cDNA文库的差异筛选与抑制性减数杂交相结合分离胡萝卜体细胞胚根发育相关基因 被引量：11

1

作者 张雷 杨志攀 +2 位作者 刘一鸣 黄美娟 吴乃虎 《自然科学进展》 北大核心 2002年第3期261-265,共5页

应用cDNA文库差异筛选与抑制性减数杂交相结合的技术程序,并通过反向Northern分析进一步验证,成功地从解调控12 h的胡萝卜体细胞胚的cDNA文库中,分离到7个在解调控12h特异表达的基因.其中4个含有完整的编码框,分别编码木质葡聚糖内转糖... 应用cDNA文库差异筛选与抑制性减数杂交相结合的技术程序,并通过反向Northern分析进一步验证,成功地从解调控12 h的胡萝卜体细胞胚的cDNA文库中,分离到7个在解调控12h特异表达的基因.其中4个含有完整的编码框,分别编码木质葡聚糖内转糖基化酶、脂肪酸去饱和酶、一种poly(A)结合蛋白和一种酰基转移酶.另外3个是5＇端部分缺失的cDNA基因片段,分别编码三磷酸甘油醛脱氢酶、一种糖蛋白和一种与单链RNA/DNA结合的蛋白.对其中部分基因的Northern分析结果显示,它们的表达量在蔗糖调控下的胡萝卜体细胞胚根发育的不同时期均有显著变化,说明它们都是与胚根发育相关的基因. 展开更多

关键词 CDNA文库 胚根发育 胡萝卜体细胞胚 差异筛选 抑制性减数杂交 基因克隆 基因分离 基因表达

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冬小麦春化作用相关cDNA克隆Vrc79的分子克隆 被引量：8

2

作者 赵大中 赵大中 +3 位作者 种康 万莉 徐继 谭克辉 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1999年第1期34-39,共6页

在低温需求型植物的发育过程中，春化作用是诱导植物成花的必要因子。在冬小麦春化进程中存在着一个核酸代谢的关键期，为了探讨春化作用的分子机理，以不春化及脱春化的冬小麦京冬1号（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ　ａｅｓｔｉｖｕｍＬ．ｃｖ．... 在低温需求型植物的发育过程中，春化作用是诱导植物成花的必要因子。在冬小麦春化进程中存在着一个核酸代谢的关键期，为了探讨春化作用的分子机理，以不春化及脱春化的冬小麦京冬1号（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ　ａｅｓｔｉｖｕｍＬ．ｃｖ．Ｊｉｎｄｏｎｇ　Ｎｏ．１）胚芽的ｍＲＮＡ为对照，通过减法杂交构建了富集冬小麦春化相关基因的ｃＤＮＡ文库，经过差异筛选分离到了一个仅在春化２１ｄ这一关键期表达，而在不春化、春化４ｄ、脱春化不表达的春化相关。ｃＤＮＡ克隆Ｖｒｃ７９。Ｎｏｒｔｈｅｍ杂交及同源性分析表明它是一个在植物中新发现的不同于低温胁迫诱导基因的春化特异克隆，其对春化需求型植物的成花诱导可能起重要的调控作用。 展开更多

关键词 春化作用相关cDNA克隆 减法杂交 差异筛选 冬小麦

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参附注射液对慢性充血性心力衰竭大鼠心肌miRNA表达谱的影响 被引量：12

