重组腺病毒Ad-绿色荧光蛋白／干细胞白血病基因的构建及在Cajal间质细胞缺失模型鼠体内的分布和表达 被引量：6

1

作者 张林 刘宝华 +1 位作者 童卫东 李春穴 《中华胃肠外科杂志》 CAS 2007年第2期119-123,共5页

目的研究绿色荧光蛋白（cFP）标记的人干细胞自血病基因（SCL）重组腺病毒载体的快速构建及在Cajal间质细胞（ICC）缺失模型鼠体内的分布和表达，为进一步研究慢传输型便秘（STC）的基因治疗奠定基础。方法利用Ad-Easy系统、细菌内同源... 目的研究绿色荧光蛋白（cFP）标记的人干细胞自血病基因（SCL）重组腺病毒载体的快速构建及在Cajal间质细胞（ICC）缺失模型鼠体内的分布和表达，为进一步研究慢传输型便秘（STC）的基因治疗奠定基础。方法利用Ad-Easy系统、细菌内同源重组法快速构建重组腺病毒Ad-GFP／SCL。经尾静脉注射1．6×10^9PFU的重组腺病毒给ICC缺失模型Balb／c小鼠，在不同的时相点检测重组腺病毒在小鼠心、肺、肝、脾、肾、小肠及结直肠组织内的分布和表达；苏木精-伊红染色法观察重组腺病毒的体内毒性；RT-PCR法分析重组腺病毒介导的SCLmRNA在各脏器内的表达。结果通过荧光显微镜观察，在不同时期可以观察到小鼠心、肺、肝、脾、肾、小肠及结直肠组织内有不同程度的GFP表达：苏木精．伊红染色法显示各脏器未见明显毒性反应；RT-PCR法分析显示各脏器均有不同程度的SCLmRNA表达。结论成功构建的重组腺病毒Ad-GFP／SCL可介导SCL基因在ICC缺失模型Balb／c小鼠体内安全、稳定地表达，为进一步在体研究STC的基因治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 便秘 慢传输型 腺病毒载体 基因 干细胞白血病 基因疗法 同源重组 CAJAL间质细胞

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经尿道灌注干细胞白血病基因慢病毒转染豚鼠糖尿病膀胱病变的效果研究 被引量：5

2

作者 魏艳青 马路平 +2 位作者 王江平 钱彪 王勤章 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第33期4079-4082,共4页

目的 制备糖尿病膀胱病变（DCP）豚鼠模型,经尿道灌注干细胞白血病（SCL）基因慢病毒,观察其转染效果及稳定性。方法 2014年11月—2015年6月,采用随机数字表法在75只普通级荷兰种雄性豚鼠中选取60只单次腹腔注射链脲佐菌素（200 mg/kg）... 目的 制备糖尿病膀胱病变（DCP）豚鼠模型,经尿道灌注干细胞白血病（SCL）基因慢病毒,观察其转染效果及稳定性。方法 2014年11月—2015年6月,采用随机数字表法在75只普通级荷兰种雄性豚鼠中选取60只单次腹腔注射链脲佐菌素（200 mg/kg）,常规饲养6周后按血糖水平〉11.1 mmol/L筛选糖尿病模型,再常规饲养4周后通过尿流动力学检测仪筛选DCP模型;另15只作为对照组,单次注射配制的链脲佐菌素缓冲液,饲养时间相同。采用随机数字表法从成功造模的DCP模型中选取15只后,再采用随机数字表法分为Ⅰ组（3只）和实验组（12只）,Ⅰ组不予处理,实验组经尿道分2次灌注SCL基因慢病毒（1.6×10^7TU）,于2次灌注结束后第2、7、14、28天分别采用颈椎脱臼法处死实验组豚鼠3只,记为Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组,Ⅰ组与Ⅱ组一同处死,取膀胱组织冷冻于液氮中,甘油封固后激光共聚焦显微镜下观察组织中绿色荧光分布情况。采用qRT-PCR检测SCL mRNA表达水平。结果 DCP模型造模过程中,糖尿病模型筛选时弃去18只,尿流动力学检测仪筛选时弃去19只,最终得到DCP模型豚鼠23只,记为DCP模型组。DCP模型组豚鼠最大逼尿肌压低于对照组,最大膀胱容量大于对照组（P〈0.01）。Ⅰ组豚鼠膀胱组织未见绿色荧光分布,Ⅱ组豚鼠膀胱组织绿色荧光不明显,Ⅲ组豚鼠膀胱组织可见全层遍布极强绿色荧光,Ⅳ组豚鼠膀胱组织可见全层强绿色荧光,Ⅴ组豚鼠膀胱组织仍可见绿色荧光存在。Ⅰ组豚鼠膀胱组织SCL mRNA表达水平为（1.00±0.00）,Ⅱ组豚鼠膀胱组织SCL mRNA表达水平是Ⅰ组的（1.22±0.06）倍,Ⅲ组豚鼠膀胱组织SCL mRNA表达水平是Ⅰ组的（50.45±3.17）倍,Ⅳ组豚鼠膀胱组织SCL mRNA表达水平是Ⅰ组的（24.75±6.49）倍,Ⅴ组豚鼠膀胱组织SCL mRNA表达水平是Ⅰ组的（3.27±1.00）倍。结论 SCL基因慢病毒载体转染豚鼠DCP膀胱成功,并� 展开更多

