噬的研究是目前生物医学领域热点之一,广泛参与各种生理和病理过程.目前普遍采用的自噬检测方法包括电镜、免疫荧光、蛋白质印迹等方法检测自噬体及其标志蛋白.研究的深入对自噬的检测方法也提出了更高的要求,自噬功能障碍包括自噬体形成和降解障碍,因此,准确全面地评估自噬不仅包括自噬体的检测,还包括动态观察整个自噬性降解的过程是否顺畅(即自噬潮分析).另外,通过药物或基因干预技术来人为地调控自噬以观察其在体内体外模型中的作用也是自噬分析的重要内容.需要注意的是,任何一种方法单独应用均不能作为自噬的依据,对任何方法得到的结果进行解释时必须慎重,特别是不能将自噬体的增多减少或自噬相关蛋白表达的高低等同于自噬的增强或减弱. 展开更多
关键词 细胞自噬 自噬体 微管相关蛋白1轻链3 自噬潮 检测方法
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葛根素调节AMPK-mTOR信号通路抑制自噬改善大鼠脑缺血再灌注损伤研究 被引量：43
2
作者 黄亚光 王金凤 +2 位作者 杜利鹏 张微 梅志刚 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第13期3127-3133,共7页
目的探讨葛根素通过腺苷一磷酸活化蛋白激酶(AMPK)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)-Unc-51样激酶1(Ulk1)通路抑制自噬改善大鼠脑缺血再灌注损伤的作用。方法40只雄性SD大鼠随机分为4组,即假手术组、模型组及葛根素低、高剂量(50、100mg/... 目的探讨葛根素通过腺苷一磷酸活化蛋白激酶(AMPK)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)-Unc-51样激酶1(Ulk1)通路抑制自噬改善大鼠脑缺血再灌注损伤的作用。方法40只雄性SD大鼠随机分为4组,即假手术组、模型组及葛根素低、高剂量(50、100mg/kg)组。各组大鼠连续给药7d,末次给药30min后,采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,缺血1.5h再灌注24h后,进行神经功能评分,TTC染色观察脑梗死体积,电镜观察自噬小体的形成,Western blotting法检测海马组织中微管相关蛋白1轻链3(LC3)、p62、AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR、Ulk1、pS757-Ulk1蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分显著增加,脑梗死体积明显增大,自噬小体增多,LC3-II/LC3-I显著增加,p62蛋白表达水平显著降低,p-AMPK表达水平显著升高,p-mTOR和pS757-Ulk1蛋白表达水平显著降低。与模型组比较,葛根素各组大鼠的神经功能损伤明显改善,脑梗死体积减小,自噬小体减少,LC3-II/LC3-I显著降低,p62蛋白表达水平显著升高,p-AMPK蛋白表达水平显著降低,p-mTOR和pS757-Ulk1蛋白表达水平显著升高。结论葛根素可能通过调控AMPK-mTOR-Ulk1信号通路抑制自噬的过度发生,从而减轻脑缺血再灌注损伤的发生。 展开更多
关键词 葛根素 脑缺血再灌注 自噬 AMPK-mTOR-Ulk1信号通路 微管相关蛋白1轻链3 P62
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通腑清胰汤治疗急性胰腺炎疗效及对患者中医证候积分与肠功能的影响 被引量：27
3
作者 叶浩 彭余胜 +2 位作者 冯淑涵 李辉萍 雷洪伟 《陕西中医》 CAS 2021年第4期474-477,共4页
目的:探讨通腑清胰汤治疗急性胰腺炎疗效及对患者中医证候积分及肠功能的影响。方法:以98例急性胰腺炎患者为研究对象,按随机数字表法分为对照组(49例,给予常规西药治疗)和研究组(49例,给予通腑清胰汤联合常规西药治疗)。统计治疗后所... 目的:探讨通腑清胰汤治疗急性胰腺炎疗效及对患者中医证候积分及肠功能的影响。方法:以98例急性胰腺炎患者为研究对象,按随机数字表法分为对照组(49例,给予常规西药治疗)和研究组(49例,给予通腑清胰汤联合常规西药治疗)。统计治疗后所有患者临床疗效、肠道相关功能恢复时间及胃肠道功能评分,观察治疗前及治疗后中医证候积分、肠抑胃肽(GIP)、血清胃肠激素活动性肠肽(VIP)、血清微管相关蛋白1轻链3(MAP1-LC3)、髓样细胞触发受体-1(TREM-1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血淀粉酶(Ams)变化情况。结果:治疗前,两组腹痛剧烈、身热口渴、胸闷腹胀、头身沉重胀痛、恶心呕吐、便溏不爽比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组腹痛剧烈、身热口渴、胸闷腹胀、头身沉重胀痛、恶心呕吐、便溏不爽均较治疗前降低,其中研究组腹痛剧烈、身热口渴、胸闷腹胀、头身沉重胀痛、恶心呕吐、便溏不爽均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,研究组临床疗效高于对照组(95.92%与79.59%),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,研究组肠道相关功能恢复时间及胃肠道功能评分均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组GIP、VIP、MAP1-LC3、TREM-1、IL-6、TNF-α、Ams比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组GIP、VIP、MAP1-LC3、TREM-1、IL-6、TNF-α、Ams均较治疗前降低,其中研究组GIP、VIP、MAP1-LC3、TREM-1、IL-6、TNF-α、Ams均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:通腑清胰汤治疗急性胰腺炎可减少患者中医证候积分,缩短肠道功能恢复时间,恢复肠道功能。 展开更多
