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基于光镜表型的促神经元亚型分化药物初筛法
被引量：
2
1
作者
高益宁
王丹音
+4 位作者
潘宗富
梅宇钦
王志强
朱丹雁
楼宜嘉
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第4期373-380,共8页
目的:建立基于光镜表型的促胚胎干(embryonic stem,ES)细胞神经元亚型分化药物筛选法,供早期发现促神经再生药初筛用。方法:采用悬滴培养4-/4+法,形成拟胚体,继而贴壁培养向神经细胞分化,光镜确认表型呈神经元样的基础上进一步评价各类...
目的:建立基于光镜表型的促胚胎干(embryonic stem,ES)细胞神经元亚型分化药物筛选法,供早期发现促神经再生药初筛用。方法:采用悬滴培养4-/4+法,形成拟胚体,继而贴壁培养向神经细胞分化,光镜确认表型呈神经元样的基础上进一步评价各类亚型。以10-7mol/L异补骨脂甲素(Isobavachin,IBA)和10-6mol/L淫羊藿苷(Icariin,ICA)为例,分化终点以光镜下轴突为胞体三倍长以上者为神经元样细胞,继续以免疫荧光成像法确认神经元(β-tubulinⅢ阳染),并进一步以特异性抗体(ChAT、GABA)阳染共定位鉴别相应神经元亚型。结果:基于光镜表型评价,在分化终点即可剔除轴突分化不全的细胞,取代了以往免疫荧光成像所需的人力、物力与时间;并避免进一步ELISA或流式细胞术评价的假阳性。光镜显示IBA处理者大部分显示神经元样表型,而ICA处理的细胞却不然,免疫荧光成像结果与此相一致。因此,仅对IBA处理的神经元做亚型鉴定,显示胆碱能神经元以及γ-氨基丁酸能神经元亚型。结论:基于光镜表型的促神经元分化初筛法在化合物促神经元亚型分化上具有简便易行、节约物力与时间,避免假阳性的独到之处;经该法初筛后供后续研究,可见IBA具有促胆碱能和γ-氨基丁酸能神经元分化活性。
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关键词
胚胎干细胞
神经元/细胞学
神经元表型
异
补骨脂
甲
素
淫羊藿苷
乙酰胆碱能神经元
Γ-氨基丁酸能神经元
下载PDF
职称材料
异补骨脂甲素调控miR-124对小鼠胚胎干细胞向神经细胞分化的影响
被引量：
1
2
作者
王贝
袁晨燕
姚瑞芹
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第12期1110-1116,共7页
目的探讨异补骨脂甲素(isobavachin,IBA)调控微小RNA-124(miR-124)对小鼠J1胚胎干细胞向神经细胞分化的影响。方法采用qRT-PCR和免疫荧光染色分别检测IBA干预或抑制miR-124表达的J1细胞中miR-124、八聚体转录因子4(octamer transcriptio...
目的探讨异补骨脂甲素(isobavachin,IBA)调控微小RNA-124(miR-124)对小鼠J1胚胎干细胞向神经细胞分化的影响。方法采用qRT-PCR和免疫荧光染色分别检测IBA干预或抑制miR-124表达的J1细胞中miR-124、八聚体转录因子4(octamer transcription factor-4,OCT4)和神经微丝H(neurofilament-H, NFH)的表达。使用Targetscan在线预测、双荧光素酶报告基因和Western blot实验验证miR-124和锌指蛋白18(zinc finger and BTB domain containing 18, ZBTB18)的靶向关系。在J1细胞中转染pcDNA-ZBTB18或miR-124 mimics、ZBTB18 shRNA,免疫荧光染色检测细胞中OCT4和NFH的表达。结果 IBA可显著抑制J1细胞中OCT4蛋白表达,并上调miR-124和NFH表达;而抑制miR-124表达后所得结果相反。miR-124可靶向调控ZBTB18蛋白表达。在J1细胞中过表达ZBTB18,OCT4阳性表达率升高而NFH阳性表达率降低;敲减ZBTB18可在一定程度上减弱miR-124对IBA干预J1细胞OCT4和NFH表达的促进或抑制作用。结论 IBA能够促进J1细胞中miR-124表达,而miR-124可靶向调控ZBTB18,从而调节OCT4和NFH蛋白表达,这可能是IBA促进小鼠胚胎干细胞分化为神经细胞的作用机制。
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关键词
异
补骨脂
甲
素
微小RNA-124
锌指蛋白18
小鼠胚胎干细胞
神经细胞
细胞分化
下载PDF
职称材料
题名
基于光镜表型的促神经元亚型分化药物初筛法
被引量：
2
1
作者
高益宁
王丹音
潘宗富
梅宇钦
王志强
朱丹雁
楼宜嘉
机构
浙江大学药学院药理毒理与生化药学研究所
浙江大学医学院附属第二医院药剂科
出处
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第4期373-380,共8页
基金
国家自然科学基金资助项目(81173135
30973600
+2 种基金
90813026)