关键词 糖尿病并发症 膀胱疾病 慢病毒感染 干细胞白血病

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8p11骨髓增殖综合征的临床病理学特征 被引量：3

3

作者 闫真 杨波 +4 位作者 王全顺 王莉莉 韩晓苹 任芳 于力 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2010年第5期1321-1326,共6页

本研究旨在提高对罕见的8p11骨髓增殖综合征(eight p11myeloproliferative syndrome,EMS)的临床病理特征、诊断与治疗的认识。应用骨髓细胞涂片、骨髓活检观察细胞形态学改变,流式细胞术检测骨髓细胞的免疫表型,细胞遗传学方法分析骨髓... 本研究旨在提高对罕见的8p11骨髓增殖综合征(eight p11myeloproliferative syndrome,EMS)的临床病理特征、诊断与治疗的认识。应用骨髓细胞涂片、骨髓活检观察细胞形态学改变,流式细胞术检测骨髓细胞的免疫表型,细胞遗传学方法分析骨髓细胞核型,分子生物学检测bcr/abl融合基因。结果表明:EMS是一组具有独特临床和生物学特点的疾病,以bcr/abl阴性的骨髓增殖性肿瘤合并淋巴母细胞淋巴瘤(lymphoblastic lymphoma,LBL)为主要特征。骨髓细胞形态学提示粒系细胞高度增生、嗜酸粒细胞增多;免疫表型分析显示髓系抗原表达增高;细胞遗传学分析表明存在8p11易位;RT-PCR检测bcr/abl融合基因呈阴性。在分子学水平,患者染色体异常均累及8p11上的成纤维细胞生长因子受体-1(FGFR1),目前共发现11种与FGFR1重排相关的伙伴基因,其中最常见的是位于13q11-12上的ZNF-198。EMS预后不良,患者常在短期内进展为急性髓系白血病,常规化疗效果差,除异基因造血干细胞移植外无有效的治疗方法。结论:EMS是伴有FGFR1重排的骨髓和淋巴肿瘤,易误诊为T-LBL、不典型慢性粒细胞白血病(aCML)及慢性粒-单核细胞白血病(CMML),对该病应及时进行细胞遗传学及分子生物学检测,以避免误诊、误治。 展开更多

关键词 8p11骨髓增殖综合征 干细胞白血病 淋巴瘤 FGFR1 临床病理学

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干细胞白血病基因在白血病细胞中的表达

4

作者 韩永胜 郭秀枝 +1 位作者 李扬秋 汪明春 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 1997年第3期274-275,共2页

干细胞白血病(stem cell leukemia,SCL)基因是具有碱性螺旋-环-螺旋(basic helix-loop-helix bHLH)结构的转录因子家族成员之一,其功能与造血细胞的增殖、分化及T细胞肿瘤的发生有关。本文应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测了SCL基因... 干细胞白血病(stem cell leukemia,SCL)基因是具有碱性螺旋-环-螺旋(basic helix-loop-helix bHLH)结构的转录因子家族成员之一,其功能与造血细胞的增殖、分化及T细胞肿瘤的发生有关。本文应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测了SCL基因在白血病细胞中的表达情况,并对其意义作了初步探讨。 展开更多

关键词 干细胞白血病 白血病基因 白血病 基因表达 逆转录聚合酶链反应

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SCL在造血、血管发育及白血病发病中的作用 被引量：1

5

作者 王震 《国外医学（生理病理科学与临床分册）》 2003年第1期24-27,共4页

干细胞白血病 (SCL)是bHLH转录因子 ,可调节早期造血细胞分化和胚胎血管发育。它通过调节c kit基因的表达而调控红系增殖和CD34+细胞凋亡。SCL以复合物的形式作用于靶基因的E box GATA序列。SCL基因高度保守 ,通过SCL增强子及选择不同... 干细胞白血病 (SCL)是bHLH转录因子 ,可调节早期造血细胞分化和胚胎血管发育。它通过调节c kit基因的表达而调控红系增殖和CD34+细胞凋亡。SCL以复合物的形式作用于靶基因的E box GATA序列。SCL基因高度保守 ,通过SCL增强子及选择不同启动子来实现表达调控。SCL通过多个环节参与白血病发病。T ALL中可由于多处染色体易位或缺失而出现SCL异常表达。对白血病进行诊断评估时除检测SCLmRNA外 ,还应有SCL蛋白的原位检测以及SIL SCL转录本检测。 展开更多

