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用差异显示PCR法筛选与血管外膜细胞表型转化相关的基因 被引量:11
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作者 孙爱军 高平进 +2 位作者 刘建军 姬开达 朱鼎良 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期435-439,共5页
为筛选血管外膜成纤维细胞 (adventitialfibroblast,AF)与肌成纤维细胞 (myofibroblast,MF)间表型转化有关的基因 ,实验建立了大鼠胸主动脉AF和MF两种细胞模型 ,用差异显示聚合酶链反应 (DD PCR)技术获得表达差异片段 ,对差异片段进行... 为筛选血管外膜成纤维细胞 (adventitialfibroblast,AF)与肌成纤维细胞 (myofibroblast,MF)间表型转化有关的基因 ,实验建立了大鼠胸主动脉AF和MF两种细胞模型 ,用差异显示聚合酶链反应 (DD PCR)技术获得表达差异片段 ,对差异片段进行克隆和测序分析 ,并用定量PCR和Northernblot对差别显示结果进行验证。用反义核酸转染技术观察骨桥蛋白 (osteopontin ,OPN)对AF迁移的影响。结果表明 ,两种表型细胞存在明显的基因表达差异 ,其中一个在MF下调的差异片段与GenBank中NADH脱氢酶亚单位 5 (NADHdehydrogenasesubunit 5 ,Nd5 )基因高度同源。另一个在MF上调的差异片段与OPN基因同源。上述差异表达结果被定量PCR及Northernblot证实。此外还有 4个表达序列标志 (expressedsequence tag,EST)在GenBank中未查到同源序列。反义OPN寡脱氧核苷酸可抑制AF的迁移活动。结果提示 ,AF转化为MF可能与ND5基因下调、OPN上调及其它未知基因的表达改变有关。应用反义技术适度抑制OPN表达在防治血管重塑中具有重要作用。 展开更多
关键词 血管外膜成纤维细胞 肌成纤维细胞 差异显示聚合酶链反应 反义技术 血管重塑
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Identification of differentially expressed genes in dorsal root ganglion in early diabetic rats
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作者 朱清 顾锦华 +1 位作者 朱红艳 徐济良 《Neuroscience Bulletin》 SCIE CAS CSCD 2008年第4期219-224,共6页
Objective To screen and identify differentially expressed genes in the dorsal root ganglion (DRG) in early experimental diabetic rats. Methods Diabetic model rats were induced by single intraperitoneal injection of ... Objective To screen and identify differentially expressed genes in the dorsal root ganglion (DRG) in early experimental diabetic rats. Methods Diabetic model rats were induced by single intraperitoneal injection of streptozotocin (STZ). At the second week after STZ injection, the sensory nerve conduction velocities (SNCV) of sciatic nerve were measured as an indicator of neuropathy. The technique of silver-staining mRNA differential display polymerase chain reaction (DD-PCR) was used to detect the levels of differentially expressed genes in rat DRG. The cDNA fragments that displayed differentially were identified by reverse-hybridization, cloned and sequenced subsequently, and then confirmed by Northern blot. Results The SNCV in the diabetic model group [n = 9, (45.25±10.38) m/s] reduced obviously compared with the control group [n = 8, (60.10± 11.92) m/s] (P 〈 0.05). Seven distinct cDNA clones, one was up-regulated gene and the others were downregulated ones, were isolated by silver-staining mRNA differential display method and confirmed by Northern blot. According to