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隐丹参酮通过抑制帽子依赖的翻译促进人肺癌细胞A549的凋亡 被引量：7
1
作者 李伟 刘超 +4 位作者 郭志敏 王瑞尧 张标 王永丽 宫强 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期550-554,共5页
目的探索隐丹参酮对人肺癌细胞A549中帽子依赖翻译的影响及帽子依赖翻译在隐丹参酮促A549细胞凋亡中的作用。方法免疫印迹实验检测隐丹参酮对A549细胞中m TOR及4EBP1磷酸化的影响,随后通过m7GTP pull down实验检测隐丹参酮对A549细胞中e... 目的探索隐丹参酮对人肺癌细胞A549中帽子依赖翻译的影响及帽子依赖翻译在隐丹参酮促A549细胞凋亡中的作用。方法免疫印迹实验检测隐丹参酮对A549细胞中m TOR及4EBP1磷酸化的影响,随后通过m7GTP pull down实验检测隐丹参酮对A549细胞中eIF4F蛋白复合物形成的影响,最终通过免疫印迹实验、Annexin V和CCK8法检测敲低4EBP1表达前后隐丹参酮对A549细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2表达、细胞凋亡和存活的影响。结果隐丹参酮以剂量依赖的方式抑制A549细胞中m TOR及4EBP1的磷酸化、e IF4F蛋白复合物的形成和Bcl-2蛋白的表达。细胞凋亡分析发现,对照组中,隐丹参酮显著地诱导了A549细胞的凋亡[(4.68±0.77)%vs.(31.1±4.1)%,P<0.05],但敲低4EBP1的表达显著抑制了隐丹参酮的促凋亡作用[(31.1±4.1)%vs.(8.85±1.2)%,P<0.05]。CCK8法检测结果发现,隐丹参酮显著抑制了A549细胞的存活[(1±0.09)%vs.(0.43±0.05)%,P<0.05],但敲低4EBP1的表达拮抗了EMD638683的抑存活作用[(0.43±0.05)vs.(0.87±0.06),P<0.05]。结论隐丹参酮通过抑制mTOR激酶的活性抑制4EBP1磷酸化,从而抑制A549细胞中帽子依赖的翻译,进而抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达诱发人肺癌细胞A549的凋亡。 展开更多
关键词 隐丹参酮 帽子依赖翻译 4EBP1 肺癌 细胞凋亡
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依维莫司和AR—A014418联合使用促进黑素瘤细胞A375的凋亡
2
作者 陈兰 荣冬芸 +1 位作者 吴春维 曹煜 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期271-275,共5页
目的探讨同时抑制mTORCl激酶和GSK-3B激酶活性对黑素瘤细胞4EBPl的磷酸化、帽子依赖翻译、细胞存活和凋亡的影响。方法分别采用二甲基亚砜（DMSO组）、5nmol／L依维莫司（依维莫司组）、10gtm01／LAR—A014418（AR—A014418组）、5nmol... 目的探讨同时抑制mTORCl激酶和GSK-3B激酶活性对黑素瘤细胞4EBPl的磷酸化、帽子依赖翻译、细胞存活和凋亡的影响。方法分别采用二甲基亚砜（DMSO组）、5nmol／L依维莫司（依维莫司组）、10gtm01／LAR—A014418（AR—A014418组）、5nmol／L依维莫司联合10μmol／LAR—A014418（联合处理组）处理A375细胞，Western印迹法检测4EBPl的磷酸化和生存素蛋白的表达，mTGTPpull—down实验检测elF4E和eIF4G的相互作用，CCK8法和流式细胞仪分别检测A375细胞的增殖和凋亡。结果依维莫司和AR—A014418对4EBPl磷酸化和生存素蛋白表达均有一定的抑制作用，两组p4EBPl—65分别为0．74±0．05和0．62±0．06，生存素蛋白分别为0．71±0．06和0．58±0．07，与DMSO组（分别为1．00±0．07和1．00±0．