关键词 通腑清胰汤 急性胰腺炎 中医证候积分 肠道功能 肠抑胃肽 胃肠激素活动性肠肽 微管相关蛋白1轻链3 髓样细胞触发受体-1 白细胞介素-6 肿瘤坏死因子-α 血淀粉酶
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陈皮-半夏对内皮细胞损伤保护机制的研究 被引量：25
4
作者 黄小波 陈文强 +2 位作者 王宁群 陈玉静 吴犀翎 《北京中医药》 2014年第11期868-871,共4页
目的研究陈皮-半夏能否通过对Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(LC-3)等自噬通路的调节作用及其空白干预内皮细胞损伤的机制。方法分离培养脐静脉内皮细胞(HUVEC),将其实验分为空白对照组,ox-LDL损伤模型组(模型组),陈皮-半夏小、中、大剂... 目的研究陈皮-半夏能否通过对Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(LC-3)等自噬通路的调节作用及其空白干预内皮细胞损伤的机制。方法分离培养脐静脉内皮细胞(HUVEC),将其实验分为空白对照组,ox-LDL损伤模型组(模型组),陈皮-半夏小、中、大剂量组。MTT法,观察陈皮-半夏对内皮细胞存活率的影响;Western blot法观察陈皮-半夏对内皮细胞Beclin-1、LC-3表达的影响。方法与空白对照组比较,模型组细胞存活率显著下降(P<0.01),Beclin-1、LC-3表达显著升高(P<0.01)。陈皮-半夏中、大剂量组细胞存活率均较模型组显著上升(P<0.01),Beclin-1水平较模型组显著下降(P<0.01)。陈皮-半夏3个剂量组的LC-3水平均较模型组显著下降(P<0.05)。结论陈皮-半夏可能通过抑制血管内皮细胞中Beclin-1、LC-3的表达,发挥提高内皮细胞存活率治疗动脉粥样硬化的作用。 展开更多
关键词 陈皮 半夏 Beclin-1基因 微管相关蛋白1轻链3 内皮细胞 大鼠
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BISAP评分联合血清TG、MAP1-LC3检测对急性重症胰腺炎患者病情及预后的评估价值 被引量：21
5
作者 陈莹 李越 《山东医药》 CAS 2020年第1期21-24,共4页
目的探讨严重程度床边指数(BISAP)评分联合血清甘油三酯(TG)、微管相关蛋白1轻链3(MAP1-LC3)检测对急性重症胰腺炎(SAP)患者病情及预后的评估价值。方法选择169例急性胰腺炎(AP)患者,根据病情将其分为轻症AP(MAP组,n=97)和重症AP(SAP组,... 目的探讨严重程度床边指数(BISAP)评分联合血清甘油三酯(TG)、微管相关蛋白1轻链3(MAP1-LC3)检测对急性重症胰腺炎(SAP)患者病情及预后的评估价值。方法选择169例急性胰腺炎(AP)患者,根据病情将其分为轻症AP(MAP组,n=97)和重症AP(SAP组,n=72),并于同期选取60例体检健康者为对照组。采用BISAP评分评估各组病情,用酶联免疫吸附法检测血清TG、MAP1-LC3水平,用Pearson积矩相关分析BISAP评分与血清TG、MAP1-LC3的关系。随访3个月,记录SAP患者预后,包括多器官功能障碍综合征(MODS)、胰腺坏死、死亡。绘制受试者工作特征(ROC)曲线评估BISAP评分及血清TG、MAP1-LC3对SAP患者预后的预测价值。结果SAP组BISAP评分高于MAP组(P<0.05)。MAP、SAP组血清TG、MAP1-LC3水平高于对照组,且SAP组血清TG、MAP1-LC3水平高于MAP组,比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。MAP患者BISAP评分与血清TG、MAP1-LC3水平呈正相关(r分别为0.529、0.617,P均<0.05);SAP患者BISAP评分与血清TG、MAP1-LC3呈正相关(r分别为0.683、0.725,P均<0.05)。不同预后SAP患者BISAP评分及血清TG、MAP1-LC3水平比较差异有统计学意义(P均<0.05)。BISAP评分及血清TG、MAP1-LC3对SAP患者MODS、胰腺坏死、死亡均有一定的预测价值,三指标联合检测对SAP患者预后的预测价值优于单一指标检测(P均<0.05)。结论BISAP评分联合血清TG、MAP1-LC3检测可评估SAP患者病情严重程度,预测其预后。 展开更多
关键词 急性重症胰腺炎 急性胰腺炎严重程度床边指数 甘油三酯 微管相关蛋白1轻链3
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脾气虚大鼠海马神经元线粒体自噬水平及PINK1/Parkin途径的研究 被引量：20
6
作者 刘文俊 许欣竹 +4 位作者 穆靖洲 赵秋宇 马丹 王路 单德红 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期341-343,共3页
目的:通过观察脾气虚大鼠海马神经元线粒体自噬水平及PTEN诱导激酶1(PINK1)/Parkin途径的变化,从线粒体方面研究脾气虚的发生机制。方法:16只雄性SD大鼠随机分为对照组和脾气虚模型组(模型组),每组8只;透射电镜观察海马神经元线粒体形... 目的:通过观察脾气虚大鼠海马神经元线粒体自噬水平及PTEN诱导激酶1(PINK1)/Parkin途径的变化,从线粒体方面研究脾气虚的发生机制。方法:16只雄性SD大鼠随机分为对照组和脾气虚模型组(模型组),每组8只;透射电镜观察海马神经元线粒体形态学变化;比色法检测海马组织ATP含量;Western blot法检测海马神经元微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅰ和Ⅱ、PINK1及Parkin蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组海马神经元线粒体数量减少、空泡化,但未见明显自噬现象;ATP含量显著减少(P<0.01),LC3-Ⅱ/Ⅰ比值变小(P<0.05),LC3-Ⅱ、PINK1和Parkin蛋白表达显著下调(P<0.05)。结论:脾气虚的发生可能与PINK1/Parkin途径抑制所致的海马神经元线粒体自噬水平下降有关。 展开更多
关键词 脾气虚 海马 线粒体自噬 微管相关蛋白1轻链3 PTEN诱导激酶1 PARKIN
