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工业酵母抗逆机理研究进展 被引量:8
1
作者 赵美琳 诸葛斌 +2 位作者 陆信曜 宗红 施丁昌 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1155-1164,共10页
工业酵母利用木质纤维素等生物质资源发酵生产醇、酮、醛、酸等各种化合物,是解决人类面临的不可再生资源和能源危机的重要途径,这激发了人们对木质纤维素水解液为原料和环保节能型浓醪发酵技术的极度关注。然而高浓度底物、产物、渗透... 工业酵母利用木质纤维素等生物质资源发酵生产醇、酮、醛、酸等各种化合物,是解决人类面临的不可再生资源和能源危机的重要途径,这激发了人们对木质纤维素水解液为原料和环保节能型浓醪发酵技术的极度关注。然而高浓度底物、产物、渗透压、木质纤维素水解液中抑制性物质、发酵过程温度的提高均会抑制微生物生长代谢及发酵性能,这是发酵行业"瓶颈"问题。本文简述了渗透压、温度及抑制性物质对酵母细胞生长的危害,并从胞内稳态平衡、分子水平等方面着重叙述工业酵母对渗透压、温度及抑制性物质的抗逆机制研究进展。 展开更多
关键词 工业酵母 木质纤维素 浓醪发酵 抗逆机制
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Candida cloacae长链脂肪酸醇氧化酶基因的克隆与表达 被引量:3
2
作者 葛正龙 Antoni R.SLABAS 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期264-267,共4页
The cDNA encoding long-chain fatty-acid alcohol oxidase(FAO) was isolated by using RT-PCR method from Candida cloacae grown in a medium containing oleic acid. The cDNA of fatty-acid alcohol oxidase was cloned into exp... The cDNA encoding long-chain fatty-acid alcohol oxidase(FAO) was isolated by using RT-PCR method from Candida cloacae grown in a medium containing oleic acid. The cDNA of fatty-acid alcohol oxidase was cloned into expression plasmid pET17b under T7 promoter and then transformed into E.coli BL21/DE3. The molecular weight of the expressed protein was estimated to be approximately 64 kD by SDS-PAGE. The expressed protein had a specific catalytic activity of fatty-acid alcohol oxidase and its activity was 1090±116 U/ml medium. Northern blotting revealed that there was high expression of fao mRNA in Candida cloacae yeast grown in a medium containing oleic acid. 展开更多
关键词 工业酵母 Candida-cloacae 长链脂肪酸醇氧化酶 基因克隆 基因表达 ω氧化通路
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工业酵母菌株转化体系的建立 被引量:12
3
作者 王颖 鲍晓明 +3 位作者 杨国梁 史文龙 白凤武 曲音波 《工业微生物》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期6-11,共6页