3

作者 施洋 樊官伟 《中国药房》 CAS 北大核心 2017年第22期3048-3052,共5页

目的:研究参附注射液(SFI)对慢性充血性心力衰竭(简称心衰)大鼠心肌微小RNA(miRNA)表达谱的影响,以明确SFI抗心衰的作用靶点。方法:将40只大鼠按随机数字表法分成假手术组(生理盐水,ip)、模型组(生理盐水,ip)、缬沙坦组(阳性对照,10 mg/... 目的:研究参附注射液(SFI)对慢性充血性心力衰竭(简称心衰)大鼠心肌微小RNA(miRNA)表达谱的影响,以明确SFI抗心衰的作用靶点。方法:将40只大鼠按随机数字表法分成假手术组(生理盐水,ip)、模型组(生理盐水,ip)、缬沙坦组(阳性对照,10 mg/kg,ig)和SFI组(0.75 m L/kg,im),每组10只,除假手术外的其余各组大鼠均复制心衰模型。造模成功后,各组小鼠每天给予相应药物1次,连续给药28 d后采用Affymetrix miRNA V4.0芯片技术对心衰大鼠心肌组织中miRNA表达进行分析,并筛选各组大鼠心肌组织中共同差异表达miRNA,以差异基因表达倍数大于或等于1.1为阈值分析心衰相关miRNA;利用基因本体论(GO)分析对差异表达基因进行功能分类及生物信号通路分析。结果:共筛选出29条共同差异表达miRNA,7条心衰相关miRNA(rno-miR-30c-1-3p、rno-miR-125b-5p、rno-miR-133a-5p、rno-miR-199a-5p、rno-miR-221-3p、rno-miR-146a-5p和rno-miR-1-3p),SFI能显著下调心衰大鼠心肌组织中rno-miR-125b-5p、rno-miR-133a-5p、rno-miR-221-3p、rno-miR-1-3p表达(P<0.05或P<0.01)。GO分析结果显示,差异表达miRNA主要与信号通路转导、细胞质及核苷酸结合有关。结论:SFI参与下调心衰进展相关miRNA,进而经细胞质与核苷酸结合后影响相关信号通路的转导,从而发挥其抗心衰作用。 展开更多

关键词 参附注射液 慢性充血性心力衰竭 微小RNA 差异筛选 基因本体论分析

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抑制性消减杂交分离苹果缺铁诱导的相关基因 被引量：11

4

作者 张玉刚 许雪峰 +3 位作者 李天忠 王忆 孔瑾 韩振海 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期555-560,共6页

以铁高效基因型植物——苹果属小金海棠(Malus xiaojinensis Cheng et Jiang)为材料,利用抑制性消减杂交(SSH)方法,成功构建了小金海棠缺铁条件下的消减cDNA文库。该文库包含1 152个克隆,通过PCR检测插入片段大小在300 ～1 000 bp之间... 以铁高效基因型植物——苹果属小金海棠(Malus xiaojinensis Cheng et Jiang)为材料,利用抑制性消减杂交(SSH)方法,成功构建了小金海棠缺铁条件下的消减cDNA文库。该文库包含1 152个克隆,通过PCR检测插入片段大小在300 ～1 000 bp之间。对构建的消减cDNA文库进行差异筛选,得到差异表达片段(ESTs) 105个。GenBank上BLAST结果如下: 50个ESTs与其它物种同源性较高,视为已知基因,并根据其功能分为9个组; 32个ESTs在GenBank中无法查到对应的同源序列,可能代表了新基因;另外23个是与已知ESTs重复的基因片段。 展开更多

关键词 苹果 小金海棠 抑制性消减杂交 CDNA文库 差异筛选

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根癌农杆菌胁迫下多花蔷薇(Rosamultiflora‘Inermis4’)的基因表达分析 被引量：8

5

作者 赵小兰 苏晓华 +1 位作者 田传卫 赵梁军 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期1425-1430,共6页