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针刺对出血性中风大鼠脑组织自噬相关蛋白表达的影响 被引量：20
7
作者 刘昊 张菶 +6 位作者 李新伟 冯培培 杜嘉 楼柯浪 阮晨 周驰 孙晓伟 《针刺研究》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期637-642,共6页
目的:观察针刺'百会'透'曲鬓'穴对出血性中风大鼠自噬相关蛋白的影响,探讨针刺促进脑出血后大鼠神经功能恢复的机制。方法:120只SD大鼠随机分成假手术组、模型组、非穴位组、针刺组、雷帕霉素组,每组按脑出血后不同时间... 目的:观察针刺'百会'透'曲鬓'穴对出血性中风大鼠自噬相关蛋白的影响,探讨针刺促进脑出血后大鼠神经功能恢复的机制。方法:120只SD大鼠随机分成假手术组、模型组、非穴位组、针刺组、雷帕霉素组,每组按脑出血后不同时间点(造模后第3、7天)分2个亚组。将50μL自体血注入到大鼠尾状核制备出血性中风模型。各干预组分别给予针刺'百会'透患侧'曲鬓'、非穴位针刺、侧脑室注射雷帕霉素进行干预。于各时间点对大鼠进行神经功能行为学评分(悬线测试、平衡行走测试)。评分结束后取各组大鼠出血半暗带区脑组织,免疫组织化学法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白的阳性表达,Western blot法检测LC3-Ⅱ/Ⅰ的变化。结果:与假手术组比较,模型组造模后第3、7天的神经功能行为学评分(悬线测试、平衡行走测试)显著降低(P<0. 05);与模型组比较,针刺组、雷帕霉素组大鼠神经功能行为学评分明显升高(P<0. 05),且针刺组高于雷帕霉素组(P<0. 05)。与同时间点假手术组比较,造模后第3、7天模型组大鼠脑组织LC3蛋白阳性表达、LC3-Ⅱ/Ⅰ明显升高(P<0. 05);与同时间点的模型组比较,针刺组大鼠脑组织LC3蛋白阳性表达、LC3-Ⅱ/Ⅰ明显升高(P<0. 05);与针刺组比较,雷帕霉素组大鼠脑组织LC3蛋白阳性表达、LC3-Ⅱ/Ⅰ明显升高(P<0. 05)。结论:针刺能上调出血性中风大鼠脑组织LC3-Ⅱ/Ⅰ,良性激活自噬水平,进而改善大鼠神经功能缺损。 展开更多
关键词 针刺 出血性中风 自噬 微管相关蛋白1轻链3 雷帕霉素
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电针预处理通过调控皮层区自噬改善大鼠脑缺血再灌注损伤 被引量：18
8
作者 黄亚光 杨松柏 +3 位作者 杜利鹏 蔡三金 冯知涛 梅志刚 《针刺研究》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期867-872,共6页
目的:观察电针"百会""曲池""足三里"对脑缺血再灌注损伤大鼠大脑皮层区自噬的影响,探讨电针预处理改善大鼠脑缺血再灌注损伤的机制。方法:SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,每组11只。电针组... 目的:观察电针"百会""曲池""足三里"对脑缺血再灌注损伤大鼠大脑皮层区自噬的影响,探讨电针预处理改善大鼠脑缺血再灌注损伤的机制。方法:SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,每组11只。电针组电针"曲池""百会""足三里",每次30 min,每天1次,连续5 d。模型组和电针组大鼠末次电针结束30 min后,采用线栓法制备大脑中动脉栓塞模型,使大鼠脑缺血1.5 h,拔栓再灌注24 h后进行神经功能缺损评分,2,3,5-三苯基氯化四氮唑染色法检测脑梗死体积,高尔基染色法检测神经元树突棘密度,电镜观察大脑皮层缺血区神经元结构及自噬小体形成情况,Western blot法检测大脑皮层缺血区中微管相关蛋白1轻链3(LC3)和选择性自噬接头蛋白sequestosome-1(SQSTM1/p62)的表达水平。结果:与假手术组相比,模型组大鼠神经功能缺损评分明显升高(P<0.01),脑梗死体积显著增大(P<0.01),自噬小体增多,皮层缺血区LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ显著增加(P<0.01),p62的表达显著下调(P<0.01)。与模型组相比,电针组大鼠神经功能缺损评分明显降低(P<0.01),脑梗死体积显著减小(P<0.01),自噬小体减少,皮层缺血区LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ显著降低(P<0.01),p62的表达显著上调(P<0.01)。结论:电针预处理可能通过抑制自噬改善脑缺血再灌注损伤。 展开更多
关键词 针刺 自噬 脑缺血再灌注损伤 微管相关蛋白1轻链3 选择性自噬接头蛋白
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脾气虚证大鼠股四头肌线粒体自噬水平及AMPK/ULK1途径变化的研究 被引量：17
9
作者 刘文俊 李振钰 +4 位作者 许欣竹 冷雪 陈文娜 穆靖洲 单德红 《北京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期760-765,共6页
目的观察脾气虚证大鼠股四头肌线粒体自噬水平及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/UNC-51-类似自噬激活激酶1(ULK1)途径的变化,从线粒体方面研究"脾气虚四肢不用"的机制。方法运用饮食失节+劳倦法复制脾气虚证大鼠模型,随机分为对照... 目的观察脾气虚证大鼠股四头肌线粒体自噬水平及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/UNC-51-类似自噬激活激酶1(ULK1)途径的变化,从线粒体方面研究"脾气虚四肢不用"的机制。方法运用饮食失节+劳倦法复制脾气虚证大鼠模型,随机分为对照组和脾气虚模型组(模型组),造模成功后取股四头肌,比色法检测三磷酸腺苷(ATP)含量;JC-1法检测线粒体膜电位(MMP);免疫荧光及印迹法(Western blot)法检测微管相关蛋白1轻链3-B (LC3 B)、选择性自噬接头蛋白(p62)表达水平及与线粒体共定位的量;Western blot法检测AMPKα及ULK1蛋白表达。结果与对照组比较,模型组股四头肌ATP、MMP下降(P<0.05,P<0.01);LC3B-II蛋白表达及与线粒体共定位增加(均P<0.01)、p62蛋白表达及与线粒体共定位减少(均P<0.01);p-AMPKα/AMPKα及p-ULK1/ULK1比值升高(均P<0.01)。结论 "脾气虚四肢不用"可能与AMPK/ULK1途径激活所致的线粒体自噬水平提高不足有关。 展开更多