本文通过敏感度实验测定了工业酵母菌株SK 1、SPSC 1、NAN 2 7在不同的培养基上对G4 18及Cu2 + 的敏感浓度 ,确定了 3株工业菌株转化子的筛选方法。针对它们各自的生理生化、遗传特性 ,用改进的醋酸锂完整细胞转化和原生质体转化两种方... 本文通过敏感度实验测定了工业酵母菌株SK 1、SPSC 1、NAN 2 7在不同的培养基上对G4 18及Cu2 + 的敏感浓度 ,确定了 3株工业菌株转化子的筛选方法。针对它们各自的生理生化、遗传特性 ,用改进的醋酸锂完整细胞转化和原生质体转化两种方法 ,分别建立了 3株菌的转化系统 ,初步解决了工业酵母菌株转化的问题 。 展开更多
关键词 工业酵母菌株 显性选择标记 转化体系 营养缺陷型
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基于基因组DNA诱变的遗传重组改造乙醇工业酵母的耐热性及发酵性能 被引量:15
4
作者 刘秀颖 何秀萍 +1 位作者 卢莹 张博润 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1049-1056,共8页
酵母菌是乙醇发酵工业中非常重要的微生物细胞工厂,发酵过程中温度变化胁迫一直是影响生产效率的重要瓶颈之一,选育具有广泛温度适应性的酵母菌株对提高发酵性能和降低生产成本具有重要意义。通过化学诱变和基于基因组DNA诱变的遗传重... 酵母菌是乙醇发酵工业中非常重要的微生物细胞工厂,发酵过程中温度变化胁迫一直是影响生产效率的重要瓶颈之一,选育具有广泛温度适应性的酵母菌株对提高发酵性能和降低生产成本具有重要意义。通过化学诱变和基于基因组DNA诱变的遗传重组技术对乙醇工业酵母菌的温度适应性进行改造,获得耐热性能和发酵性能得到提高的重组酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae T44-2。重组菌株T44-2的最高生长温度比原始菌株CE6提高了3℃,48℃和52℃热激处理1 h,重组菌株的细胞存活率分别是原始菌株的1.84和1.87倍。重组菌株在30℃~40℃范围内具有良好的糖醇转化率和乙醇产量,发酵200 g/L葡萄糖能够产生83.8~91.2 g/L乙醇。重组菌株在43℃和44℃发酵时乙醇产量仍分别有69.2 g/L和52.6 g/L,而此时原始菌株基本没有活性。研究结果为酿酒酵母在乙醇高温发酵中的应用奠定了基础,可极大降低冷却成本。 展开更多
关键词 乙醇工业酵母 遗传重组 温度适应性 耐热性
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工业酵母菌的遗传修饰研究进展及其应用前景 被引量:6
5
作者 郭雪娜 何秀萍 +1 位作者 傅秀辉 张博润 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2003年第10期47-51,共5页
简要概述工业酵母菌的遗传修饰研究进展 ,主要介绍适用于工业酵母菌遗传修饰的转化系统 ;敲除工业酵母基因工程菌细胞内不需要的基因的反选择技术 ;外源基因在工业酵母菌中克隆和表达的非自身克隆技术 ;工业酵母菌自身已有基因的克隆和... 简要概述工业酵母菌的遗传修饰研究进展 ,主要介绍适用于工业酵母菌遗传修饰的转化系统 ;敲除工业酵母基因工程菌细胞内不需要的基因的反选择技术 ;外源基因在工业酵母菌中克隆和表达的非自身克隆技术 ;工业酵母菌自身已有基因的克隆和表达的自身克隆技术等。此外 。 展开更多
关键词 遗传修饰 自克隆酵母 工业酵母 转化系统
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羟酸还原异构酶基因在啤酒工业酵母中的整合表达 被引量:4
6
作者 李艳 张博润 +1 位作者 王正祥 诸葛健 《无锡轻工大学学报(食品与生物技术)》 CSCD 北大核心 2003年第3期53-56,61,共5页
采用PCR技术扩增啤酒工业酵母QY中的羟酸还原异构酶基因ILV5,构建了整合载体YIp 5C,整合转化QY,通过铜抗性筛选转化子,所得的转化子的羟酸还原异构酶的活力明显高于对照菌株QY,转化子产生的双乙酰的量比原始菌株降低了40%.