关键词 转录因子 造血调控 干细胞白血病 病理机制

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8p11骨髓增殖综合征的研究现状

6

作者 李锋 翟勇平 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期1073-1077,共5页

8p11骨髓增殖综合征(8p11 myeloproliferative syndrome,EMS)是与定位于髓系和淋巴系细胞8号染色体短臂(8p11)的成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)基因易位相关的侵袭性肿瘤。EMS以外周血白细胞计数明显增高、骨髓中髓系增生、嗜酸细胞增... 8p11骨髓增殖综合征(8p11 myeloproliferative syndrome,EMS)是与定位于髓系和淋巴系细胞8号染色体短臂(8p11)的成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)基因易位相关的侵袭性肿瘤。EMS以外周血白细胞计数明显增高、骨髓中髓系增生、嗜酸细胞增多和淋巴母细胞淋巴瘤/白血病为特征。EMS短期内将进展为急性白血病。EMS预后差,目前只有异基因造血干细胞移植能有效控制该病。在分子水平,所有病例均涉及8p11的FGFR1基因易位,新融合蛋白通过诱导FGFR1基因二聚体化,组成性激活酪氨酸激酶活性,导致细胞增殖及恶性转化。迄今,已鉴定出的与FGFR1形成融合蛋白的伙伴基因有14例(包括13例易位与1例插入),现就其分子生物学特征、发病机制和治疗等的研究现状作一综述。 展开更多

关键词 8p11骨髓增殖综合征 干细胞白血病 淋巴瘤综合征 骨髓增殖性肿瘤 成纤维细胞生长因子受体1t(8 13)(p11 q12)

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8P11骨髓增殖综合征一例的实验室诊断

7

作者 张茉莉 张秀琴 +2 位作者 刘宝芹 杨新宏 杨晓峰 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1161-1162,共2页

8P11骨髓增殖综合征（EMS）也称为干细胞白血病/淋巴瘤综合征,是一种十分少见的髓系肿瘤.在2008年世界卫生组织（WHO）髓系肿瘤的分类方案中,已将EMS归入伴有FGFRI重排的骨髓增殖性肿瘤[1].患者就诊时多表现为慢性骨髓增殖性疾病的血液... 8P11骨髓增殖综合征（EMS）也称为干细胞白血病/淋巴瘤综合征,是一种十分少见的髓系肿瘤.在2008年世界卫生组织（WHO）髓系肿瘤的分类方案中,已将EMS归入伴有FGFRI重排的骨髓增殖性肿瘤[1].患者就诊时多表现为慢性骨髓增殖性疾病的血液学和临床特点,本文对1例EMS患者的临床和实验室资料进行分析,以提高对EMS的认识. 展开更多

关键词 慢性骨髓增殖性疾病 淋巴瘤综合征 实验室诊断 干细胞白血病 髓系肿瘤 世界卫生组织 临床特点 实验室资料

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干细胞白血病基因在再生障碍性贫血和正常骨髓基质细胞中的表达

8

作者 扶叶松 《临床合理用药杂志》 2015年第29期129-130,共2页

目的观察干细胞白血病基因在再生障碍性贫血和正常骨髓基质细胞中的表达。方法选取再生障碍性贫血标本与正常骨髓基质细胞标本各30份,利用反转录聚合酶链反应酶联免疫吸附方法(RT-PCR-ELISA)对白血病干细胞在悬浮细胞与正常骨髓基质细... 目的观察干细胞白血病基因在再生障碍性贫血和正常骨髓基质细胞中的表达。方法选取再生障碍性贫血标本与正常骨髓基质细胞标本各30份,利用反转录聚合酶链反应酶联免疫吸附方法(RT-PCR-ELISA)对白血病干细胞在悬浮细胞与正常骨髓基质细胞中的表达,并对表达率进行分析。结果正常骨髓基质细胞在骨髓基质干细胞的阳性率高于再生障碍性贫血患者,差异有统计学意义(P<0.05)。干细胞白血病基因在正常骨髓基质细胞的表达水平上更高,明显高于再生障碍性贫血患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 SCL基因在再生障碍性贫血患者的骨髓基质细胞中表达较低,这可能同再生障碍性贫血患者造血调控存在异常有关。 展开更多

关键词 干细胞白血病 再生障碍性贫血 基因表达

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经尿道灌注SCL基因重组慢病毒的DCP豚鼠膀胱Cajal样间质细胞数量、分布及超微结构观察 被引量：8