关键词 脾气虚 股四头肌 线粒体自噬 微管相关蛋白1轻链3 选择性自噬接头蛋白 腺苷酸活化蛋白激酶 UNC-51-类似自噬激活激酶1
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自噬及自噬相关蛋白在帕金森病模型大鼠黑质纹状体中的表达及意义 被引量：16
10
作者 刘斌 孙静 +5 位作者 张晋霞 毛文静 马原源 吕超男 成晓华 毕树立 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 CAS 北大核心 2014年第3期187-191,共5页
目的观察自噬及自噬相关蛋白Beclin1及微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1light chain 3,MAPlLC3,简称LC3)在帕金森病(Parkinson disease,PD)模型大鼠黑质纹状体中的表达及变化,探讨自噬在PD发病中的作用。方法将90... 目的观察自噬及自噬相关蛋白Beclin1及微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1light chain 3,MAPlLC3,简称LC3)在帕金森病(Parkinson disease,PD)模型大鼠黑质纹状体中的表达及变化,探讨自噬在PD发病中的作用。方法将90只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、PD模型组(模型组),每组又分为模型制备后4d、8d两个亚组,每个亚组各15只。采用颈背部皮下注射鱼藤酮制作PD模型,透射电镜观察自噬体的形成,免疫组化法和Western blotting法检测黑质纹状体自噬相关蛋白Beclin1和LC3的表达水平。结果 (1)电子显微镜下PD模型组黑质纹状体中出现自噬体,呈圆形,大多位于细胞核旁,溶酶体数量增多。8d时,自噬体、溶酶体数量显著增多。(2)与正常组比较,假手术组黑质纹状体中Beclin1和LC3表达略增多,但差异无统计学意义(均P>0.05);与假手术组比较,模型组黑质纹状体Beclin1和LC3的表达明显增多(均P<0.01),8d高于4d,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论 PD模型大鼠黑质纹状体中自噬活性被激活,自噬可能参与了PD的发病过程。 展开更多
关键词 帕金森病 自噬 BECLIN 1 微管相关蛋白类 微管相关蛋白1轻链3
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Wortmannin通过抑制癫痫大鼠海马自噬活性发挥神经保护作用 被引量：16
11
作者 曹丽丽 董艳 +3 位作者 徐婧婧 林幽町 迟令懿 迟兆富 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1584-1588,共5页
目的:探讨癫痫大鼠海马自噬活性的变化及自噬抑制剂wortmannin(WM)对致痫大鼠海马神经元的保护作用。方法:实验大鼠分为对照组、致痫2 h、8 h、16 h、24 h、72 h组和WM干预组。应用HE染色和Nissl染色观察癫痫大鼠海马神经元损伤的变化... 目的:探讨癫痫大鼠海马自噬活性的变化及自噬抑制剂wortmannin(WM)对致痫大鼠海马神经元的保护作用。方法:实验大鼠分为对照组、致痫2 h、8 h、16 h、24 h、72 h组和WM干预组。应用HE染色和Nissl染色观察癫痫大鼠海马神经元损伤的变化。免疫印迹检测海马组织微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/LC3Ⅰ的比值作为自噬活性的指标。结果:LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值在大鼠癫痫发作2 h时开始升高,24 h达到高峰,持续升高至少72 h。致痫24 h时海马CA1区出现明显神经元损伤和丢失。WM干预组CA1区存活神经元数目(100.88±18.73)显著高于癫痫组(70.16±5.09)(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值低于癫痫组(P<0.05)。结论:癫痫发作导致的海马损伤时存在自噬激活现象;WM通过抑制自噬活性减轻癫痫发作所致的海马损伤,具有神经保护作用。 展开更多
关键词 癫痫 自吞噬作用 微管相关蛋白1轻链3 海马 WORTMANNIN
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艾灸对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞自噬功能的影响 被引量：15
12
作者 刘娜娜 贾学昭 +4 位作者 王茎 朱国旗 李丹 李庆羚 马强 《针刺研究》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期25-30,共6页
