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巨噬细胞极化在坏死性小肠结肠炎发病过程中的作用
1
作者 陶佳鑫 毛靖 苏艳伟 《中国小儿急救医学》 CAS 2021年第12期1047-1053,共7页
目的探讨巨噬细胞极化在新生儿坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)发病过程中的作用。方法选用SPF级C57BL/6小鼠建立NEC小鼠模型,将早产小鼠随机分为对照组(n=10)和NEC组(n=19)。对照组小鼠由母鼠母乳喂养,NEC组小鼠给予... 目的探讨巨噬细胞极化在新生儿坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)发病过程中的作用。方法选用SPF级C57BL/6小鼠建立NEC小鼠模型,将早产小鼠随机分为对照组(n=10)和NEC组(n=19)。对照组小鼠由母鼠母乳喂养,NEC组小鼠给予缺氧、冷刺激、高渗喂养和脂多糖处理。小鼠出生后96 h收集十二指肠下端至结肠部肠道组织。HE染色观察肠道组织形态;FD70灌胃检测肠道屏障功能;免疫荧光检测肠上皮Pan-keratin表达;原位末端转移酶标记(TUNEL)染色检测肠道上皮细胞凋亡;Western blot检测巨噬细胞极化相关指标CD86和CD206的蛋白表达水平;流式细胞术检测肠道M1型、M2型巨噬细胞比例;RT-PCR检测细胞因子粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-10、IL-12的mRNA表达水平。结果与对照组相比,NEC组小鼠存活率显著降低(100.0%比36.8%),肠道组织出现不同等级损伤,肠上皮完整性遭到破坏,肠上皮细胞凋亡增多(1.9%±1.1%比7.6%±2.6%,P<0.05),肠道通透性增加(1.53±0.80比14.32±1.27,P<0.05)。Western blot结果显示NEC组CD86蛋白表达上升(1.0±0.01比1.5±0.10,P<0.05),CD206蛋白表达下降(1.0±0.01比0.6±0.05,P<0.05);流式细胞学结果显示NEC组CD68^(+)CD86^(+)M1型巨噬细胞比例增加(1.90%±0.19%比10.20%±0.38%,P<0.05),CD68^(+)CD206^(+)M2型巨噬细胞比例减少(5.8%±0.33%比3.7%±0.56%,P<0.05),促炎因子粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、IL-6、IL-12的mRNA(分别为1.00±0.05比1.80±0.17,1.00±0.13比2.00±0.58,和1.00±0.05比1.40±0.22,P<0.05)表达水平明显上升,抗炎因子IL-10的mRNA(1.00±0.22比0.00±0.01,P<0.05)表达水平明显下降。结论巨噬细胞向促炎型M1型极化在NEC的发病过程中起重要作用。 展开更多
关键词 坏死性小肠结肠炎 巨噬细胞极化促炎因子 抗炎因子
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人源Krt5促进斑马鱼成纤维细胞丝状伪足形成和伤口愈合
2
作者 陈凯星 尉菲菲 +1 位作者 吴文惠 严继舟 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS 北大核心 2023年第3期227-237,共11页
目的:探究斑马鱼角蛋白Krt5和M1/M2型巨噬细胞极化因子调节斑马鱼下颌和心脏芽基可塑性再生过程的机制。方法:在斑马鱼胚胎成纤维细胞PAC2中过表达人源Krt5,添加4个代表性的巨噬细胞极化因子蛋白。在检测蛋白表达情况后,免疫荧光法观察K... 目的:探究斑马鱼角蛋白Krt5和M1/M2型巨噬细胞极化因子调节斑马鱼下颌和心脏芽基可塑性再生过程的机制。方法:在斑马鱼胚胎成纤维细胞PAC2中过表达人源Krt5,添加4个代表性的巨噬细胞极化因子蛋白。在检测蛋白表达情况后,免疫荧光法观察Krt5和F-actin在PAC2细胞的分布变化;细胞划痕实验检测PAC2细胞迁移能力;转录组测序和免疫沉淀-质谱(IP-MS)分析Krt5调控网络。结果:Krt5围绕着细胞核,在胞浆成束成网分布并扩展到细胞质膜;过表达Krt5增加鬼笔环肽标记的F-actin代表的细胞丝状伪足形成,并加快细胞迁移愈合;转录组分析显示,Krt5明显增加Rac2/Rhov、NF-κB、Mylkb、Ifnphi1、IL-13和IL-11的转录,降低多个胶原蛋白、肌动蛋白和TGF-β家族基因转录,同时IL-1β、IL-4、IL-6和IL-10诱导处理总体上与Krt5作用一致;IP-MS证实Krt5与α-辅肌动蛋白(Actn1)和非肌肉肌球蛋白重链(Myh9b,Myh10)紧密结合。结论:Krt5可能通过与肌动蛋白相互作用激活Rac/Rho机制从而促进细胞生成丝状伪足,重塑细胞因子受体结构与巨噬细胞极化因子的相互作用。 展开更多
关键词 角蛋白5(Krt5) MRNA 巨噬细胞极化因子 丝状伪足 Myh9b Myh10 斑马鱼 成纤维细胞
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