the results of sequence alignment with GenBank data, majority of the clones had no significant sequence similarity to previously reported genes except only one that showed high homology to 6-pyruvoyl-tetrahydropterin synthase mRNA (accession No., BC059140), which had not been reported to relate to diabetic neuropathy. Conclusion These differentially expressed genes in the diabetic DRG may contribute to the pathogenesis of diabetic peripheral neuropathy. 展开更多
关键词 differential display polymerase chain reaction silver staining MRNA dorsal root ganglion DIABETES RAT
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抗药性基因克隆技术研究进展
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作者 陈长军 周明国 《农药》 CAS 北大核心 2004年第2期56-60,共5页
综述了近几年来抗药性基因克隆技术的研究进展。对RAPD-PCR、单链构象多态性(SSCP)、差异显示PCR(DDRT-PCR)、代表性差异分析技术(representational difference analysis, RDA)、抑制消减杂交法(suppression subtractive hybridization,... 综述了近几年来抗药性基因克隆技术的研究进展。对RAPD-PCR、单链构象多态性(SSCP)、差异显示PCR(DDRT-PCR)、代表性差异分析技术(representational difference analysis, RDA)、抑制消减杂交法(suppression subtractive hybridization, SSH)、获得全长基因的消减杂交法(full length geneobtainable subtractive hybridization)、基因芯片技术、基因表达系统分析(serial analysis of gene expression,SAGE)的技术和从蛋白质水平克隆抗药性基因的双向电泳技术(two-dimensional gel electrophoresis)、噬菌体表面全套抗体库技术(phage display antibody repertoire library technique)、核糖体展示抗体库技术等方法的特点、优缺点及适用性进行了评述。 展开更多
关键词 抗药性基因 基因克隆 RAPD-PCR 构象多态性 差异显示聚合酶链反应 抑制消减杂交法 基因芯片技术 基因表达系统分析
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紫外线作用肿瘤细胞后基因表达谱的变化
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作者 陈果 冯莉 +5 位作者 王朝莉 李丽 任碧轩 张大蓉 唐恩洁 敬保迁 《川北医学院学报》 CAS 2007年第3期219-221,共3页
目的分析紫外线(UV)对人原发性肝癌细胞株基因表达谱的影响。方法以限制片段差异显示聚合酶链反应(RFDD-PCR)技术分析紫外线照射人原发性肝癌细胞株前后基因表达谱的变化。结果获得表达序列标签共257条。其中差异表达序列标签116条,含... 目的分析紫外线(UV)对人原发性肝癌细胞株基因表达谱的影响。方法以限制片段差异显示聚合酶链反应(RFDD-PCR)技术分析紫外线照射人原发性肝癌细胞株前后基因表达谱的变化。结果获得表达序列标签共257条。其中差异表达序列标签116条,含开启表达序列标签38条,关闭表达序列标签23条,表达增强序列标签40条,表达降低序列标签15条。结论紫外线可引起人原发性肝癌细胞株基因表达谱发生变化,这些表达发生变化的基因在肿瘤生物学中的作用有待进一步研究。 展开更多
关键词 紫外线 肝癌细胞 限制片段差异显示聚合酶链反应
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精子细胞中基因表达谱的研究 被引量:8
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作者 毛向明 马文丽 +1 位作者 彭翼飞 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第3期200-202,共3页
目的研究成熟精子细胞中的基因表达。方法采用限制性显示PCR(RD-PCR)获得大量正常和异常精子细胞中基因表达序列标签(EST)并以表达谱图的方式显示出来。结果通过RD-PCR技术得到大量正常精子细胞和异常精子细胞的EST及部分差异表达EST。... 目的研究成熟精子细胞中的基因表达。方法采用限制性显示PCR(RD-PCR)获得大量正常和异常精子细胞中基因表达序列标签(EST)并以表达谱图的方式显示出来。结果通过RD-PCR技术得到大量正常精子细胞和异常精子细胞的EST及部分差异表达EST。结论RD-PCR技术既能针对已知基因又能针对未知基因,快速收集大量长度适宜、大小均一、适于芯片制备的EST,较通过cDNA文库等方法得到靶基因片段具有独特的优势。关键词:精子;基因表达谱; 展开更多