关键词 羟酸还原异构酶 基因表达 啤酒工业酵母 双乙酞 整合载体 酶活力 转化子
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农产品加工业酵母废气处置新技术及应用
7
作者 徐尧 卢国炜 《工业安全与环保》 2022年第8期76-79,共4页
传统农产品加工业酵母尾气处理均采用湿法水膜除尘工艺,针对湿法工艺净化效率低、能耗高、无法达标排放、二次污染等缺点,首创性采用了顶部垂直进风袋式除尘方案,实现了该工艺烟气湿法洗涤改为干法过滤的“湿改干”工艺。从酵母烟气高... 传统农产品加工业酵母尾气处理均采用湿法水膜除尘工艺,针对湿法工艺净化效率低、能耗高、无法达标排放、二次污染等缺点,首创性采用了顶部垂直进风袋式除尘方案,实现了该工艺烟气湿法洗涤改为干法过滤的“湿改干”工艺。从酵母烟气高效气固分离新装置、样机研制与热态试验、气流分布模拟3个方面进行研究,并对其工业化应用案例进行了介绍分析。 展开更多
关键词 农产品加工业酵母废气 顶部垂直进风除尘器 湿改干 工业应用
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扣囊复膜孢酵母β-葡萄糖苷酶基因在工业酿酒酵母中的表达 被引量:10
8
作者 周衍 张梁 +1 位作者 王正祥 石贵阳 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期64-69,共6页
以工业酿酒酵母菌株(Saccharomyces cerevisiaeY)为研究对象,针对其复杂的生理生化遗传特性,建立了相对应的转化体系。以pRS41H质粒为基础载体,构建了含有工业酿酒酵母自身的gpd2启动子、终止子和扣囊复膜孢酵母的β-葡萄糖苷酶基因bgl... 以工业酿酒酵母菌株(Saccharomyces cerevisiaeY)为研究对象,针对其复杂的生理生化遗传特性,建立了相对应的转化体系。以pRS41H质粒为基础载体,构建了含有工业酿酒酵母自身的gpd2启动子、终止子和扣囊复膜孢酵母的β-葡萄糖苷酶基因bgl的重组质粒pRS-gb。电击转化进入工业酿酒酵母细胞,潮霉素抗性筛选,获得重组菌。该重组菌可以在以纤维二糖为唯一碳源的培养基中生长,培养36h,β-葡萄糖苷酶酶活达到0.967μ/ml。以纤维二糖为唯一碳源的酒精发酵中,酒精度可以达到0.92g/l。这对工业生产中利用纤维素为原料发酵生产酒精具有重要意义。 展开更多
关键词 工业酿酒酵母 潮霉素B 电击转化 Β-葡萄糖苷酶
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YDL080C和LEU2基因敲除对工业黄酒酵母异戊醇生成量的影响 被引量:9
9
作者 李童 孙军勇 +3 位作者 吴殿辉 李晓敏 谢广发 陆健 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第15期189-193,共5页
通过敲除生成途径中关键酶的编码基因,对异戊醇在工业黄酒酵母N85中的生成进行了研究。采用融合PCR技术,分别构建类丙酮酸脱羧酶基因(YDL080C)缺失组件"YDL080C-URA3-YDL080C"和β-异丙基苹果酸脱氢酶基因(LEU2)缺失组件"... 通过敲除生成途径中关键酶的编码基因,对异戊醇在工业黄酒酵母N85中的生成进行了研究。采用融合PCR技术,分别构建类丙酮酸脱羧酶基因(YDL080C)缺失组件"YDL080C-URA3-YDL080C"和β-异丙基苹果酸脱氢酶基因(LEU2)缺失组件"LEU2-URA3-LEU2",转化工业黄酒酵母N85尿嘧啶缺陷型单倍体Na-u(MATa ura3),获得单倍体工程菌Na-y和Na-l。将转化子与亲本分别进行实验室规模的黄酒发酵实验,结果 YDL080C缺失工程菌的异戊醇含量与亲本相比没有明显变化,说明类丙酮酸脱羧酶不是该途径关键酶;LEU2缺失工程菌的异戊醇含量降低16.16%,说明糖代谢途径存在,但只占小部分,而其他理化指标无明显差异。 展开更多
关键词 异戊醇 工业黄酒酵母 类丙酮酸脱羧酶基因 β-异丙基苹果酸脱氢酶基因 基因敲除
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絮凝基因FLO1及FLO1c高表达提高工业酿酒酵母乙酸耐受性及发酵性能 被引量:8
