目的探讨微小RNA\|24(miR-24)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的HLE-B3细胞凋亡的影响,分析其与线粒体中第二个线粒体衍生的胱天蛋白酶激活因子/低等电位点的凋亡抑制蛋白的直接结合蛋白(the second mitochondria-derived activator of casp...目的探讨微小RNA\|24(miR-24)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的HLE-B3细胞凋亡的影响,分析其与线粒体中第二个线粒体衍生的胱天蛋白酶激活因子/低等电位点的凋亡抑制蛋白的直接结合蛋白(the second mitochondria-derived activator of caspase/direct IAP-binding protein with low PI,Smac/Diablo)-XIAP-caspase-9/3凋亡途径的关系。方法将HLE-B3细胞分为对照组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+miR-24 NC组和H_(2)O_(2)+miR-24抑制剂组。先按照miR-24抑制剂、miR-24 NC试剂盒说明书转染H_(2)O_(2)+miR-24抑制剂组和H_(2)O_(2)+miR-24 NC组细胞24 h,然后向H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+miR-24 NC组和H_(2)O_(2)+miR-24抑制剂组HLE-B3细胞中加入200μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)干预24 h,收集细胞用于后续实验;将正常培养的HLE-B3细胞设置为对照组。采用实时荧光定量PCR检测各组HLE-B3细胞miR-24表达情况,CCK-8法检测各组HLE-B3细胞生长情况,用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,计算各组细胞存活率和细胞凋亡率。采用荧光探针JC-1法检测线粒体膜电位变化情况(利用红绿荧光强度比反映线粒体膜电位);采用蛋白免疫印迹法检测各组HLE-B3细胞线粒体和细胞质分级中Smac/Diablo及细胞质分级中XIAP、caspase-9和caspase-3蛋白表达情况。对所得数据进行统计学分析。结果当H_(2)O_(2)浓度大于200μmol·L^(-1)时,细胞存活率均小于50%,本实验以200μmol·L^(-1)作为最适H_(2)O_(2)浓度。对照组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+miR-24 NC组和H_(2)O_(2)+miR-24抑制剂组细胞miR-24相对表达量分别为1.04±0.02、2.73±0.09、2.69±0.07和1.15±0.06;与对照组相比,H_(2)O_(2)组细胞中miR-24表达升高(P<0.05);与H_(2)O_(2)组和H_(2)O_(2)+miR-24 NC组相比,H_(2)O_(2)+miR-24抑制剂组中miR-24表达降低(均为P<0.05),但H_(2)O_(2)组与H_(2)O_(2)+miR-24 NC组中miR-24表达差异无统计学意义(P>0.05)。与H_(2)O_(2)组和H_(2)O_(2)+miR-24 NC组相比,H_(2)O_(2)+miR-24抑制剂组细胞存活率显著�展开更多