多花蔷薇无刺4号(Rosamultiflora‘Inermis4’)对根癌病有较强抗性。以根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)接种多花蔷薇无刺4号为目的材料,刺伤处理为对照,采用抑制差减杂交(suppressionsubtractivehybridization,SSH)方法,构建了富... 多花蔷薇无刺4号(Rosamultiflora‘Inermis4’)对根癌病有较强抗性。以根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)接种多花蔷薇无刺4号为目的材料,刺伤处理为对照,采用抑制差减杂交(suppressionsubtractivehybridization,SSH)方法,构建了富集多花蔷薇根癌病抗性相关基因的差减cDNA文库。差异筛选差减cDNA文库后,随机选取增强表达的92个克隆进行测序,去除冗余的cDNA和病菌的基因片段,共得到53个单一序列。利用GenBank数据库进行核酸和蛋白质同源性比较,获得的cDNA片段功能涉及:细胞分裂、生长(22个克隆),逆境防御、信号转导及激素调节(11个克隆)以及初生与次生代谢(10个克隆)。另有10个基因片段功能未知,可能为新的EST。根据测序及比对分析结果,对多花蔷薇无刺4号抗根癌病的分子机理进行了探讨。 展开更多

关键词 根癌农杆菌 基因表达分析 蔷薇 差减CDNA文库 GENBANK数据库 胁迫 抑制差减杂交 cDNA片段 基因片段 同源性比较 根癌病 相关基因 差异筛选 细胞分裂 次生代谢 激素调节 信号转导 分析结果 分子机理 克隆 蛋白质 EST 抗性

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应用抑制性消减杂交分离板栗短雄花序芽变相关基因 被引量：7

6

作者 朱晓琴 沈元月 +1 位作者 冯永庆 秦岭 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期340-343,共4页

利用抑制性消减杂交技术分离了板栗正常花序与芽变花序之间表达的差异cDNA片段。以芽变板栗雄花序cDNA为试验方(tester),以对照板栗雄花序cDNA为驱动方(driver),构建了一个板栗芽变花序消减文库。菌落PCR显示插入片段主要在100～1000 bp... 利用抑制性消减杂交技术分离了板栗正常花序与芽变花序之间表达的差异cDNA片段。以芽变板栗雄花序cDNA为试验方(tester),以对照板栗雄花序cDNA为驱动方(driver),构建了一个板栗芽变花序消减文库。菌落PCR显示插入片段主要在100～1000 bp,文库质量良好。通过对文库阳性克隆随机测序共得到了30个有效EST序列。利用Blast同源性比较,其中一些EST可能与板栗雄花序发育中变短的生物学形态形成密切相关,为后续板栗短雄花序芽变相关基因的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 板栗 短雄花序 抑制性消减杂交 CDNA文库 差异筛选

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奶牛乳房炎抗性基因的反向Northern斑点杂交差异筛选 被引量：6

7

作者 曹随忠 李宏滨 +3 位作者 姚学萍 王爱华 赵兴绪 杜立新 《家畜生态学报》 2007年第3期57-61,共5页

分别用地高辛标记患乳房炎奶牛和健康奶牛外周血白细胞cDNA探针,对已构建的奶牛乳房炎抗性相关cDNA文库应用反向Northern斑点杂交技术进行差异筛选,筛选出的50个差异表达克隆测序后获得48个EST序列。根据在GenBank非冗余核酸数据库(nr)... 分别用地高辛标记患乳房炎奶牛和健康奶牛外周血白细胞cDNA探针,对已构建的奶牛乳房炎抗性相关cDNA文库应用反向Northern斑点杂交技术进行差异筛选,筛选出的50个差异表达克隆测序后获得48个EST序列。根据在GenBank非冗余核酸数据库(nr)和EST数据库中Blastn序列比对结果,将这些EST分为3类:第一类代表已知基因,共35个;第二类代表已知EST,共5个;第三类为新EST,共3个。35个代表已知基因的ESTs按照基因功能分为八类:信号转导与细胞间通信(8.57%)、细胞结构与运动(11.43%)、细胞凋亡(5.72%)、细胞与机体防御(20.00%)、物质转运(8.57%)、翻译与表达调控(20.00%)、代谢(14.20%)及其它(11.43%)。结合相关文献初步探讨了部分患乳房炎奶牛外周血白细胞差异表达基因的功能和意义,其中BNBD5、IgJ、MIP-3、MnSOD、AHCY、WIP等基因可能在奶牛乳房炎抗性中发挥重要作用。 展开更多