10
作者 杜昭励 程艳飞 +2 位作者 朱卉 何秀萍 张博润 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期231-241,共11页
乙酸是生物质乙醇发酵过程中酵母细胞面临的重要抑制剂之一,对细胞生长及发酵性能有强烈的抑制作用。增强酵母菌对乙酸胁迫的耐受性对提高乙醇产率具有重要意义。用分别带有完整絮凝基因FLO1及其重复序列单元C发生缺失的衍生基因FLO1c... 乙酸是生物质乙醇发酵过程中酵母细胞面临的重要抑制剂之一,对细胞生长及发酵性能有强烈的抑制作用。增强酵母菌对乙酸胁迫的耐受性对提高乙醇产率具有重要意义。用分别带有完整絮凝基因FLO1及其重复序列单元C发生缺失的衍生基因FLO1c的重组表达质粒分别转化非絮凝型工业酿酒酵母CE6,获得絮凝型重组酵母菌株6-AF1和6-AF1c。同时以空载体p YCPGA1转化CE6的菌株CE6-V为对照菌株。与CE6-V相比,絮凝酵母明显提高了对乙酸胁迫的耐受性。在0.6%(V/V)乙酸胁迫下,6-AF1和6-AF1c的乙醇产率分别为对照菌株CE6-V的1.56倍和1.62倍;在1.0%(V/V)乙酸胁迫下,6-AF1和6-AF1c的乙醇产率分别为对照菌株CE6-V的1.21倍和1.78倍。可见絮凝能力改造能明显提高工业酿酒酵母的乙酸胁迫耐受性及发酵性能,而且FLO1内重复序列单元C缺失具有更加明显的效果。 展开更多
关键词 工业酿酒酵母 絮凝基因FLO1c 乙酸胁迫耐受性 发酵性能
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黑曲霉糖化酶和木聚糖酶基因在工业用酿酒酵母中的共表达 被引量:7
11
作者 李海燕 毛爱军 +1 位作者 何永志 董志扬 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期494-501,共8页
构建了黑曲霉糖化酶、木聚糖酶基因双表达的酵母YIp型载体pNEW4,通过与G418抗性质粒共转化,将糖化酶和木聚糖酶基因表达元件整合到多倍体酒精生产用酵母S. cerevisiae2.346染色体上,获得了整合型分泌表达这两种酶的工业酿酒酵母工程菌株... 构建了黑曲霉糖化酶、木聚糖酶基因双表达的酵母YIp型载体pNEW4,通过与G418抗性质粒共转化,将糖化酶和木聚糖酶基因表达元件整合到多倍体酒精生产用酵母S. cerevisiae2.346染色体上,获得了整合型分泌表达这两种酶的工业酿酒酵母工程菌株GX11,研究了重组糖化酶和木聚糖酶在酵母工程菌中的表达及性质。 展开更多
关键词 糖化酶 木聚糖酶 整合表达 工业酿酒酵母工程菌
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热、碱及超声协同处理破碎工业酿酒酵母方法的建立
12
作者 邓瑞云 王琨瑶 +5 位作者 任鑫茹 刘荣军 崔志婧 曾凡力 李利 王震 《饲料研究》 CAS 北大核心 2024年第9期113-117,共5页
研究旨在提高工业酿酒酵母细胞破碎率及酿酒酵母的应用价值,探究了热、碱及超声协同处理对工业酿酒酵母ScY01菌株细胞破碎率的影响。结果显示:经热(沸水浴12.5 min)、碱(氢氧化钠添加量0.6 g)、超声破碎(超声功率450 W、辐射时间11 s、... 研究旨在提高工业酿酒酵母细胞破碎率及酿酒酵母的应用价值,探究了热、碱及超声协同处理对工业酿酒酵母ScY01菌株细胞破碎率的影响。结果显示:经热(沸水浴12.5 min)、碱(氢氧化钠添加量0.6 g)、超声破碎(超声功率450 W、辐射时间11 s、辐射间隔时间15 s、超声时间20 min)协同处理浓度为6 g/L的ScY01菌株,可使其破碎率达到91.78%。利用细胞破碎后释放蛋白量进行初步应用表征,使用协同处理方法较碱单独处理的总蛋白释放量提高11.54倍,较煮沸单独处理提高10.26倍,较超声波单独处理提高4.01倍。研究表明,该协同处理方法适用于模式酿酒酵母CEN.PK2-1c菌株,试验结果可为工业酿酒酵母细胞的高效破碎提供新方法。 展开更多
关键词 工业酿酒酵母 超声破碎 协同作用
