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人软骨肉瘤中miR-140-5p靶基因预测验证及对靶基因表达的调控作用观察 被引量：1
1
作者 李竟源 许凯 +6 位作者 刘时璋 刘宗智 易智 杜青芳 王坤正 李建辉 祖超 《山东医药》 CAS 2019年第6期13-16,共4页
目的预测并验证人软骨肉瘤中miR-140-5p的靶基因,观察人软骨肉瘤中miR-140-5p对靶基因的调控作用。方法①miR-140-5p在人软骨肉瘤中的靶基因预测及验证:采用microRNA. org软件检索miR-140-5p序列,miRBase、miRWalk靶基因预测分析数据库... 目的预测并验证人软骨肉瘤中miR-140-5p的靶基因,观察人软骨肉瘤中miR-140-5p对靶基因的调控作用。方法①miR-140-5p在人软骨肉瘤中的靶基因预测及验证:采用microRNA. org软件检索miR-140-5p序列,miRBase、miRWalk靶基因预测分析数据库预测miR-140-5p在人软骨肉瘤中的靶基因,认为miR-140-5p在人软骨肉瘤中的靶基因可能为葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)。通过NCBI Gen Bank检索GLUT-1 3'UTR序列。构建野生型(WT,正常表达)、突变型(MUT,抑制表达) GLUT-1 3'UTR双荧光素酶报告载体。取人胚肾细胞HEK 293T分为A、B组,分别转染miR-140-5p mimics(促进miR-140-5p表达)+WT型GLUT-1 3'UTR荧光素报告载体、miR-140-5p mimics+MUT型GLUT-1 3'UTR荧光素报告载体,利用荧光素酶活性检测试剂盒测算萤火虫荧光素酶相对活性。②转染miR-140-5p对人软骨肉瘤细胞株JJ012的GLUT-1 mRNA及蛋白表达影响:取对数生长期JJ012细胞分为观察组、对照组,分别转染miR-140-5p mimics、NC mimics(空白无意义),转染24 h时采用qRT-PCR法检测两组细胞GLUT-1 mRNA,采用Western blotting法检测两组细胞GLUT-1蛋白。结果①miR-140-5p在人软骨肉瘤中的直接靶基因可能为GLUT-1。A、B组荧光素酶活性分别为0. 37±0. 03、0. 93±0. 01,二者比较,P <0. 05。②观察组、对照组细胞GLUT-1 mRNA相对表达量分别为0. 31±0. 10、0. 95±0. 06,二者比较,P <0. 05。观察组、对照组细胞GLUT-1蛋白相对表达量分别为0. 42±0. 13、0. 93±0. 07,二者比较,P <0. 05。结论 miR-140-5p在人软骨肉瘤中的靶基因可能为GLUT-1。miR-140-5p主要通过靶向结合GLUT-1 3'UTR区域进行mRNA转录后调控。miR-140-5p主要通过直接靶向作用于GLUT-1 3'UTR进而抑制蛋白翻译过程。 展开更多
关键词 微小rna-140-5p 微小rna-140-5p靶基因 葡萄糖转运蛋白1基因 葡萄糖转运蛋白1 软骨肉瘤
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