关键词 反向Northern斑点杂交 CDNA文库 乳房炎抗性相关基因 差异筛选

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采用高通量基因芯片筛选乳腺癌分子诊断基因群的研究 被引量：5

8

作者 冯玉梅 李晓青 +2 位作者 孙保存 张亮 郝希山 《中华病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期361-362,共2页

关键词 基因芯片技术 分子诊断 高乳腺癌 差异筛选 高通量 基因表达谱芯片 基因群 乳腺癌相关基因 正常乳腺组织 发生发展

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去唾液酸糖蛋白受体H1亚单位的表达、纯化及其单链抗体的筛选与鉴定 被引量：6

9

作者 曹利民 司进 +6 位作者 朱荫昌 王炜煜 赵晓蓉 叶庆 李文涵 朱慧芬 沈关心 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期756-761,共6页

目的去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)H1亚单位的重组、表达、纯化及其单链抗体的筛选与鉴定。方法将ASGPRH1亚单位糖识别区基因(CRDH1)定向克隆至原核表达载体pET-32c经IPTG诱导表达,表达产物用Ni2+螯合柱亲和纯化,免疫印迹技术(WB)检测;用... 目的去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)H1亚单位的重组、表达、纯化及其单链抗体的筛选与鉴定。方法将ASGPRH1亚单位糖识别区基因(CRDH1)定向克隆至原核表达载体pET-32c经IPTG诱导表达,表达产物用Ni2+螯合柱亲和纯化,免疫印迹技术(WB)检测;用纯化的CRDH1对人源噬菌体抗体库进行4轮固相筛选,阳性克隆用表达标记(Trx-His-stag)进行差异筛选。取阳性噬菌体C3感染宿主菌HB2151,37℃振荡培养过夜,终浓度为1mmol/L的IPTG诱导表达,12%SDS-PAGE与Westernblot鉴定以及免疫组化鉴定纯化的单链抗体C3与肝细胞结合的特性。结果CRDH1/pET-32c在原核系统经诱导表达出相对分子质量(Mr)约35×103大小的融合蛋白,以包涵体的形式存在;通过Ni2+亲和柱纯化获得CRDH1融合蛋白;经4轮筛选和差异筛选后,有2株可分泌性表达与CRDH1特异性结合的单链抗体,DNA序列分析表明单链抗体重链基因和轻链基因分别属于人免疫球蛋白VH3家族和VKI家族。噬菌体C3经诱导表达出Mr约28×103大小的融合蛋白,可溶性分泌表达于培养基中;通过Ni2+亲和柱纯化获得单链抗体,ELISA、Westernblot表明单链抗体C3能较好结合rCRDH1,免疫组化显示该单链抗体可与肝癌细胞、肝细胞特异结合。结论成功表达ASGPR并筛选出其人源单链抗体。该单链抗体可与表达的rCRDH1以及肝细胞和肝癌细胞特异性结合,提示对肝脏疾病的靶向治疗有潜在的应用价值。 展开更多

关键词 去唾液酸糖蛋白受体 人源噬菌体抗体库 单链抗体 去唾液酸糖蛋白受体 人源单链抗体 亲和纯化 差异筛选 亚单位 鉴定 H1 Western 噬菌体抗体库

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缺铁玉米根cDNA文库的构建及蛋白和cDNA差异比较 被引量：3