关键词 精子 基因表达谱 限制性差异显示-聚合酶链反应 RD-PCR
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单眼视觉剥夺大鼠视皮质基因表达差异的研究 被引量:3
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作者 丁沛 徐磊 +1 位作者 李学礼 王尧 《中国神经科学杂志》 CSCD 2001年第1期24-26,共3页
本实验利用差异显示反转录PCR(DDRT PCR)技术分析单眼视觉剥夺大鼠左、右侧视皮质基因差异表达情况 ,并通过反Northern杂交去除假阳性筛选差异表达基因片段。最终获得 3个差异表达基因片段。通过克隆、测序和同源性比较发现 ,其中一个片... 本实验利用差异显示反转录PCR(DDRT PCR)技术分析单眼视觉剥夺大鼠左、右侧视皮质基因差异表达情况 ,并通过反Northern杂交去除假阳性筛选差异表达基因片段。最终获得 3个差异表达基因片段。通过克隆、测序和同源性比较发现 ,其中一个片段 5’端的 166个碱基与人KIAA0 541蛋白的mRNA编码区的166bp区段有 83%的同源性。 展开更多
关键词 单眼视觉剥夺 视皮质 差异显示反转录聚合酶链反应 表达序列标签 大鼠
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肝郁证模型大鼠海马内差异表达片段生物信息学分析 被引量:3
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作者 孛立甲 金光亮 《吉林中医药》 2012年第5期507-509,共3页
目的:通过对肝郁证模型大鼠的海马内差异表达片段的分析,探讨生物信息学在证候研究领域的应用。方法:对实验前期分离出的差异表达片段进行生物信息学分析。首先利用UniGene数据库进行ESTs聚类,使用软件对ESTs进行拼接,完成拼接之后,对... 目的:通过对肝郁证模型大鼠的海马内差异表达片段的分析,探讨生物信息学在证候研究领域的应用。方法:对实验前期分离出的差异表达片段进行生物信息学分析。首先利用UniGene数据库进行ESTs聚类,使用软件对ESTs进行拼接,完成拼接之后,对重新组装的contig进行注释。结果:差异表达的1号片段与12号片段分别代表了GSK3b与St3gal5这两个基因转录产物;进一步将GSK3b与St3gal5的功能加以分析后,提示这两个基因产物可能与肝郁证的发生、发展相关。结论:海马是逍遥散调节慢性不可预知温和应激的重要作用部位,众多基因参与了逍遥散对慢性应激的调节,生物信息学方法在证候研究方面有重要的意义。 展开更多
关键词 慢性不可预知温和应激 肝郁证 逍遥散 生物信息学 差异显示反转录聚合酶链反应
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K562细胞向红系分化相关EST的鉴别与分析
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作者 余佳 张俊武 +1 位作者 彭瀚 陈等 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期150-154,共5页
目的 鉴别并获取与 K562细胞向红系分化相关的表达序列标签 (expressed sequence tags,EST)。方法利用改进的差异显示反转录聚合酶链反应 (differential display reverse transcription polym erase chain reaction DDRT-PCR )方法,分... 目的 鉴别并获取与 K562细胞向红系分化相关的表达序列标签 (expressed sequence tags,EST)。方法利用改进的差异显示反转录聚合酶链反应 (differential display reverse transcription polym erase chain reaction DDRT-PCR )方法,分析诱导前及用氯高铁血红素 (hem in)诱导 36h 后 K 562细胞的差异表达 cDNA 片段,挑选其中差异明显的cDNA 片段,经克隆、测序和基因信息学分析,挑选代表新序列或有一定功能线索的差异表达 EST 进行 Northern 印迹分析。结果 获得诱导前后 K 562细胞的差异表达 cDNA 片段 60条,其中 38条表达上调,22条表达下调。对 40个差异表达明显的 cDNA 片段的生物信息学分析说明,23个 EST 与 GenBank 中已知序列有 95%以上同源性,10个为只与 dbEST 有高度同源的序列,7个未发现同源序列;进行 Northern 印迹分析的 8个差异表达 EST 中,6个 EST 的杂交结果与 DDRT-PCR 显示的差异表达状况一致。结论 改进的 DDRT-PCR 方法能够较好地克服假阳性问题,这些差异表达 EST 的获得为进一步研究红系分化的分子机制和控调网络提供了一定线索。 展开更多
关键词 差异显示反转录聚合酶链反应 K562细胞 细胞分化 表达序列标签
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差异显示逆转录PCR鉴定约氏疟原虫红前期发育相关基因及其特征分析
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作者 张锡林 宋蓓 +1 位作者 吕扬 何谐 《国际医学寄生虫病杂志》 CAS 2009年第1期4-9,共6页