目的:观察艾灸对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心功能及自噬相关蛋白LC3、p62表达的影响,探讨艾灸防治CHF的可能机制。方法:SD大鼠随机分为正常组12只与造模组48只,采用腹腔注射盐酸多柔比星复制CHF模型,将建模成功的大鼠随机均分为模型组、艾... 目的:观察艾灸对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心功能及自噬相关蛋白LC3、p62表达的影响,探讨艾灸防治CHF的可能机制。方法:SD大鼠随机分为正常组12只与造模组48只,采用腹腔注射盐酸多柔比星复制CHF模型,将建模成功的大鼠随机均分为模型组、艾灸组、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、自噬激动剂雷帕霉素(RAPA)组。艾灸组用艾条温和灸双侧"肺俞""心俞"穴,每日1次,每次20min,治疗3周。3-MA组按15 mg/kg给予3-MA混悬液腹腔注射,每日1次,共3周。RAPA组按2mg/kg给予RAPA混悬液灌胃,每日1次,共3周。观察大鼠的一般情况及行为体征;心功能测量仪检测大鼠心率(HR)、心输出量(CO)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左室内压最大上升或下降速率(±dp/dtmax);HE染色法观察心肌病理变化;Western blot法检测心肌细胞自噬相关蛋白LC3及p62表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠心肌细胞出现肿胀、空泡,肌纤维断裂、溶解,排列紊乱;与模型组比较,艾灸组和3-MA组大鼠心肌细胞的数量正常,心肌纤维排列相对整齐,RAPA组心肌细胞出现肿胀、空泡,心肌纤维断裂、溶解,排列紊乱等状况。与正常组比较,模型组HR和LVEDP明显升高(P<0.01),CO、LVSP及±dp/dtmax明显下降(P<0.01),LC3-Ⅱ表达、LC3-Ⅱ/Ⅰ明显升高(P<0.01),而p62表达明显下降(P<0.01)。与模型组比较,艾灸组和3-MA组HR和LVEDP明显下降(P<0.05),CO、LVSP及±dp/dtmax明显升高(P<0.05),LC3-Ⅱ表达、LC3-Ⅱ/Ⅰ明显降低(P<0.01),p62表达明显升高(P<0.01),而RAPA组LC3-Ⅱ/Ⅰ明显升高(P<0.01),p62表达明显降低(P<0.01)。结论:艾灸可以改善CHF大鼠心肌损伤,其作用可能与降低心肌细胞LC3-Ⅱ/Ⅰ、升高p62蛋白表达水平,发挥类似于3-MA的自噬抑制作用,抑制心肌细胞过度自噬、减轻心肌损伤有关。 展开更多
关键词 艾灸 慢性心力衰竭 心肌细胞自噬 微管相关蛋白1轻链3 选择性自噬接头蛋白p62
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苍术挥发油对溃疡性结肠炎大鼠的改善作用 被引量：14
13
作者 刘晓兰 张永忠 +3 位作者 张俊玲 聂晓博 贾琳 刘会丽 《天津医药》 CAS 北大核心 2020年第10期956-960,共5页
目的研究苍术挥发油对溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠的改善作用。方法以5%的2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠建立UC大鼠模型。将模型大鼠按照随机数字表法分为模型组,阳性对照组(美沙拉嗪0.36 g/kg灌胃),低、中、高剂量苍术挥发油组(分别以1、2、4 g... 目的研究苍术挥发油对溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠的改善作用。方法以5%的2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠建立UC大鼠模型。将模型大鼠按照随机数字表法分为模型组,阳性对照组(美沙拉嗪0.36 g/kg灌胃),低、中、高剂量苍术挥发油组(分别以1、2、4 g/kg苍术挥发油灌胃),每组10只。另设空白对照组大鼠10只(灌胃等体积蒸馏水)。各组大鼠每日给药(或蒸馏水)1次,连续10 d。记录各组大鼠模型制备前、给药前和末次给药后的体质量变化。末次给药后,取大鼠结肠组织,HE染色观察结肠病理改变,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α含量;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qPCR)检测组织中自噬基因Beclin 1和P62 mRNA表达,Western blot法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白表达水平。结果与空白对照组相比,模型组给药后体质量下降,结肠黏膜上皮细胞脱落,隐窝扭曲或萎缩,炎症细胞浸润;结肠组织中IL-6和TNF-α含量升高,Beclin 1和P62 mRNA表达水平升高(P<0.05);LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达无明显变化(P>0.05)。与模型组相比,中、高剂量组和阳性对照组大鼠给药后体质量升高,结肠上皮细胞损伤减轻,结肠组织IL-6和TNF-α含量下降,LC3Ⅱ/Ⅰ表达升高;与模型组相比,高剂量组和阳性对照组Beclin 1和P62 mRNA表达明显升高(P<0.05)。低剂量组与模型组相比,各指标变化差异无统计学意义(P>0.05)。结论苍术挥发油能够改善UC模型大鼠结肠组织病理损伤,降低结肠组织IL-6、TNF-α含量,可能与上调Beclin1、P62 mRNA表达和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达量有关。 展开更多
关键词 结肠炎 溃疡性 大鼠 Sprague-Dawley 白细胞介素-6 肿瘤坏死因子-α Beclin-1蛋白 苍术挥发油 P62 微管相关蛋白1轻链3
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自噬在血管性痴呆发病中的作用研究 被引量：14
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作者 刘斌 唐静 +2 位作者 袁敏 毕树立 李世英 《临床神经病学杂志》 CAS 北大核心 2013年第6期424-429,共6页
