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平榛主要过敏原一个片段区基因的克隆表达及免疫鉴定
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作者 李娜 胡东生 +3 位作者 刘志刚 林斯里 罗新萍 黄钟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期4-6,共3页
目的:克隆表达平榛(Corh)主要过敏原Corh1的一个片段区基因,并纯化表达的蛋白及检测其免疫学活性。方法:采用生物信息学方法选取Corh1的主要抗原表位区,设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT-PCR方法扩增目的基因,将其导入pMD18-T载体... 目的:克隆表达平榛(Corh)主要过敏原Corh1的一个片段区基因,并纯化表达的蛋白及检测其免疫学活性。方法:采用生物信息学方法选取Corh1的主要抗原表位区,设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT-PCR方法扩增目的基因,将其导入pMD18-T载体中测序。将测序正确的质粒双酶切,并将获得的片段基因导入pET-32a中表达。通过Ni2+亲和层析柱纯化重组蛋白,采用Westernblot方法检测其IgE结合活性。结果:克隆并获得了Corh1的主要表位区基因,基因开放阅读框为243个碱基,编码81个氨基酸,蛋白相对分子质量(Mr)约为9000。表达的蛋白以可溶性为主,纯化出的蛋白有较好的免疫原性。结论:成功地克隆表达了Corh1的主要表位区基因,蛋白具有良好的免疫学活性。 展开更多
关键词 平榛主要过敏原 Corh1 抗原表位 克隆表达
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