10

作者 印莉萍 祁晓廷 +3 位作者 刘祥林 孙进 吴娟 邱泽生 《首都师范大学学报（自然科学版）》 1999年第4期54-60,共7页

采用异硫氰酸胍酚氯仿法分离铁胁迫玉米根总ＲＮＡ，然后采用寡聚ｄＴ 纤维素层析柱法纯化Ｐｏｌｙ（Ａ） ＋ ＲＮＡ．用含有ＸｈｏＩ位点的ｌｉｎｋｅｒｐｒｉｍｅｒ 锚定合成ｃＤＮＡ 第一条链后，采用替代法合成第二条链，接... 采用异硫氰酸胍酚氯仿法分离铁胁迫玉米根总ＲＮＡ，然后采用寡聚ｄＴ 纤维素层析柱法纯化Ｐｏｌｙ（Ａ） ＋ ＲＮＡ．用含有ＸｈｏＩ位点的ｌｉｎｋｅｒｐｒｉｍｅｒ 锚定合成ｃＤＮＡ 第一条链后，采用替代法合成第二条链，接着连接上ＥｃｏＲＩＡｄａｐｔｅｒ 以便定向重组到载体上．ｃＤＮＡ 经过ＸｈｏＩ消化和分级分离后，带有ＸｈｏＩ和ＥｃｏＲＩ粘性末端的ｃＤＮＡ 定向重组到λＺＡＰ表达载体的ＸｈｏＩ和ＥｃｏＲＩ位点上．经体外包装，重组的噬菌体转导宿主菌ＸＬ１Ｂｌｕｅ ＭＲＦ，最终获得滴度为４－５ ×１０５ ｐｆｕ／ｕｇ 的λＺＡＰ 表达ｃＤＮＡ 文库．通过差异筛选法和质膜双向电泳验证了缺铁和加铁条件下ｃＤＮＡ 展开更多

关键词 铁胁迫cDNA文库 差异筛选 质膜蛋白 玉米 构建

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菌落PCR差异筛选cDNA片段文库 被引量：3

11

作者 李守新 刘尚勤 雷小妹 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期642-643,共2页

目的探索菌落PCR差异筛选cDNA片段文库的可行性。方法在用抑制性PCR构建cDNA片段文库的同时,分别制备正、反向减法杂交探针并用碱性磷酸酶直接标记。随后用这些探针与菌落PCR的产物杂交,从而筛选出差异表达克隆,并再次用RT-PCR证实其差... 目的探索菌落PCR差异筛选cDNA片段文库的可行性。方法在用抑制性PCR构建cDNA片段文库的同时,分别制备正、反向减法杂交探针并用碱性磷酸酶直接标记。随后用这些探针与菌落PCR的产物杂交,从而筛选出差异表达克隆,并再次用RT-PCR证实其差异表达。结果建立的菌落PCR反应体系经济实用,方法稳定,并成功地从500个克隆中筛选出差异表达克隆。结论菌落PCR可用于差异筛选构建于质粒载体的cDNA片段文库。 展开更多

关键词 菌落PCR 差异筛选 减法杂交探针

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水稻“9311”突变体库的氯酸盐毒性筛选与分析 被引量：2

12

作者 刘石锋 陈倩 +2 位作者 洪广成 张汉马 秦小健 《重庆师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2019年第2期107-111,F0003,共6页

【目的】用氯酸盐筛选水稻(Oryza sativa)突变体库,分析氯酸盐对水稻的毒性。【方法】使用化学诱变剂甲基磺酸乙酯(Ethyl methanesulphonate,EMS)处理水稻材料"9311"种子,构建完成了水稻"9311"突变体库。【结果】... 【目的】用氯酸盐筛选水稻(Oryza sativa)突变体库,分析氯酸盐对水稻的毒性。【方法】使用化学诱变剂甲基磺酸乙酯(Ethyl methanesulphonate,EMS)处理水稻材料"9311"种子,构建完成了水稻"9311"突变体库。【结果】通过水培法并利用氯酸盐的特性对诱变材料进行筛选,共筛选了2 361份诱变M2代材料,且与野生型相比获得了40份对氯酸盐表现差异敏感的材料。【结论】研究结果为进一步的材料创建与相关基因克隆提供了基础,也为水稻硝酸盐吸收与转化相关分子机理的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 水稻 突变体 氯酸盐 差异筛选