9

作者 王子雄 王勤章 钱彪 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第15期26-30,共5页

目的观察经尿道灌注干细胞白血病(SCL)基因重组慢病毒的糖尿病膀胱病(DCP)豚鼠膀胱Cajal样间质细胞(ICC)的数量、分布及超微结构变化。方法构建SCL基因重组慢病毒且标定滴度。选择雄性豚鼠70只,单次腹腔注射链尿佐菌素12周后构建DCP豚... 目的观察经尿道灌注干细胞白血病(SCL)基因重组慢病毒的糖尿病膀胱病(DCP)豚鼠膀胱Cajal样间质细胞(ICC)的数量、分布及超微结构变化。方法构建SCL基因重组慢病毒且标定滴度。选择雄性豚鼠70只,单次腹腔注射链尿佐菌素12周后构建DCP豚鼠模型,将成功造模的27只豚鼠随机分为实验组、阳性对照组、空白对照组,每组9只。实验组、阳性对照组、空白对照组豚鼠分别经尿道灌注(转染)SCL基因重组慢病毒、空慢病毒和等量PBS液。分别于转染后7、14、28 d每组各处死3只豚鼠,取膀胱组织,制作切片,激光共聚焦显微镜下观察GFP表达、膀胱ICC数量及分布变化,透射电镜下观察膀胱ICC的超微结构变化。结果实验组随转染时间延长,ICC数量逐渐增多(P均<0.01),分布越发密集,但绿色荧光逐渐减退;空白组和对照组未见绿色荧光,随转染时间延长,ICC数量逐渐减少(P均<0.05),分布稀疏;转染14、28 d时,实验组ICC数量较空白组和对照组增加(P均<0.01)。实验组随转染时间延长,ICC细胞器数量增多,形态趋于正常,细胞内空泡减少,胞周突起延长变多,ICC超微结构处于不断恢复之中;而阳性对照组和空白对照组ICC超微结构病理变化逐渐加重。结论经尿道灌注SCL基因重组慢病毒转染DCP豚鼠膀胱后,膀胱ICC数量增多,分布更加密集,细胞超微结构得到修复,提示SCL基因对DCP可能有一定治疗效果。 展开更多

关键词 干细胞白血病基因 CAJAL样间质细胞 糖尿病膀胱病

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经尿道灌注干细胞白血病重组基因慢病毒对糖尿病膀胱病变豚鼠膀胱功能的影响 被引量：8

10

作者 余运运 王勤章 +4 位作者 王子雄 钱彪 丁国富 徐浩 张思源 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第30期30-32,共3页

目的探讨经尿道灌注干细胞白血病重组(SCL)基因慢病毒对糖尿病膀胱病变(DCP)豚鼠膀胱功能的改善作用。方法采用单次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法建立豚鼠糖尿病模型,培养12周后建立DCP模型。选取DCP豚鼠20只,随机分为模型组、SCL组各10只... 目的探讨经尿道灌注干细胞白血病重组(SCL)基因慢病毒对糖尿病膀胱病变(DCP)豚鼠膀胱功能的改善作用。方法采用单次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)法建立豚鼠糖尿病模型,培养12周后建立DCP模型。选取DCP豚鼠20只,随机分为模型组、SCL组各10只。取未造模的10只作为对照组。各组麻醉后经尿道插入自制尿管,排空尿液,对照组和模型组均经尿管灌注PBS液0.2 mL,SCL组经尿管灌注最佳感染复数(MOI)的SCL基因慢病毒0.2 mL(2×10~7IU)。灌注后结扎尿管,保留膀胱灌注液2 h。灌注后28 d时用代谢笼收集三组24 h尿量;行尿动力学检测,于膀胱排尿后即刻测残余尿量、最大膀胱容量、排尿期最大逼尿肌压、单次排尿周期灌注量、膀胱顺应性。切除完整膀胱,排尽尿液后称量膀胱湿重。结果与对照组相比,模型组和SCL组24 h尿量、膀胱湿重、最大膀胱容量、残余尿量均增加,最大逼尿肌压、膀胱顺应性均降低(P均<0.05);与模型组相比,SCL组24 h尿量、膀胱湿重、最大膀胱容量、残余尿量均降低,最大逼尿肌压、膀胱顺应性均增加(P均<0.05)。结论经尿道灌注SCL慢病毒能够显著改善DCP豚鼠的膀胱功能,为治疗DCP提供了新的途径与方法。 展开更多

关键词 糖尿病膀胱病变 慢病毒 干细胞白血病基因 膀胱功能 CAJAL间质细胞 豚鼠

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急性未分化白血病2例并文献复习 被引量：7

11

作者 张前鹏 韩永胜 皖湘 《安徽医药》 CAS 2016年第2期350-351,共2页

目的探讨急性未分化白血病(acute undifferentiated leukemia,AUL)的诊疗标准,进一步提高AUL的诊治水平。方法回顾性分析2例AUL的临床资料,并进行相关文献复习。结果 2例AUL患者其骨髓细胞形态学及组织化学均无特异性分化特征,不表达淋... 目的探讨急性未分化白血病(acute undifferentiated leukemia,AUL)的诊疗标准,进一步提高AUL的诊治水平。方法回顾性分析2例AUL的临床资料,并进行相关文献复习。结果 2例AUL患者其骨髓细胞形态学及组织化学均无特异性分化特征,不表达淋系或髓系特异性抗原,临床表现无特异性。结论对于AUL应完善各系列造血细胞抗体检测,并行T细胞受体(TCR)和免疫球蛋白重链(Ig H)基因重排探索细胞起源,以指导临床治疗。 展开更多

关键词 急性未分化白血病 急性干细胞白血病 诊断与治疗

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含人干细胞白血病基因慢病毒载体转染Cajal样间质细胞的效果研究 被引量：6

12

作者 于建超 王勤章 +5 位作者 王江平 钱彪 李应龙 王新敏 倪钊 李强 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第15期1796-1802,共7页