目的研究自噬在血管性痴呆(VD)发病中的作用及自噬抑制剂对其的影响。方法 180只SD大鼠随机分为假手术组、VD组和自噬抑制剂干预组(自噬抑制剂组),每组又分为术后1、2、4、8、12周亚组。采用四血管阻断法制作VD大鼠模型,自噬抑制剂组大... 目的研究自噬在血管性痴呆(VD)发病中的作用及自噬抑制剂对其的影响。方法 180只SD大鼠随机分为假手术组、VD组和自噬抑制剂干预组(自噬抑制剂组),每组又分为术后1、2、4、8、12周亚组。采用四血管阻断法制作VD大鼠模型,自噬抑制剂组大鼠在术前1 h给予渥曼青霉素0.5 mg/kg腹腔注射。用Morris水迷宫试验检测大鼠的学习记忆能力;免疫组化SP法检测大鼠海马CA1区自噬相关蛋白Beclin-1、Cathepsin B的表达,Western-blotting法检测自噬活性微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ与Ⅰ的比值。结果与假手术组比较,VD组和自噬抑制剂组各亚组大鼠的学习、记忆能力明显降低;海马CA1区Beclin-1、Cathepsin B蛋白表达水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显升高(P<0.05～0.01),并均以术后第4周为最高。而自噬抑制剂组各亚组大鼠的学习、记忆能力明显好于,海马CA1区Beclin-1、Cathepsin B蛋白表达水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值明显低于VD组(P<0.05～0.01)。结论 VD大鼠的认知功能减退,海马自噬相关蛋白表达及自噬活性明显增高;自噬抑制剂对其有改善及抑制的效果。自噬在VD发病中起了重要的作用。 展开更多
关键词 血管性痴呆 自噬 自噬相关蛋白 微管相关蛋白1轻链3 自噬抑制剂
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急性胰腺炎患者血清IL-6、IL-10水平变化及其与淋巴细胞自噬凋亡的相关性 被引量：12
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作者 潘静 覃月秋 +6 位作者 徐晨阳 梁云轩 宋嗣恩 季科 杨复锵 周喜汉 黄赞松 《山东医药》 CAS 2019年第27期21-24,共4页
目的观察急性胰腺炎(AP)患者血清白细胞介素6(IL-6)、IL-10水平变化,探讨其与淋巴细胞自噬、凋亡的关系.方法73例AP患者中轻症急性胰腺炎(MAP,MAP组)25例、中度重症急性胰腺炎(MSAP,MSAP组)25例、重症急性胰腺炎(SAP,SAP组)23例,选择同... 目的观察急性胰腺炎(AP)患者血清白细胞介素6(IL-6)、IL-10水平变化,探讨其与淋巴细胞自噬、凋亡的关系.方法73例AP患者中轻症急性胰腺炎(MAP,MAP组)25例、中度重症急性胰腺炎(MSAP,MSAP组)25例、重症急性胰腺炎(SAP,SAP组)23例,选择同期健康体检者25例为对照组.AP患者入院24 h内采集外周血,对照组体检时采集外周血,ELISA法检测各组血清IL-6、IL-10、细胞自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)及凋亡相关因子半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3),流式细胞术测算各组淋巴细胞自噬率、凋亡率,Pearson相关分析法分析AP患者血清IL-6、IL-10水平与血清LC3、Caspase-3水平的相关性.结果①血清IL-6、IL-10水平:与对照组比较,MAP、MSAP、SAP组血清IL-6、IL-10水平升高(P均<0.05);与MAP组比较,MSAP组血清IL-6水平升高、IL-10水平降低(P均<0.05);与MSAP、MAP组比较,SAP组血清IL-6水平升高、IL-10水平降低(P均<0.05).②淋巴细胞自噬情况:与MSAP、MAP及对照组比较,SAP组血清LC3水平、淋巴细胞自噬率升高(P均<0.05);与MAP组、对照组比较,MSAP组血清LC3水平、淋巴细胞自噬率升高(P均<0.05).③淋巴细胞凋亡情况:与MSAP、MAP及对照组比较,SAP组血清Caspase-3水平、淋巴细胞凋亡率升高(P均<0.05);与MAP组及对照组比较,MSAP组血清Caspase-3水平、淋巴细胞凋亡率升高(P均<0.05).④AP患者血清IL-6、IL-10水平与血清LC3、Caspase-3水平的相关性:MSAP、SAP组患者血清IL-6水平与血清LC3、Caspase-3水平呈正相关(r分别为0.9904,0.9813,P均<0.05;r分别为0.9785,0.9870,P均<0.05),血清IL-10水平与血清LC3、Caspase-3水平呈正相关(r分别为0.9331,0.9732,P均<0.05;r=0.9878,0.8663,P均<0.05).结论AP患者血清IL-6、IL-10、LC3、Caspase-3水平均升高,MSAP、SAP患者淋巴细胞自噬、凋亡水平均升高.血清IL-6、IL-10水平与血清LC3、Caspase-3水平呈正相关.血清IL-6、IL-10可能通过促进AP患者淋巴细胞的自 展开更多
关键词 白细胞介素6 白细胞介素10 急性胰腺炎 微管相关蛋白1轻链3 半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3
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内质网应激及自噬相关蛋白在矽肺患者肺泡巨噬细胞中表达研究 被引量：12
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作者 韩亚凤 孙海霞 +7 位作者 王忠艳 范丽英 苗益辉 郭骏 陈适 陈刚 姚三巧 袁聚祥 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2015年第1期23-28,共6页