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小鼠BTB/锌指结构新基因Bsg6的克隆及表达谱分析 被引量：2

13

作者 慈宏亮 李昱华 +1 位作者 陈微 李亦平 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期117-123,共7页

Bsg6(brain specific gene 6)是用消减差异筛选的方法克隆的小鼠头部特异表达新基因.Bsg6基因cDNA长3 871 bp,编码一个670个氨基酸残基的蛋白,GenBank登录号AY635051,位于小鼠第4号染色体,由2个外显子构成.Bsg6蛋白含有一个N端BTB(Broad... Bsg6(brain specific gene 6)是用消减差异筛选的方法克隆的小鼠头部特异表达新基因.Bsg6基因cDNA长3 871 bp,编码一个670个氨基酸残基的蛋白,GenBank登录号AY635051,位于小鼠第4号染色体,由2个外显子构成.Bsg6蛋白含有一个N端BTB(Broad-complex,Tramtrack,andBric-a-brac)结构域和两个C端C2H2型锌指结构域.小鼠Bsg6蛋白与其在人类和鸡中同源蛋白的同源性分别为86.2%和79.1%.Bsg6在小鼠胚胎中的表达具有一定动态性,在E8.5的小鼠胚胎中,Bsg6主要在前脑和神经管表达.在E9.5的小鼠胚胎中,Bsg6的表达明显增强并主要集中在前脑的端脑部.Bsg6在E10.5小鼠胚胎端脑的表达出现了下降,但是在中脑和后脑的表达增加,此外,Bsg6 mRNA的表达还出现在肢芽和尾部.在HH10期的鸡胚中,Bsg6主要在头部和神经管前端表达.Northern杂交结果显示,Bsg6在很多小鼠成体组织中没有表达,但是在破骨细胞瘤中高表达.Bsg6的表达谱提示,Bsg6可能是在器官形成期对脑的发育起到重要作用的转录因子,而且其表达受到严格的调控,此外Bsg6还可能与肿瘤的发生有关. 展开更多

关键词 Bsg6基因 差异筛选 锌指蛋白 BTB结构域

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差异筛选肝癌凋亡细胞cDNA文库的简便方法

14

作者 马运国 王文亮 +1 位作者 张桐 杨帆 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期370-372,共3页

目的差异筛选人肝癌凋亡细胞ｃＤＮＡ文库。方法消减杂交和点杂交相结合的噬菌斑原位杂交法筛选ｃＤＮＡ文库，首先采用（－）ｃＤＮＡ探针杂交，挑取（－）的噬菌斑克隆，再用（－）和（＋）两种ｃＤＮＡ探针与初筛出的噬菌斑克隆杂交... 目的差异筛选人肝癌凋亡细胞ｃＤＮＡ文库。方法消减杂交和点杂交相结合的噬菌斑原位杂交法筛选ｃＤＮＡ文库，首先采用（－）ｃＤＮＡ探针杂交，挑取（－）的噬菌斑克隆，再用（－）和（＋）两种ｃＤＮＡ探针与初筛出的噬菌斑克隆杂交的差异筛选方法。结果得到４个充分孤立的噬菌斑克隆，其插入片段长度为１．５ｋｂ左右。结论该方法简便、快速，是差异筛选ｃＤＮＡ文库的一种较为可行的简便方法。 展开更多