目的：观察携带增强绿色荧光蛋白（GFP）的含人干细胞白血病（SCL）基因慢病毒载体转染体外培养的豚鼠膀胱 Cajal 样间质细胞（ICC）的效果。方法2014年10月—2015年8月，选取普通级成年健康豚鼠16只。构建含人 SCL 基因的慢病毒载体，... 目的：观察携带增强绿色荧光蛋白（GFP）的含人干细胞白血病（SCL）基因慢病毒载体转染体外培养的豚鼠膀胱 Cajal 样间质细胞（ICC）的效果。方法2014年10月—2015年8月，选取普通级成年健康豚鼠16只。构建含人 SCL 基因的慢病毒载体，并标定病毒滴度；采用随机数字表法选取健康豚鼠4只，采用颈椎脱臼方法将其杀死，体外培养豚鼠膀胱 ICC。设置不同感染复数（MOI）（0.5、1.0、5.0、10.0、50.0、100.0），利用含人 SCL 基因的慢病毒载体转染 ICC，在激光共聚焦显微镜下观察 ICC 生长状态并计算转染效率，确定最佳 MOI。采用随机数字表法将 ICC 分为正常对照组、空白质粒对照组与慢病毒转染组，其中正常对照组加入1％磷酸盐缓冲液（PBS），空白质粒对照组加入空慢病毒，慢病毒转染组按最佳 MOI 加入含人 SCL 基因的慢病毒载体，计算各组转染效率，确定最佳转染时间。采用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测 SCL mRNA 表达情况。上述实验均独立重复4次。结果经测定，病毒滴度为5＆#215;108 TU/ ml。倒置显微镜下发现一些特征性梭形细胞，其两侧有显著外凸分枝，细胞核较大，其外形规则，有序地实现细胞贴壁，而其他未贴壁细胞则呈现与 ICC 不一样的形态，胞体多为椭圆形，细胞两极无突起，整体形状扁平。激光共聚焦显微镜下可以发现酪氨酸蛋白激酶生长因子受体（c-kit）受体成功表达，证实培养的细胞是膀胱 ICC。观察各组 ICC 生长状态，当 MOI 为0.5、1.0、5.0、10.0时，细胞生长状态较好，无细胞死亡，当 MOI为50.0、100.0时，可见部分细胞死亡，细胞活性降低；MOI 为1.0、5.0、10.0、50.0、100.0时的转染效率高于 MOI为0.5时（P ＜0.05）；MOI 为5.0、10.0、50.0、100.0时的转染效率高于 MOI 为1.0时（P ＜0.05）；MOI 为10.0、50.0、100.0时的转染效率高于 MOI 为5 展开更多

关键词 转染 干细胞白血病基因 慢病毒载体 CAJAL样间质细胞

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观察在体灌注SCL基因重组慢病毒对豚鼠糖尿病膀胱中ICC功能的影响 被引量：6

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作者 徐浩 钱彪 +4 位作者 杨立 张思源 沈志远 邵润芃 王勤章 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2018年第4期486-491,共6页

目的探究豚鼠糖尿病膀胱病(DCP)在经尿道灌注干细胞白血病(SCL)基因重组慢病毒后所引发的Cajal样间质细胞(ICC)电位活动的改变。方法购买健康雄性豚鼠90只,按照200 mg/kg单次腹腔注射1%的链脲佐菌素(STZ),正常喂养12周后,筛选出符合DCP... 目的探究豚鼠糖尿病膀胱病(DCP)在经尿道灌注干细胞白血病(SCL)基因重组慢病毒后所引发的Cajal样间质细胞(ICC)电位活动的改变。方法购买健康雄性豚鼠90只,按照200 mg/kg单次腹腔注射1%的链脲佐菌素(STZ),正常喂养12周后,筛选出符合DCP模型标准的的豚鼠并将其随机分为3组:实验组、阳性对照组、空白对照组。实验组经尿道灌注0.2 m L滴度为2×107IU的SCL基因重组慢病毒,阳性对照组经尿道灌注0.2 mL空慢病毒,空白对照组经尿道灌注0.2 mL PBS液。每组在转染后2、7、14、28 d这4个时间节点每次处死3只豚鼠,迅速摘取膀胱,选择胶原酶V消融法分离提取初代ICC并继续培养。72 h后运用膜片钳技术检测ICC自发及ATP诱发电位活动。结果体外通过胶原酶消融法可分离培养DCP豚鼠膀胱中ICC,运用细胞膜片钳技术观察到在无刺激条件下检测不到ICC的内向电流,而在ATP(100μmol/L)条件激发下可检测到ICC的内向电流。实验组2 d时与其他两组内向电流无明显变化,实验组SCL慢病毒转染DCP膀胱7、14、28 d时可检测到ICC内向电流比其他两组高(P<0.05),14 d达到峰值350.0±29.9pA,随后降低。阳性对照组与空白对照组随着DCP膀胱持续受损,内向电流逐步降低(P<0.05)。结论 SCL基因重组慢病毒经尿道灌注可成功转染豚鼠DCP膀胱,使受损的膀胱ICC电流幅度逐步增高,说明SCL基因对DCP膀胱中受损ICC功能有部分改善作用。 展开更多