目的研究矽肺患者肺泡巨噬细胞(AM)内质网应激(ERS)和自噬相关蛋白的表达规律。方法采用单纯随机抽样方法,选择矽肺壹期、贰期、叁期男性患者20、28、22例分别设为矽肺壹期、贰期和叁期组,以6例诊断为观察对象的男性矽尘作业工人为对照... 目的研究矽肺患者肺泡巨噬细胞(AM)内质网应激(ERS)和自噬相关蛋白的表达规律。方法采用单纯随机抽样方法,选择矽肺壹期、贰期、叁期男性患者20、28、22例分别设为矽肺壹期、贰期和叁期组,以6例诊断为观察对象的男性矽尘作业工人为对照组。收集研究对象的支气管肺泡灌洗液,分离、纯化和培养AM,经裂解后提取蛋白,采用免疫印迹法检测AM中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、Beclin1和微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白的相对表达水平。结果矽肺壹期、贰期和叁期患者AM中GRP78、Beclin1和LC3的蛋白相对表达水平均高于对照组(P<0.05),矽肺贰期和叁期组患者上述3个指标均高于矽肺壹期组(P<0.05),矽肺叁期组患者AM中GRP78蛋白相对表达水平低于矽肺贰期组(P<0.05);矽肺叁期组患者AM中Beclin1和LC3的蛋白相对表达水平均高于矽肺贰期组,但差异均无统计学意义(P>0.05)。多重逐步线性回归分析结果显示,矽肺患者AM中GRP78、Beclin1和LC3的蛋白相对表达水平均与矽肺期别呈正相关(P<0.01)。结论不同期别矽肺患者AM中ERS和自噬的相关蛋白表达程度不同,AM的ERS和自噬在矽肺纤维化发生发展中可能发挥重要作用。 展开更多
关键词 矽肺 肺泡巨噬细胞 内质网应激 自噬 葡萄糖调节蛋白78 Beclin1 微管相关蛋白1轻链3
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胰胆舒胶囊联合亚胺培南西司他丁钠治疗急性重症胰腺炎的临床研究 被引量：11
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作者 刘飞 陈曦 +2 位作者 孙晓林 钱国武 刘驰 《现代药物与临床》 CAS 2021年第2期265-268,共4页
目的探讨胰胆舒胶囊联合亚胺培南西司他丁钠治疗急性重症胰腺炎的临床疗效。方法选取2019年3月—2020年4月在南阳市中心医院进行治疗的86例急性重症胰腺炎患者,根据就诊顺序分为对照组(43例)和治疗组(43例)。对照组静脉滴注注射用亚胺... 目的探讨胰胆舒胶囊联合亚胺培南西司他丁钠治疗急性重症胰腺炎的临床疗效。方法选取2019年3月—2020年4月在南阳市中心医院进行治疗的86例急性重症胰腺炎患者,根据就诊顺序分为对照组(43例)和治疗组(43例)。对照组静脉滴注注射用亚胺培南西司他丁钠,1.0g/次,同0.9%氯化钠注射液100mL配伍,每8小时1次;治疗组在对照组基础上口服胰胆舒胶囊,2g/次,3次/d。两组均经2周治疗后进行效果对比。观察两组的临床疗效,比较两组临床症状消失时间、血清学指标、肠道屏障功能指标。结果经治疗,对照组总有效率为81.40%,显著低于治疗组(97.67%,P<0.05)。经治疗,治疗组在口干、腹痛、恶心呕吐、痞满燥实、小便短赤等症状消失时间上均短于对照组(P<0.05)。经治疗,两组血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)、微管相关蛋白1轻链3(MAP1-LC3)、可溶性髓系细胞触发受体-1(s TREM-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、P物质、降钙素原(PCT)水平均较治疗前显著降低(P<0.05);治疗后,治疗组患者血清学指标低于对照组(P<0.05)。经治疗,两组血清淀粉酶(AMS)、二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸水平均较治疗前显著降低(P<0.05),并以治疗组降低更显著(P<0.05)。结论胰胆舒胶囊联合注射用亚胺培南西司他丁钠治疗急性重症胰腺炎患者具有较好的疗效,可有效改善患者临床症状,降低机体炎症反应,有利于机体肠道功能的恢复,有着良好临床应用价值。 展开更多
关键词 胰胆舒胶囊 注射用亚胺培南西司他丁钠 急性重症胰腺炎 超敏C反应蛋白 微管相关蛋白1轻链3 可溶性髓系细胞触发受体-1 肿瘤坏死因子-α 降钙素原
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自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤增强鼻咽癌细胞对放射和化学治疗的敏感性 被引量：11
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作者 宋乐乐 马琳艳 +4 位作者 陈根德 黄莹莹 孙小锦 蒋琛琛 刘浩 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期9-18,共10页
目的:探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)增强鼻咽癌细胞对放射治疗(放疗)和化学治疗(化疗)敏感性的作用及其相关的分子机制。方法:采用MTT法检测3-MA对细胞的增殖抑制作用;集落克隆形成法检测3-MA对细胞集落克隆形成的... 目的:探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)增强鼻咽癌细胞对放射治疗(放疗)和化学治疗(化疗)敏感性的作用及其相关的分子机制。方法:采用MTT法检测3-MA对细胞的增殖抑制作用;集落克隆形成法检测3-MA对细胞集落克隆形成的影响;Annexin V/PI双染法、线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)、DAPI染色检测细胞凋亡;Western印迹检测内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、自噬相关蛋白beclin1和微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)表达。结果:不同体积浓度或剂量的顺铂(cisplatin,DDP)、电离辐射(ionizing radiation,IR)、衣霉素(tunicamycin,TM)、3-MA对鼻咽癌细胞HONE-1均具有增殖抑制作用,且随着体积浓度或剂量的增加和作用时间的延长,对HONE-1细胞增殖抑制作用随之增加。经1.00 mmol/L 3-MA预处理细胞后,再次给予6.00 mol/L DDP,4.00 Gy IR,1.00 mol/L TM处理,细胞存活率明显降低,均低于单用组,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。3-MA增强DDP,IR,TM抑制细胞集落克隆形成作用。用6.00 mol/L DDP或4.00 Gy IR处理HONE-1细胞24 h后,细胞凋亡率分别为5.8%和6.7%,与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。JC-1和DAPI染色显示3-MA增强DDP,IR或TM诱导的细胞凋亡作用;Western印迹结果显示DDP,IR或TM处理组GRP78,beclin1表达呈时间依赖性上调,LC3 I向LC3 II转化,3-MA预处理组beclin1表达明显降低,LC3 I向LC3 II的转化。结论:自噬抑制剂3-MA可增强鼻咽癌细胞对放化疗的敏感性,其机制可能与3-MA抑制内质网应激诱导的自噬所产生的保护作用相关。 展开更多