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耐高温工业酿酒酵母的筛选和发酵性能
13
作者 杨大毅 刘文玉 《酿酒》 CAS 2024年第3期133-135,共3页
研究的主要目的是筛选发酵性能较为可靠的工业酿酒酵母,通过选用环境适应能力较强的工业酿酒酵母来控制发酵成本,提高工业生产的经济效益。将在生产线中被分离出的工业酿酒酵母作为研究菌株,主要采取实验室进化和基因组改造等方式对耐... 研究的主要目的是筛选发酵性能较为可靠的工业酿酒酵母,通过选用环境适应能力较强的工业酿酒酵母来控制发酵成本,提高工业生产的经济效益。将在生产线中被分离出的工业酿酒酵母作为研究菌株,主要采取实验室进化和基因组改造等方式对耐受能力较强的酿酒酵母菌株进行筛选。之后采取摇瓶验证的措施来验证其发酵性能,研究发现其中S.CD 12的发酵性能较为突出,与对照菌株相比,在工业物料中的发酵性能更好,为能进一步检验其发酵性能,针对其在不同工业物料中的发酵性能表现进行验证和综合评估。 展开更多
关键词 工业酿酒酵母 发酵性能 基因组改造
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工业酿酒酵母菌株KF-7对发酵抑制物的耐受性 被引量:5
14
作者 苟梓希 李云成 +2 位作者 谢采芸 汤岳琴 木田建次 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期248-255,共8页
木质纤维素原料预处理过程中产生的抑制物是燃料乙醇发酵的一大障碍,要求工业酿酒酵母菌株具有优秀的抑制物耐受能力.利用平板培养和批次发酵两种方式系统评价了弱酸抑制物(乙酸、甲酸、乙酰丙酸)、呋喃类抑制物[糠醛和5-羟甲基糠醛(HM... 木质纤维素原料预处理过程中产生的抑制物是燃料乙醇发酵的一大障碍,要求工业酿酒酵母菌株具有优秀的抑制物耐受能力.利用平板培养和批次发酵两种方式系统评价了弱酸抑制物(乙酸、甲酸、乙酰丙酸)、呋喃类抑制物[糠醛和5-羟甲基糠醛(HMF)]、酚类抑制物(香草醛、丁香醛、苯酚)对工业酿酒酵母菌株KF-7生长和发酵的影响.结果显示,菌株KF-7在批次发酵时细胞生长对抑制物的耐受性优于平板培养.低浓度的抑制物虽然对菌株的生长有一定的抑制作用,但对乙醇的产生具有一定的促进作用;高浓度抑制物显著抑制了菌株的生长,降低了葡萄糖的代谢速率,抑制了乙醇的产生.菌株KF-7对甲酸耐受能力强于乙酸,对乙酰丙酸的耐受能力较弱.在平板生长评价中,糠醛对菌株生长的抑制作用强于HMF,但在批次发酵过程中HMF的抑制作用强于糠醛;该菌株代谢糠醛的能力强于代谢HMF的能力.香草醛对菌株的抑制作用最强,丁香醛相对较弱.在秸秆水解液中,菌株KF-7也表现出良好的乙醇发酵性能.菌株KF-7无论在单一抑制物、混合抑制物或实际水解液条件下发酵,均能达到较高的乙醇收率.本研究表明,菌株KF-7适用于纤维素原料燃料乙醇工业化生产过程. 展开更多
关键词 燃料乙醇 工业酿酒酵母 发酵抑制物 批次发酵
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木糖还原酶基因的克隆及其在酿酒酵母中的定向整合 被引量:4
15
作者 高岚 夏黎明 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第3期450-455,共6页
酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)是重要的乙醇生产菌株,但因缺少戊糖代谢途径而不能利用木糖,为了改良工业酿酒酵母利用半纤维素发酵生产乙醇的性能,利用分子生物学技术构建能够利用木糖的基因工程酵母。选取酿酒酵母染色体的rDNA... 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)是重要的乙醇生产菌株,但因缺少戊糖代谢途径而不能利用木糖,为了改良工业酿酒酵母利用半纤维素发酵生产乙醇的性能,利用分子生物学技术构建能够利用木糖的基因工程酵母。选取酿酒酵母染色体的rDNA重复序列作为外源基因整合位点,依此构建多拷贝染色体整合型载体pUG-LR。采用融合表达策略扩增得到含有酿酒酵母乙醇脱氢酶启动子PADH和树干毕赤酵母木糖还原酶基因xyl1的融合序列,并将其插入pUG-LR载体中,构建成含遗传霉素G418抗性标记的同源重组质粒pUG-LR-XYL1。以工业酿酒酵母ZU-01为宿主,通过优化后的电穿孔法将重组质粒导入经缓冲液处理的酵母细胞,30℃培养。通过提高YEPX复筛培养基G418浓度,得到10株生长较快的优良性状转化子。在不含G418的YEPX培养基上传代8次以上,以转化子基因组DNA为模板,进行PCR检测,均可获得目的基因片段。研究结果表明:木糖还原酶基因xyl1已定向整合于ZU-01染色体DNA上并稳定遗传,为后续构建工业酿酒酵母的木糖代谢通路、利用木糖产酒精的重组菌株奠定了基础。 展开更多