06）相比，均P〈0．001，且联合处理组对4EBPl磷酸化（0．14±0．04）和生存素蛋白表达（O．09±0．05）的抑制更为显著。m7GTPpull-down实验显示，依维莫司组（0．72±0．04）、AR—A014418组（0．67±0．05）、联合处理组（0．12±0．05）eIF4G相对值均低于DMSO组（1．00±0．06），而4EBPl相对值均高于DMSO组（分别为1．98±0．16、2．32±0．17、7．58±0．25、1．00±0．08），且联合处理组eIF4G降低和4EBPl增加最为显著。培养24h时，与DMSO组相比，依维莫司、AR-A014418、依维莫司联合AR—A014418均对A375细胞增殖有抑制作用（后3组抑制率分别为18．5％±1．3％、19．8％±1．8％、61．2％±2．1％），且联合处理组的抑制作用最为显著；培养48h时，依维莫司和AR—A014418对A375细胞增殖的抑制显示相同的趋势，且其抑制作用随时间的延长而增强。流式细胞仪检测显示，依维莫司和AR—A014418单独处理A375细胞24h对其凋亡有一定的促进作用（凋亡率分别为14．28％±2．18％、14．57％±2．35％），联合处理时细胞凋亡更为显著，凋亡率为55．18％±6．27 展开更多
关键词 黑色素瘤 实验性 细胞凋亡 糖原合成酶激酶3 生存素 依维莫司 4E结合蛋白1 帽子依赖翻译
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AKT反馈激活拮抗4EGI-1对黑素瘤A375细胞的抑制作用
3
作者 陈兰 邓仁远 +3 位作者 涂云华 叶振源 薛月萃 曹煜 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期438-442,共5页
目的:探索4EGI-1对黑素瘤A375细胞中AKT通路的激活作用及后者对4EGI-1抑制A375细胞增殖的影响。方法:用20、40、60μmol/L的4EGI-1处理黑素瘤A375细胞12、24 h,Western boltting检测4EGI-1对A375细胞中AKT磷酸化的影响;A375细胞分别受4E... 目的:探索4EGI-1对黑素瘤A375细胞中AKT通路的激活作用及后者对4EGI-1抑制A375细胞增殖的影响。方法:用20、40、60μmol/L的4EGI-1处理黑素瘤A375细胞12、24 h,Western boltting检测4EGI-1对A375细胞中AKT磷酸化的影响;A375细胞分别受4EGI-1(40μmol/L)、BEZ235(5μmol/L)、4EGI-1(40μmol/L)+BEZ235(5μmol/L)联合处理,CCK-8实验和流式细胞术分别检测4EGI-1、BEZ235单独或联合处理对A375细胞增殖和细胞周期的影响,Western boltting检测对细胞周期相关蛋白Cyclin D1表达的影响。结果:4EGI-1促进A375细胞中AKT的磷酸化,且具有剂量依赖性;而BEZ235能够拮抗4EGI-1对AKT的促磷酸化作用。与4EGI-1组和BEZ235组相比,联合组的A375细胞增殖抑制率显著升高[24 h时,4EGI-1组和BEZ235组抑制率分别为(7.6±1.2)%和(2.4±3.1)%,而联合组抑制率为(19.8±4.3)%;P<0.05],S期细胞比例显著降低(4EGI-1组和BEZ235组S期细胞比例分别为25.65%和25.82%,联合处理组细胞S期为13.08%;P<0.05),Cyclin D1表达显著降低(4EGI-1组和BEZ235组Cyclin D1相对表达值为0.81±0.04和0.76±0.04,联合处理组细胞Cyclin D1相对表达值为0.25±0.03;P<0.05)。结论:AKT反馈激活拮抗4EGI-1对黑素瘤A375细胞的抑制作用,联合使用AKT抑制药物能够增强4EGI-1对A375细胞的生长抑制作用。 展开更多
关键词 黑素瘤 A375细胞 AKT 帽子依赖翻译 4EGI-1
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