关键词 肝肿瘤 CDNA文库 差异筛选 细胞凋亡

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兔早期胚泡特异肽的cDNA克隆

15

作者 杨卫民 沈孝宙 +1 位作者 曹咏清 张致一 《中国科学（B辑）》 CSCD 北大核心 1991年第3期253-258,共6页

从家兔受精后第6天(着床前)的早期胚泡构建cDNA文库,经阶段特异分子杂交筛选,克隆了仅在此时期表达的9种胚泡特异肽类的cDNA对其中一种丰度较高的cDNA克隆进行了研究,测出其编码区含有285碱基对,5'和3'侧翼区各有132和170碱基对... 从家兔受精后第6天(着床前)的早期胚泡构建cDNA文库,经阶段特异分子杂交筛选,克隆了仅在此时期表达的9种胚泡特异肽类的cDNA对其中一种丰度较高的cDNA克隆进行了研究,测出其编码区含有285碱基对,5'和3'侧翼区各有132和170碱基对.经DNA序列分析,推导出一种分泌性多肽的一级结构,由75个氨基酸组成.计算机分析显示它与迄今报道的所有基因和蛋白在结构上无任何同源性. 展开更多

关键词 CDNA克隆 兔 胚泡 多肽 差异筛选

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差异筛选与基因克隆

16

作者 朱玉贤 《科学中国人》 2003年第7期44-45,共2页

1995年,科学家首次发表研究报告,证实受发育过程特异性诱导表达的启动子指导细菌异戊烯转移酶基因,导致转基因植物发育后期细胞分裂素含量显著提高,从而延缓植物叶片的衰老过程.1999年,又有人发表论文证实用上述启动子指导同源域转录调... 1995年,科学家首次发表研究报告,证实受发育过程特异性诱导表达的启动子指导细菌异戊烯转移酶基因,导致转基因植物发育后期细胞分裂素含量显著提高,从而延缓植物叶片的衰老过程.1999年,又有人发表论文证实用上述启动子指导同源域转录调控因子基因Knotted1表达,也能明显延缓烟草叶片的衰老.与此同时,有学者撰文称在番茄中过量表达拟南芥己糖酸化酶基因,导致转基因植物衰老进程加快.此后,不少作者相续报道了不同基因或不同成份对植物生长发育的调控作用. 展开更多

关键词 基因克隆 转基因植物 cDNA差示分析法 PPF1基因 细菌异戊烯转移酶基因 细胞分裂素 差异筛选 G2豌豆 生长发育

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浸润性突眼相关基因/cDNA片段的筛选

17

作者 郑建国 张英 +1 位作者 苏从冶 龚日祥 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第2期383-387,共5页

筛选浸润性突眼相关基因／cDNA片段，为探究浸润性突眼发生的分子机制莫定基础。采用抑制消减杂交技术，以甲亢伴突眼患者甲状腺组织的cDNA为tester，甲亢不伴突眼患者甲状腺组织的cDNA为driver，经过两轮消减杂交和两轮PCR，获得二者... 筛选浸润性突眼相关基因／cDNA片段，为探究浸润性突眼发生的分子机制莫定基础。采用抑制消减杂交技术，以甲亢伴突眼患者甲状腺组织的cDNA为tester，甲亢不伴突眼患者甲状腺组织的cDNA为driver，经过两轮消减杂交和两轮PCR，获得二者之间的消减PCR产物，将产物插入至pCR2．1载体，转化感受态细胞E．coli DH5α，进行蓝白筛选。随机挑取48个白色菌落，经过Colony PCR，其中有1个转化子的扩增产物为双带，其余均为0．2～2kb之间的单一条带。将Colony PCR产物点样于同一尼龙膜上，一式两份，分别与地高辛标记的甲亢伴突眼和甲亢不伴突眼患者甲状腺组织的cDNA探针杂交。以与甲亢伴突眼患者甲状腺组织的cDNA探针有杂交信号，而与甲亢不伴突眼患者甲状腺组织的cDNA探针无杂交信号或信号明显弱的转化子为阳性克隆。筛选的阳性率为50％左右，阳性克隆中的插入片段即是与浸润性突眼相关的基因／cDNA片段。 展开更多

关键词 甲亢 浸润性突眼 抑制消减杂交 差异筛选

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不同品种水稻苗期硝态氮吸收与利用效率差异的筛选及研究 被引量：13