关键词 干细胞白血病基因 糖尿病膀胱病变 重组慢病毒 CAJAL样间质细胞

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人干细胞白血病基因重组慢病毒载体的构建及其在Cajal样间质细胞中的表达 被引量：5

14

作者 于建超 王江平 +5 位作者 李应龙 钱彪 倪钊 王新敏 李强 王勤章 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第6期10-16,共7页

目的构建含人干细胞白血病(SCL)基因的重组慢病毒载体,并转染体外培养的Cajal样间质细胞(ICC),为进一步利用慢病毒表达载体行体内实验奠定基础。方法通过聚合酶链反应(PCR)将人SCL基质粒内的遗传物质扩增,与慢病毒载体质粒GV287-EGFP结... 目的构建含人干细胞白血病(SCL)基因的重组慢病毒载体,并转染体外培养的Cajal样间质细胞(ICC),为进一步利用慢病毒表达载体行体内实验奠定基础。方法通过聚合酶链反应(PCR)将人SCL基质粒内的遗传物质扩增,与慢病毒载体质粒GV287-EGFP结合,构建重组质粒GV287-EGFP/SCL,通过Western blot检测及基因测序对阳性克隆进行鉴定,并测定病毒滴度。体外分离、培养及鉴定ICC,重组慢病毒载体以感染复数(MOI)值为0.5、1.0、5.0、10.0、50.0和100.0时,分别转染ICC,通过激光共聚焦显微镜观察,计算不同MOI值的转染效果,确定最佳MOI值。重组慢病毒载体以最佳MOI值感染ICC作为实验组,以空载体转染的ICC(空载体组)及未转染的ICC(空白组)作为对照,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测SCL基因在ICC中的表达。结果经Western blot检测及基因测序鉴定SCL重组慢病毒表达载体构建成功,并成功转染ICC,激光共聚焦显微镜下可观察到强绿色荧光。MOI为10时转染效果最佳,转染效率>85%;RT-PCR结果表明,实验组SCL基因的表达量高于空载体组和空白组。结论成功制备人SCL基因重组慢病毒载体,并能高效转染ICC,介导SCL基因在ICC中表达。 展开更多

关键词 干细胞白血病基因 慢病毒载体 转染 CAJAL样间质细胞

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AdMax系统构建腺病毒载体介导SCL基因转染Cajal样间质细胞及其表达 被引量：4

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作者 周建民 王勤章 +3 位作者 丁国富 屠松 牛世杰 杨发英 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期33-37,共5页

目的构建含有人干细胞白血病(stem cell leukemia,SCL)基因的重组腺病毒载体,并观察其对豚鼠膀胱Cajal样间质细胞的转染及其介导SCL基因的表达。方法采用PCR方法从含人SCL基因质粒中扩增SCL基因,连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点上,构... 目的构建含有人干细胞白血病(stem cell leukemia,SCL)基因的重组腺病毒载体,并观察其对豚鼠膀胱Cajal样间质细胞的转染及其介导SCL基因的表达。方法采用PCR方法从含人SCL基因质粒中扩增SCL基因,连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点上,构建重组穿梭质粒pDC315-EGFP/SCL,在脂质体介导下与腺病毒辅助大质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染293细胞,包装产生复制缺陷型重组腺病毒pDC315-SCL经HEK293细胞扩增,纯化后测定病毒滴度。通过观察绿色荧光蛋白的表达评估重组腺病毒对Cajal样间质细胞的转染率,RT-PCR法分析转染Cajal样间质细胞后SCL mRNA的表达。结果 PCR结果和Western blot法检测证实pDC315-SCL重组腺病毒载体构建成功,滴度达到1×1010 PFU/ml,对膀胱Cajal样间质细胞的转染率高达98%,RT-PCR法检测转染Cajal样间质细胞后SCL mRNA有表达。结论成功构建pDC315-SCL重组腺病毒载体对Cajal样间质细胞有很强的转染能力,可介导SCL基因在Cajal样间质细胞的表达。 展开更多

关键词 干细胞白血病基因 腺病毒载体 转染 CAJAL样间质细胞

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含人干细胞白血病基因的重组慢病毒表达载体的构建及鉴定 被引量：2

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作者 于建超 王江平 +6 位作者 李应龙 钱彪 倪钊 王新敏 李强 王文晓 王勤章 《山东医药》 CAS 北大核心 2015年第44期15-17,共3页

目的构建含人干细胞白血病(SCL)基因的重组慢病毒表达载体(GV287-SCL),为糖尿病膀胱异常病症(DCP)的基因治疗奠定基础。方法采用PCR法将人SCL基因质粒内的遗传物质扩增,与慢性病毒穿透质粒结合,构建重组穿梭质粒GV287-EGFP/SCL,共转染2... 目的构建含人干细胞白血病(SCL)基因的重组慢病毒表达载体(GV287-SCL),为糖尿病膀胱异常病症(DCP)的基因治疗奠定基础。方法采用PCR法将人SCL基因质粒内的遗传物质扩增,与慢性病毒穿透质粒结合,构建重组穿梭质粒GV287-EGFP/SCL,共转染293T细胞,通过多次感染、扩增和提纯,得到重组慢病毒GV287-SCL。以不同浓度重组慢病毒原液感染293T细胞,采用Western blotting法检测目的基因,荧光标记法计算病毒滴度。结果人SCL基因扩增产物大小为1 036 bp,与目的基因相关片段中SCL c DNA大小相同。阳性转化子扩展后均形成503 bp条带,其大小与目的片段人SCL c DNA相当。重组质粒GV287-EGFP/SCL阳性克隆的目的基因SCL成功插入到GV287-EGFP,基因排序和Gen Bank信息库里的人SCL基因mRNA基本相同。重组慢病毒滴度为5×108TU/m L。结论成功构建了GV287-SCL,病毒滴度为5×108TU/m L。本研究为继续进行SCL基因体内转染及开展DCP的基因治疗提供了基础。 展开更多