关键词 鼻咽癌 顺铂 电离辐射 内质网应激 自噬 葡萄糖调节蛋白78 BECLIN1 微管相关蛋白1轻链3 衣霉素
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清热解毒方连花汤提取物诱导子宫内膜癌HEC-1A及Ishikawa细胞自噬的作用及其机制研究 被引量：11
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作者 包晓霞 唐瑶 +1 位作者 鲁周南 薛晓鸥 《中国妇产科临床杂志》 CSCD 北大核心 2018年第2期150-154,共5页
目的探讨清热解毒方连花汤（黄连15 g、白花蛇舌草15 g、半枝莲15 g、生黄芪20 g等）正丁醇和水提取物对人子宫内膜癌细胞系HEC-1A及Ishikawa作用12 h、24 h后自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（light chain 3,LC3）表达及其相关通路的... 目的探讨清热解毒方连花汤（黄连15 g、白花蛇舌草15 g、半枝莲15 g、生黄芪20 g等）正丁醇和水提取物对人子宫内膜癌细胞系HEC-1A及Ishikawa作用12 h、24 h后自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（light chain 3,LC3）表达及其相关通路的影响。方法采用Real-time PCR检测LC3mRNA;采用Westernbolt检测LC3蛋白;采用Phosflow（TM）检测雷帕霉素靶蛋白（MTOR）、蛋白激酶B（AKT）表达。结果与阴性对照组比较,正丁醇组12 h HEC-1A中LC3 mRNA升高但24 h下降,而LC3蛋白在12 h和24 h均下降,水提组则正好相反,雷帕霉素组LC3表达均下降,同时中药复方醇提和水提组AKT/mTOR通路均不同程度表达增加（P〈0.05）;而在Ishikawa中,与阴性对照组比较,三组处理后LC3 mRNA表达在12 h增加,除雷帕霉素组其余两组24 h均下降。醇提组12 h、水提组24 h、雷帕霉素组AKT/mTOR双表达与阴性对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论在HEC-1A中,连花汤正丁醇提取物与雷帕霉素作用类似,可能激活AKT/mTOR通路抑制细胞自噬;而在Ishikawa细胞中连花汤正丁醇组与水提组均通过激活AKT/mTOR通路自噬先增加后抑制,与雷帕霉素作用后自噬均增加不同。 展开更多
关键词 子宫内膜癌 连花汤 自噬相关蛋白 微管相关蛋白1轻链3
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血管性痴呆大鼠海马CA1区自噬及微管相关蛋白1轻链3的表达 被引量：11
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作者 刘斌 唐静 +1 位作者 袁敏 李世英 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期940-945,共6页
目的观察血管性痴呆(vascular dementia,VD)模型大鼠海马CA1区自噬及微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1light chain 3,MAP1LC3,LC3)的表达,探讨自噬在血管性痴呆发病中的可能作用。方法大鼠随机分为假手术组(sham组... 目的观察血管性痴呆(vascular dementia,VD)模型大鼠海马CA1区自噬及微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1light chain 3,MAP1LC3,LC3)的表达,探讨自噬在血管性痴呆发病中的可能作用。方法大鼠随机分为假手术组(sham组)、血管性痴呆模型组(VD组)和Wortmannin自噬抑制剂组(WM组),每组又随机分为模型制备后1、2、4、8、12周5个亚组。采用四血管阻断法制作血管性痴呆模型,Morris水迷宫法检测学习记忆能力,透射电镜观察自噬体的形成,蛋白质印迹法检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值作为自噬活性的指标。结果与假手术组相比,VD组大鼠平均逃避潜伏期延长(P<0.05或0.01),穿越平台次数减少(P<0.05或0.01);与VD组比较,WM组大鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05或0.01),穿越平台次数增加(P<0.05或0.01)。VD组大鼠海马CA1区1周时神经细胞核膜凹陷,胞核浓缩,线粒体肿胀,可见自噬体、溶酶体;4周时自噬体、溶酶体数量显著增多;12周时仍可见自噬体。WM组神经元损伤较VD组减轻,自噬体数量减少。VD组大鼠海马CA1区LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值在1周时升高,4周时达到高峰,8周时开始下降,12周时仍较高。WM组各时间点LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值较VD组低,差异有统计学意义(P<0.05或0.01)。结论血管性痴呆大鼠海马CA1区自噬活性被激活,可能参与了血管性痴呆的发生发展。 展开更多
关键词 血管性痴呆 海马 自噬 微管相关蛋白1轻链3
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