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DOP-PCR阴性对照中的产物分析及引物浓度的优化
被引量:
3
1
作者
张伟伟
张衍梅
+3 位作者
赵刚
陈戟
刘江东
余其兴
《武汉大学学报(理学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期220-224,共5页
由于在DOP-PCR实验过程中,通常的防污染措施和对反应体系及条件的优化都无法完全消除阴性对照中出现的扩增产物,因此本研究对上述扩增产物进行了纯化、克隆和测序,发现该产物并非污染所致,而是由于引物自身的兼并性,序列相互配对而产生...
由于在DOP-PCR实验过程中,通常的防污染措施和对反应体系及条件的优化都无法完全消除阴性对照中出现的扩增产物,因此本研究对上述扩增产物进行了纯化、克隆和测序,发现该产物并非污染所致,而是由于引物自身的兼并性,序列相互配对而产生的引物多聚体;并且还对与该扩增产物产量密切相关的引物浓度进行了优化探讨,实验结果表明2.2μmol/L是减少该产物产量的比较理想的引物浓度.
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关键词
DOP-PCR
引物
多聚
体
优化
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职称材料
单链环状DNA添加剂抑制基因表达序列分析Ditag聚合酶链反应引物多聚体生成
2
作者
刘玉慧
刘星
+1 位作者
刘学东
郑冬
《安徽农业科学》
CAS
2014年第15期4576-4578,4601,共4页
[目的]研究利用单链环状DNA抑制聚合酶链反应(PCR)副产物的作用效果。[方法]设计并合成单链环状DNA,并以具同样序列发卡状结构的单链DNA为对照组,在基因表达序列分析(SAGE)Ditag PCR反应中加入上述不同浓度的DNA,利用电泳技术检测...
[目的]研究利用单链环状DNA抑制聚合酶链反应(PCR)副产物的作用效果。[方法]设计并合成单链环状DNA,并以具同样序列发卡状结构的单链DNA为对照组,在基因表达序列分析(SAGE)Ditag PCR反应中加入上述不同浓度的DNA,利用电泳技术检测不同结构(环状/单链)以及不同浓度单链DNA对PCR多聚体附产物的抑制作用。[结果]发卡状结构的单链DNA无法抑制PCR引物多聚体副产物的产生;而在70~150 nmol/L终浓度范围内,单链环状DNA可以抑制SAGE Ditag PCR反应中引物多聚体的生成,并且不影响SAGE不同tag间的表达丰度差异。[结论]单链环状DNA可以作为PCR反应中引物多聚体生成的有效抑制剂。
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关键词
单链环状DNA(sscDNA)
系列基因表达分析(SAGE)
引物
多聚
体
抑制
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职称材料
题名
DOP-PCR阴性对照中的产物分析及引物浓度的优化
被引量:
3
1
作者
张伟伟
张衍梅
赵刚
陈戟
刘江东
余其兴
机构
武汉大学生命科学学院
出处
《武汉大学学报(理学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期220-224,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(30370772
30400044)
文摘
由于在DOP-PCR实验过程中,通常的防污染措施和对反应体系及条件的优化都无法完全消除阴性对照中出现的扩增产物,因此本研究对上述扩增产物进行了纯化、克隆和测序,发现该产物并非污染所致,而是由于引物自身的兼并性,序列相互配对而产生的引物多聚体;并且还对与该扩增产物产量密切相关的引物浓度进行了优化探讨,实验结果表明2.2μmol/L是减少该产物产量的比较理想的引物浓度.
关键词
DOP-PCR
引物
多聚
体
优化
Keywords
DOP-PCR
primer polymer
optimization
分类号
Q343 [生物学—遗传学]
下载PDF
职称材料
题名
单链环状DNA添加剂抑制基因表达序列分析Ditag聚合酶链反应引物多聚体生成
2
作者
刘玉慧
刘星
刘学东
郑冬
机构
东北林业大学
出处
《安徽农业科学》
CAS
2014年第15期4576-4578,4601,共4页
基金
黑龙江省博士后科研启动资助金(项目编号:LBH-Q07009)
中央高校基本科研业务费专项资金(项目编号:2572014EA05)
文摘
[目的]研究利用单链环状DNA抑制聚合酶链反应(PCR)副产物的作用效果。[方法]设计并合成单链环状DNA,并以具同样序列发卡状结构的单链DNA为对照组,在基因表达序列分析(SAGE)Ditag PCR反应中加入上述不同浓度的DNA,利用电泳技术检测不同结构(环状/单链)以及不同浓度单链DNA对PCR多聚体附产物的抑制作用。[结果]发卡状结构的单链DNA无法抑制PCR引物多聚体副产物的产生;而在70~150 nmol/L终浓度范围内,单链环状DNA可以抑制SAGE Ditag PCR反应中引物多聚体的生成,并且不影响SAGE不同tag间的表达丰度差异。[结论]单链环状DNA可以作为PCR反应中引物多聚体生成的有效抑制剂。
关键词
单链环状DNA(sscDNA)
系列基因表达分析(SAGE)
引物
多聚
体
抑制
Keywords
Single strand circular DNA(sscDNA)
Serial analysis of gene expression(SAGE)
Primer polymers
Inhibition
分类号
S188 [农业科学—农业基础科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
DOP-PCR阴性对照中的产物分析及引物浓度的优化
张伟伟
张衍梅
赵刚
陈戟
刘江东
余其兴
《武汉大学学报(理学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2006
3
下载PDF
职称材料
2
单链环状DNA添加剂抑制基因表达序列分析Ditag聚合酶链反应引物多聚体生成
刘玉慧
刘星
刘学东
郑冬
《安徽农业科学》
CAS
2014
0
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职称材料
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