关键词 糖尿病膀胱异常病症 干细胞白血病基因 慢病毒载体 转染 CAJAL样间质细胞

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SCL基因反义寡核苷酸对K562和CEM细胞系的作用 被引量：1

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作者 郑正津 胡建达 +2 位作者 黄淑桦 王少元 吕联煌 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第5期404-408,共5页

干细胞白血病 (SCL)基因是新发现的与白血病发生有关的癌基因。为进一步探讨SCL反义寡核苷酸对白血病细胞的作用 ,本研究应用SCL基因的反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸 (AS PS ODN)分别与K562和CEM白血病细胞系作用 ,观察细胞生长、分化、凋亡... 干细胞白血病 (SCL)基因是新发现的与白血病发生有关的癌基因。为进一步探讨SCL反义寡核苷酸对白血病细胞的作用 ,本研究应用SCL基因的反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸 (AS PS ODN)分别与K562和CEM白血病细胞系作用 ,观察细胞生长、分化、凋亡和SCLmRNA变化。结果显示 :(1 )AS PS ODN对K562和CEM细胞的生长有不同程度的抑制作用 ,并呈量效和时效关系 ;(2 )AS PS ODN作用后K562细胞联苯胺染色阳性率明显增加 ;(3)AS PS ODN作用后K562细胞发生凋亡现象 ,但未观察到CEM细胞凋亡 ;(4)AS PS ODN作用后K562细胞和CEM细胞SCLmRNA表达水平减低 ,同时CEM细胞SIL SCLmRNA表达水平也减低。结论 :AS PS ODN能特异性抑制K562和CEM细胞的增殖 ,减低SCLmRNA和SIL SCLmRNA表达水平 ,同时促进红系分化 。 展开更多

关键词 干细胞白血病基因 反义寡核苷酸 K562细胞系 CEM细胞系 SCL 表达水平 基因治疗

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SCL基因重组慢病毒上调高糖环境下Cajal间质细胞中c-kit蛋白表达 被引量：2

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作者 申茂磊 钱彪 +3 位作者 徐浩 傅家豪 王昱琛 王勤章 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期117-121,共5页

目的:探讨含人干细胞白血病(stem cell leukemia,SCL)基因重组慢病毒对高糖环境下受损Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)中酪氨酸激酶受体(c-kit)蛋白表达的影响。方法:分离ICC,培养24 h贴壁,经倒置显微镜、免疫荧光鉴定... 目的:探讨含人干细胞白血病(stem cell leukemia,SCL)基因重组慢病毒对高糖环境下受损Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)中酪氨酸激酶受体(c-kit)蛋白表达的影响。方法:分离ICC,培养24 h贴壁,经倒置显微镜、免疫荧光鉴定后,将ICC细胞分为对照组、高糖组,对照组加入含5 mmol/L葡萄糖的培养基,高糖组加入含20 mmol/L葡萄糖的培养基,培养48 h后;对照组不变,高糖组分成空白组、空慢病毒组和实验组3个亚组,3组分别加入PBS、空慢病毒和含SCL基因重组慢病毒5 mmol/L葡萄糖的培养基,继续培养24和48 h,采用Western印迹法检测两个时段各组中ICC中c-kit蛋白表达情况。结果:24或48 h后,空白组、空慢病毒组中ICC的c-kit蛋白表达水平均明显低于对照组,实验组中ICC中c-kit蛋白的表达水平明显均高于空白组和空慢病毒组,但是仍低于对照组(均P<0.05)。结论:SCL基因重组慢病毒可以上调高糖环境下功能受损ICC中c-kit蛋白表达量。 展开更多

关键词 干细胞白血病基因重组慢病毒 高糖 CAJAL间质细胞 C-KIT蛋白

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经尿道联合灌注SCL和Cx43基因慢病毒对糖尿病膀胱功能的影响

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作者 轩留明 马路平 +4 位作者 欧阳松 孙鹏 谭明辉 张永强 王勤章 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第10期1546-1551,共6页