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作者 肖娟 严欢欢 +4 位作者 杨永清 梁永书 南文斌 张汉马 秦小健 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1941-1949,共9页

在人工气候箱培养条件下,对来自不同地域的60个水稻品种在高氮和低氮水平条件下培养,通过对其生物量以及氮含量进行测定将其分成4种类型,即高氮高生物量型、高氮低生物量型、低氮高生物量型、低氮低生物量型。经大规模的初步筛选,我们... 在人工气候箱培养条件下,对来自不同地域的60个水稻品种在高氮和低氮水平条件下培养,通过对其生物量以及氮含量进行测定将其分成4种类型,即高氮高生物量型、高氮低生物量型、低氮高生物量型、低氮低生物量型。经大规模的初步筛选,我们筛选出8种在生物量、氮素含量等方面差异比较明显的水稻品种。对8份水稻材料进一步分析发现,不同籼稻与粳稻水稻品种在氮的吸收与利用方面存在显著差异,尤其在氮的吸收效率方面籼稻品种明显高于粳稻品种,如‘南恢511’明显高于‘14CQ05’。通过设置不同的氮素水平,结合不同品种的生物量变化以及氮吸收利用的差异鉴定出了苗期氮利用高效的品种,如‘南恢511’在高氮下生物量、氮吸收和利用等方面都最高,但是在低浓度下不明显,可认为是高氮高效型品种;而‘14CQ011’在两种氮浓度下,从生物量、氮含量以及吸收利用方面都表现最差,可初步认为是氮低效品种。另外,通过相关指标关联分析发现无论在高氮和低氮条件下植株干重与氮素吸收效率都呈极显著正相关性,而地上部氮含量和地下部氮含量与氮素利用效率呈极显著负相关性,这为今后的氮高效育种提供一定的理论支撑。 展开更多

关键词 水稻 苗期差异筛选 氮素的吸收与利用 氮高效品种

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肥胖症脂肪组织表达蛋白差异筛选初步研究 被引量：3

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作者 尹晓 刘志芬 +3 位作者 王璇 骆天红 李果 罗敏 《实用医学杂志》 CAS 2003年第11期1193-1195,共3页

目的 :比较肥胖症患者和非肥胖对照者脂肪组织蛋白表达的差异。方法 :采用蛋白双向凝胶电泳技术分离脂肪组织总蛋白 ,PD Quest软件分析电泳结果 ,选择有显著差异的蛋白点做介质辅助的激光解吸飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)分析。结果 :... 目的 :比较肥胖症患者和非肥胖对照者脂肪组织蛋白表达的差异。方法 :采用蛋白双向凝胶电泳技术分离脂肪组织总蛋白 ,PD Quest软件分析电泳结果 ,选择有显著差异的蛋白点做介质辅助的激光解吸飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)分析。结果 :两种脂肪组织标本大部分蛋白点匹配 ,经MALDI TOF MS分析和数据库搜索有一个未知蛋白和两个已知序列蛋白在两种脂肪组织的表达差异有显著性。结论 :双向凝胶电泳技术和MALDI TOF MS是进行脂肪组织蛋白质组研究的有效手段 ,通过分析这些表达有差异的蛋白质可以进一步明确肥胖症的病因 。 展开更多

关键词 肥胖症 脂肪组织 表达 蛋白差异筛选

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异双聚体电泳及其在遗传学差异筛选中的应用 被引量：1

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作者 温博贵 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期39-40,共2页

介绍了一种灵敏、简便、快速测定双链PCR产物或DNA片断单个碱基差异的方法。该法借助常规PAGE电泳，能区分出有单个碱基错配而发生构型改变的异双聚体与碱基互补配对的同源双聚体双链DNA分子；并判断出序列中碱基错配的百分率。

关键词 异双聚体 遗传学差异筛选 电泳

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