浙江省重点科技创新团队基金(2010R50047)
浙江省自然科学基金重点项目(LZ12H31001)
文摘
目的:建立基于光镜表型的促胚胎干(embryonic stem,ES)细胞神经元亚型分化药物筛选法,供早期发现促神经再生药初筛用。方法:采用悬滴培养4-/4+法,形成拟胚体,继而贴壁培养向神经细胞分化,光镜确认表型呈神经元样的基础上进一步评价各类亚型。以10-7mol/L异补骨脂甲素(Isobavachin,IBA)和10-6mol/L淫羊藿苷(Icariin,ICA)为例,分化终点以光镜下轴突为胞体三倍长以上者为神经元样细胞,继续以免疫荧光成像法确认神经元(β-tubulinⅢ阳染),并进一步以特异性抗体(ChAT、GABA)阳染共定位鉴别相应神经元亚型。结果:基于光镜表型评价,在分化终点即可剔除轴突分化不全的细胞,取代了以往免疫荧光成像所需的人力、物力与时间;并避免进一步ELISA或流式细胞术评价的假阳性。光镜显示IBA处理者大部分显示神经元样表型,而ICA处理的细胞却不然,免疫荧光成像结果与此相一致。因此,仅对IBA处理的神经元做亚型鉴定,显示胆碱能神经元以及γ-氨基丁酸能神经元亚型。结论:基于光镜表型的促神经元分化初筛法在化合物促神经元亚型分化上具有简便易行、节约物力与时间,避免假阳性的独到之处;经该法初筛后供后续研究,可见IBA具有促胆碱能和γ-氨基丁酸能神经元分化活性。
关键词
胚胎干细胞
神经元/细胞学
神经元表型
异
补骨脂
甲
素
淫羊藿苷
乙酰胆碱能神经元
Γ-氨基丁酸能神经元
Keywords
Embryonic stem cells
Neurons/cytol
Neuron phenotype
Isobavachin
Icariin
cholinergic neurons
GABAergic neurons
分类号
R96 [医药卫生—药理学]
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职称材料
题名
异补骨脂甲素调控miR-124对小鼠胚胎干细胞向神经细胞分化的影响
被引量：
1
2
作者
王贝
袁晨燕
姚瑞芹
机构
东南大学附属中大医院检验科
徐州医科大学生物学教研室
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第12期1110-1116,共7页
文摘
目的探讨异补骨脂甲素(isobavachin,IBA)调控微小RNA-124(miR-124)对小鼠J1胚胎干细胞向神经细胞分化的影响。方法采用qRT-PCR和免疫荧光染色分别检测IBA干预或抑制miR-124表达的J1细胞中miR-124、八聚体转录因子4(octamer transcription factor-4,OCT4)和神经微丝H(neurofilament-H, NFH)的表达。使用Targetscan在线预测、双荧光素酶报告基因和Western blot实验验证miR-124和锌指蛋白18(zinc finger and BTB domain containing 18, ZBTB18)的靶向关系。在J1细胞中转染pcDNA-ZBTB18或miR-124 mimics、ZBTB18 shRNA,免疫荧光染色检测细胞中OCT4和NFH的表达。结果 IBA可显著抑制J1细胞中OCT4蛋白表达,并上调miR-124和NFH表达;而抑制miR-124表达后所得结果相反。miR-124可靶向调控ZBTB18蛋白表达。在J1细胞中过表达ZBTB18,OCT4阳性表达率升高而NFH阳性表达率降低;敲减ZBTB18可在一定程度上减弱miR-124对IBA干预J1细胞OCT4和NFH表达的促进或抑制作用。结论 IBA能够促进J1细胞中miR-124表达,而miR-124可靶向调控ZBTB18,从而调节OCT4和NFH蛋白表达,这可能是IBA促进小鼠胚胎干细胞分化为神经细胞的作用机制。
关键词
异
补骨脂
甲
素
微小RNA-124
锌指蛋白18
小鼠胚胎干细胞
神经细胞
细胞分化
Keywords
isobavachin
microRNA-124
zinc finger and BTB domain containing 18
mouse embryonic stem cells
neurons
cell differentiation
分类号
R322.8 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
R329.21 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于光镜表型的促神经元亚型分化药物初筛法
高益宁
王丹音
潘宗富
梅宇钦
王志强
朱丹雁
楼宜嘉
《浙江大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2012
2
下载PDF
职称材料
2
异补骨脂甲素调控miR-124对小鼠胚胎干细胞向神经细胞分化的影响
王贝
袁晨燕
姚瑞芹
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
1
下载PDF
职称材料
已选择
0
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