目的探究干细胞白血病基因(SCL)重组慢病毒和缝隙连接蛋白基因(Cx43)重组慢病毒联合作用对豚鼠糖尿病膀胱(DCP)功能的影响。方法90只健康豚鼠适应性喂养1周后,按照200 mg/kg一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ),定期每周监测随机血糖,正常饲... 目的探究干细胞白血病基因(SCL)重组慢病毒和缝隙连接蛋白基因(Cx43)重组慢病毒联合作用对豚鼠糖尿病膀胱(DCP)功能的影响。方法90只健康豚鼠适应性喂养1周后,按照200 mg/kg一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ),定期每周监测随机血糖,正常饲养12周后,通过尿流动力学检查筛选出40只符合标准的豚鼠,将其随机分成4组:糖尿病组、SCL组、Cx43组、SCL+Cx43组。糖尿病组经尿道向膀胱内灌注0.2 ml不含基因的空慢病毒,SCL组、Cx43组使用同样方法分别灌注SCL慢病毒和Cx43慢病毒0.2 ml,SCL+Cx43慢病毒组经尿道灌注SCL、Cx43慢病毒各0.2 ml。转染14 d后进行尿流动力学检查,检查后处死豚鼠,并迅速摘取膀胱,进行冰冻膀胱切片及荧光双染。结果与糖尿病组相比,SCL组、Cx43组在尿流动力学检查中差异无统计学意义(P>0.05),SCL+Cx43组尿流动力学检查可见逼尿肌压力、腹压、膀胱压均有改善(P<0.05)。糖尿病组激光共聚焦可见Cajal间质细胞(ICC)的数量减少,梭形结构及细胞突起明显被破坏,出现细胞裂解状态。SCL组、Cx43组可见ICC样细胞的梭形结构和细胞突起有所改善,细胞数量无明显变化。SCL+Cx43组可见ICC样细胞的数量增多,梭形结构及细胞突起有改善,并可形成ICC-二聚体。结论经尿道联合灌注SCL和Cx43基因重组慢病毒可以成功在豚鼠DCP膀胱中转染,可恢复损伤的ICC细胞的数量及结构,并形成ICC二聚体结构,提高糖尿病膀胱逼尿肌压力,改善排尿无力、腹压排尿等特点,为治疗DCP提供了新的方向。 展开更多

关键词 糖尿病膀胱病变 CAJAL样间质细胞 干细胞白血病基因 CX43基因

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观察在体联合灌注SCL和Cx43基因重组慢病毒对豚鼠糖尿病膀胱逼尿肌的影响

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作者 轩留明 马路平 +4 位作者 欧阳松 孙鹏 谭明辉 张永强 王勤章 《农垦医学》 2022年第2期97-101,107,共6页

目的:探究干细胞白血病基因(Stem Cell Leukemia,SCL)重组慢病毒和缝隙连接蛋白基因[Gap Junction Protein Alpha 1,GJA1(又名Connexin43,Cx43)]重组慢病毒联合作用对豚鼠糖尿病膀胱(Diabetic Cystipathy,DCP)逼尿肌的影响。方法:40只... 目的:探究干细胞白血病基因(Stem Cell Leukemia,SCL)重组慢病毒和缝隙连接蛋白基因[Gap Junction Protein Alpha 1,GJA1(又名Connexin43,Cx43)]重组慢病毒联合作用对豚鼠糖尿病膀胱(Diabetic Cystipathy,DCP)逼尿肌的影响。方法:40只健康豚鼠适应性喂养1周后,按照200mg/kg一次性腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ),定期每周监测随机血糖,正常饲养12周后,通过尿流动力学检查筛选出40只符合标准的豚鼠,将其随机分成4组:糖尿病组、SCL慢病毒组、Cx43慢病毒组、SCL+Cx43慢病毒组。糖尿病组经尿道向膀胱内灌注0.2mL不含基因的空慢病毒,SCL组、Cx43组使用同样方法分别灌注SCL慢病毒和Cx43慢病毒0.2mL,SCL+Cx43慢病毒组经尿道灌注SCL、Cx43慢病毒各0.2mL。转染14天后进行尿流动力学检查,检查后处死豚鼠,取出豚鼠膀胱,制作逼尿肌肌条,行逼尿肌肌条收缩实验。结果:SCL组和Cx43组与糖尿病组相比,在尿流动力学检查中逼尿肌压力无明显差异(P>0.05),SCL+Cx43组较糖尿病组尿流动力学检查可见逼尿肌压力有明显改善(P<0.05)。在逼尿肌肌条实验中,糖尿病组较正常组逼尿肌收缩幅度及频率明显下降(P<0.05),SCL组与糖尿病组相比逼尿肌收缩幅度及频率有所改善(P<0.05),Cx43组与糖尿病组相比,收缩幅度及收缩频率未见改善(P<0.05),SCL组和Cx43组之间比较无统计学差异(P>0.05)。SCL+Cx43组与糖尿病组相比,逼尿肌收缩幅度及频率有明显差异(P<0.05),SCL+Cx43组与正常组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:经尿道联合灌注SCL+Cx43基因重组慢病毒可以成功在豚鼠DCP膀胱中转染成功,可提高糖尿病膀胱逼尿肌压力,离体试验证实联合灌注较单一灌注可提高逼尿肌收缩幅度及收缩频率,为临床治疗DCP提供新的思路。 展开更多

关键词 糖尿病膀胱病变 CAJAL样间质细胞 干细胞白血病基因 CX43基因

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