目的寻找约氏疟原虫红前期发育相关基因,进行序列分析并推测其功能。方法分别提取约氏疟原虫感染大鼠(IL)和正常大鼠(UL)肝脏总RNA,根据疟原虫基因A+T含量高(〉70%)的特点,设计可选择性扩增约氏疟原虫基因的G+C含量为40%... 目的寻找约氏疟原虫红前期发育相关基因,进行序列分析并推测其功能。方法分别提取约氏疟原虫感染大鼠(IL)和正常大鼠(UL)肝脏总RNA,根据疟原虫基因A+T含量高(〉70%)的特点,设计可选择性扩增约氏疟原虫基因的G+C含量为40%的引物,采用差异显示RT—PCR(differential display RT—PCR,DD—PCR)技术进行扩增,筛选差异片段,经TA克隆后测序并进行序列分析。结果获得6个约氏疟原虫红前期发育相关基因PyHs4、PyHs5、PyHs6、PyHs7、PyHs8、PyHs9;其中PyHs4与约氏疟原虫乙酰葡糖胺磷酸变位酶(phosphoacetylglucosamine mutase,AGM,ID:PY02130)基因具有91%的相似性,PyHs5与约氏疟原虫红细胞膜蛋白3(erythrocyte membrance prontein3,PyEMP3,ID:PY05500)基因具有100%的同源性,PyHs6、PyHs7、PyHs8、PyHs9经Blast序列分析为疟原虫基因,但功能未知。结论应用DD-PCR技术成功扩增了约氏疟原虫红前期发育相关基因,为进一步进行重组表达、功能及疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 疟原虫 约氏 差异显示逆转录聚合酶链反应 红前期 差异基因
原文传递
大鼠睾丸减数分裂相关基因的初步筛选
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作者 刘德瑜 吴燕婉 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2006年第10期883-887,共5页
目的:比较成年大鼠睾丸生精小管处于减数分裂期的发育片段和睾丸间质细胞所表达基因的差异,初步筛选出与减数分裂相关的基因,为进一步研究减数分裂相关基因对精子发生的调控奠定基础。方法:运用在透射光解剖显微镜下区分和显微分割的方... 目的:比较成年大鼠睾丸生精小管处于减数分裂期的发育片段和睾丸间质细胞所表达基因的差异,初步筛选出与减数分裂相关的基因,为进一步研究减数分裂相关基因对精子发生的调控奠定基础。方法:运用在透射光解剖显微镜下区分和显微分割的方法,将成年大鼠新鲜睾丸生精小管第X III^I期处于减数分裂阶段的片段分离出来,同时分离睾丸间质细胞,将二者进行mRNA差异显示逆转录聚合酶链反应(DDRT-PCR)分析,所得差异片段进行纯化回收,然后进行反向斑点杂交。结果:经mRNA差异显示,第X III^I期生精小管片段共回收到7个差异cDNA片段,而间质细胞共回收到9个差异cDNA片段。经反向斑点杂交,共获得11个初步鉴定的特异表达增加的差异cDNA片段,片段大小为200~500 bp,其中6个从第X III^I期生精小管片段获得,5个从间质细胞获得。结论:这些差异片段可作为睾丸减数分裂表达的序列标签进行更深入地研究。 展开更多
关键词 睾丸 生精小管 间质细胞 差异显示逆转录聚合酶链反应 亚克隆 大鼠
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EGF作用下人脑胶质瘤细胞生长抑制的机理
11
作者 王欣 周明锐 +1 位作者 黄秉仁 蔡良琬 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期139-144,共6页
目的 克隆、测序胶质细胞瘤 BT325细胞在生长抑制量表皮生长因子 (epithelial growth factor EGF)作用下差异表达的基因,了解 BT325细胞生长抑制的分子机制。方法 在生长抑制量 EGF 作用下,用差异显示反转录聚合酶链反应 (differential ... 目的 克隆、测序胶质细胞瘤 BT325细胞在生长抑制量表皮生长因子 (epithelial growth factor EGF)作用下差异表达的基因,了解 BT325细胞生长抑制的分子机制。方法 在生长抑制量 EGF 作用下,用差异显示反转录聚合酶链反应 (differential display reversed transcription polym erase chain reaction DDRT-PCR ) 技 术 分析 人 胶 质 细胞瘤 BT325细胞表达 水 平 明显 差 异 的 cDNA , 对差 异 显 示 基因 进 行 序 列 测定 和 同 源 比较 , 并 用 Dot blot及 Northernblot等方法进行验证。结果 在 EGF 作用下,生长抑制的胶质瘤细胞中出现一些上调和下调表达的 cDNA 片段。克隆、分离了 6个表达明显上调的 ESTs,1个序列为新的基因片段,另 5个与已知基因有不同程度的同源,其中 1个与转醛缩酶基因的编码区同源。新近的研究已发现,转醛缩酶与细胞凋亡有关。结论 高剂量 EGF 可诱导 BT325中许多基因表达水平的改变,EGF 抑制 BT325细胞生长可能与促进转醛缩酶基因的表达而诱导细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 胶质细胞瘤BT325 差异显示反转录聚合酶链反应 表皮生长因子 基因表达
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mRNA差异显示技术及在毒理学研究中的应用 被引量:3
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作者 卫秦芝 庄志雄 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期362-365,共4页
关键词 MRNA差异显示技术 毒理学 mRNA差异显示反转录聚合酶链反应PCR技术
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