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兔源强毒力金黄色葡萄球菌荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:4
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作者 王锦祥 林松华 +4 位作者 陈冬金 孙世坤 陈岩锋 桑雷 谢喜平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期297-302,共6页
为了建立一种快速、特异性强且敏感性高的兔源强毒力金黄色葡萄球菌检测方法,本试验根据金黄色葡萄球菌pvl基因的保守序列设计了特异性的引物和探针,通过反应条件的优化,建立了检测兔源强毒力金黄色葡萄球菌的荧光定量PCR检测方法。结... 为了建立一种快速、特异性强且敏感性高的兔源强毒力金黄色葡萄球菌检测方法,本试验根据金黄色葡萄球菌pvl基因的保守序列设计了特异性的引物和探针,通过反应条件的优化,建立了检测兔源强毒力金黄色葡萄球菌的荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法耗时短,仅需约50 min就能完成检测,较已报道的双重PCR方法和环介导等温扩增方法均省时;该方法特异性强,对兔源低毒力金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌、肺炎克雷伯菌、魏氏梭菌、大肠杆菌和阴性对照(灭菌ddH2O)均无交叉反应;该方法敏感性高,最低检测限为10拷贝/μL,分别是已报道的双重PCR方法和环介导等温扩增方法的1000倍和10倍。此外,该方法重复性好,批内和批间重复性试验的变异系数均小于2%。应用该方法检测126份已知结果的临床样品,检测结果与已知结果、已报道的双重PCR方法和环介导等温扩增方法的检测结果完全一致。该方法的建立不仅丰富了兔源强毒力金黄色葡萄球菌的检测方法,也为该菌的快速检测提供了更有力的技术支持。 展开更多
关键词 毒力金黄色葡萄球菌 PVL基因 荧光定量PCR检测方法
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兔源强毒力金黄色葡萄球菌环介导等温扩增快速检测方法的建立 被引量:2
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作者 王锦祥 孙世坤 +3 位作者 陈岩峰 陈冬金 桑雷 谢喜平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期621-625,共5页
为建立检测兔源强毒力金黄色葡萄球菌的快速检测方法,本实验根据GenBank中登录的金黄色葡萄球菌pvl基因保守序列设计了2对引物,经反应条件优化,建立了检测兔源强毒力金黄色葡萄球菌的环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法。结果显示,该LAM... 为建立检测兔源强毒力金黄色葡萄球菌的快速检测方法,本实验根据GenBank中登录的金黄色葡萄球菌pvl基因保守序列设计了2对引物,经反应条件优化,建立了检测兔源强毒力金黄色葡萄球菌的环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法。结果显示,该LAMP快速检测方法最优反应条件为:外引物和内引物的浓度比为1.7,反应温度为65℃,反应时间为60 min。利用细菌基因组DNA提取试剂盒提取兔源强毒力金黄色葡萄球菌、低毒力金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌、肺炎克雷伯菌和大肠杆菌DNA,利用该方法检测,结果显示仅兔源强毒力金黄色葡萄球菌检测为阳性结果,其他均为阴性,无交叉反应,该方法特异性较强;将兔源强毒力金黄色葡萄球菌基因组DNA的浓度设置为1×10^(8)拷贝/μL~1×10^(0)拷贝/μL,利用本研究建立的方法检测,结果显示对兔源强毒力金黄色葡萄球菌基因组DNA的最低检出限为1×10^(2)拷贝/μL,其敏感性为双重PCR方法的100倍,敏感性高;利用该方法进行批内和批间重复性试验,结果均一致,重复性较好。利用该方法检测88份临床样品,结果显示与已报道的双重PCR方法检测结果的符合率为100%。本研究在国内首次建立了兔源强毒力金黄色葡萄球菌LAMP方法,为该病原的快速检测提供了有效的技术手段。 展开更多
关键词 毒力金黄色葡萄球菌 PVL基因 LAMP检测方法
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