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恶性疟原虫已糖转运体编码基因的体外扩增及克隆
1
作者 徐劲 叶苓 +1 位作者 魏泉德 余新炳 《广东寄生虫学会年报》 1999年第1期15-17,共3页
目的：体外扩增恶性疟原虫海南分离株的已糖转运体基因(PfHT1)，并将该基因克隆至pEGFF真核表达载体内使其高效表达，为研究DNA疫苗创造条件。方法：特定PCR引物的设计；恶性疟原虫FCC1／HN株的体外培养；提取基因组DNA；PCR扩增和琼脂... 目的：体外扩增恶性疟原虫海南分离株的已糖转运体基因(PfHT1)，并将该基因克隆至pEGFF真核表达载体内使其高效表达，为研究DNA疫苗创造条件。方法：特定PCR引物的设计；恶性疟原虫FCC1／HN株的体外培养；提取基因组DNA；PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳分析；酶切、连接及PCR分析鉴定。结果：从恶性疟原虫簿南分离株基因组DNA中扩增出特异性的编码FfhTl的基因序列．片段太小为1516bp，克隆鉴定结果表明插人片段大小正确。结论：体外成功扩增出恶性疟原虫PfHTl编码序列，与预期长度相符，并成功构建pEGFF-Htl真核表达载体。为研究其结构、功能和免疫原性奠定基础， 展开更多
关键词 恶性疟原虫 已糖转运体 编码基因 克隆 PCR 疟疾
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恶性疟原虫HT1基因荧光真核表达载体的构建及细胞内表达
2
作者 徐劲 余新炳 +1 位作者 叶苓 陆家海 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第2期66-68,共3页
目的　体外扩增恶性疟原虫海南分离株的已糖转运体基因 (pfHT1) ,构建恶性疟原虫HT1基因真核融合表达载体并检测其表达情况 ,为用于DNA免疫作准备。方法　特定PCR引物的设计 ,扩增 ,基因组DNA提取 ,连接 ,鉴定 ,细胞培养 ,脂质体转染 ,... 目的　体外扩增恶性疟原虫海南分离株的已糖转运体基因 (pfHT1) ,构建恶性疟原虫HT1基因真核融合表达载体并检测其表达情况 ,为用于DNA免疫作准备。方法　特定PCR引物的设计 ,扩增 ,基因组DNA提取 ,连接 ,鉴定 ,细胞培养 ,脂质体转染 ,荧光显微镜观察。结果　从恶性疟原虫海南分离株基因组DNA中扩增特异的编码 pfHT1的基因序列 ,片断大小为 15 16bp ,经酶切鉴定证实成功构建 pEGFP -HT1融合表达质粒 ,将其转染体外培养的细胞后 ,可见融合蛋白表达产生的明亮的绿色荧光。结论　成功构建 pEGFP -HT1融合表达质粒 ,并实现在细胞内的表达。为进行动物体内的DNA免疫打下了基础。 展开更多
关键词 绿色荧光蛋白 DNA疫苗 基因转染 恶性疟原虫 已糖转运体 基因表达 真核表达载体
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