近年来,越来越多新的致病性呼吸道病毒被发现,给口岸检验检疫机构的预防和控制造了成极大困扰,建立甲型流感病毒(Influenza A virus,FluA)、乙型流感病毒(Influenza B virus,FluB)、副流感病毒(Human Parainfluenza virus,HPIV)、冠状病...近年来,越来越多新的致病性呼吸道病毒被发现,给口岸检验检疫机构的预防和控制造了成极大困扰,建立甲型流感病毒(Influenza A virus,FluA)、乙型流感病毒(Influenza B virus,FluB)、副流感病毒(Human Parainfluenza virus,HPIV)、冠状病毒(Coronavirus,Cov)、呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)、人偏肺病毒(Humanmetapneumovirus,HMPV)、人博卡病毒(Human bocavirus,Hbov)、腺病毒(Adenovirus,Adv)和鼻病毒(Rhinovirus,Rhv)9种呼吸道病原体微流体芯片检测体系。选择人β-actin基因作为靶基因设计内标引物探针,根据9种呼吸道病原体基因组的保守区设计相应的引物探针;在Ultra Fast Labchip Real-time PCR V280平台上,筛选合适的RT-PCR Master Mix;对扩增体系中引物探针浓度进行优化,用优化后的扩增体系进行灵敏度和特异性验证;用100例临床标本进行回顾性检测。选出具有快速扩增性能的RT-PCR Master Mix,优化后病原体上游引物、下游引物和探针终浓度分别为500nmol/L、500nmol/L和250nmol/L,内标基因上游引物、下游引物和探针终浓度均为300nmol/L、300nmol/L和150nmol/L;在此扩增体系下,9种呼吸道病毒的最低检测限均为1.0×10^3拷贝/mL,不同病毒无交叉反应,对100例临床样本检测,准确率100%。因此,本研究建立了一种可同时用于9种呼吸道病毒快速检测的微流体芯片扩增体系,采用本检测体系可在25min内实现上述9种病毒核酸定性检测。展开更多