关键词 工业酿酒酵母 木糖还原酶 基因克隆 定向整合
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后熟期短的酿酒酵母工程菌构建 被引量:4
16
作者 刘增然 张光一 +2 位作者 鞠国泉 冉会来 蔡亚男 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第8期83-86,共4页
借助质粒pBluescriptM13-,以淀粉酶基因(AMY)为筛选标记构建乙酰乳酸合成酶基因(ILV2)的重组整合质粒pMGI。用重组质粒pMGI所含ilv2∷AMY嵌合基因片段转化工业酿酒酵母菌Sc11,获得转化子(Sc11-ilv)。Sc-11-ilv不含细菌载体序列和酵母抗... 借助质粒pBluescriptM13-,以淀粉酶基因(AMY)为筛选标记构建乙酰乳酸合成酶基因(ILV2)的重组整合质粒pMGI。用重组质粒pMGI所含ilv2∷AMY嵌合基因片段转化工业酿酒酵母菌Sc11,获得转化子(Sc11-ilv)。Sc-11-ilv不含细菌载体序列和酵母抗药性标记,所表达的乙酰乳酸合成酶活性降低30%;模拟发酵实验表明Sc11-ilv发酵液的双乙酰含量降低70%,Sc11-ilv发酵性能保持不变,遗传稳定性为100%,可以比较安全地用于啤酒生产。 展开更多
关键词 工业酿酒酵母 α-乙酰乳酸合成酶基因(ILV2) 基因破坏 双乙酰 发酵
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高温高浓发酵工业啤酒酵母菌种的构建 被引量:3
17
作者 孙中贯 周波 +4 位作者 王孟祺 王亚平 邢爽 郭学武 肖冬光 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期522-534,共13页
高温高浓发酵技术作为一项新兴的啤酒生产技术,它为啤酒生产带来诸多利益的同时,也存在着发酵结束后酵母絮凝性下降、高级醇生成量过高等系列问题。为提高高温高浓发酵条件下酿酒酵母的絮凝性同时降低高级醇的合成能力,首先构建了以酿... 高温高浓发酵技术作为一项新兴的啤酒生产技术,它为啤酒生产带来诸多利益的同时,也存在着发酵结束后酵母絮凝性下降、高级醇生成量过高等系列问题。为提高高温高浓发酵条件下酿酒酵母的絮凝性同时降低高级醇的合成能力,首先构建了以酿酒酵母BAT2基因为整合位点过表达FLO5基因的菌株,重组菌株S6-BF的絮凝性达到67.67%,比出发菌株S6提高了29%,而高级醇生成量仅降低5.9%;进一步构建以BAT2基因为整合位点再次过表达FLO5基因的菌株,与出发菌株S6相比,重组菌株S6-BF2的絮凝性提高了63%,达到85.44%,高级醇生成量下降至159.58 mg/L,降低了9.0%;通过弱化线粒体支链氨基酸转氨酶(BAT1)的表达,高级醇的生成量得到进一步的降低,达到142.13 mg/L,比原始菌株S6降低了18.4%,同时重组菌株S6-BF2B1的絮凝性没有受到影响;风味物质的测定结果表明啤酒中醇酯比例较为合理。研究结果对工业啤酒酵母发酵后的沉降分离和提高啤酒风味品质有着重要的意义。 展开更多
关键词 高浓发酵 高温发酵 工业啤酒酵母 絮凝性 高级醇
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工业酿酒酵母重组β-1,3-1,4-葡聚糖酶部分酶学性质的研究 被引量:2
18
作者 张强 陈启和 何国庆 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第3期170-172,共3页
用刚果红法测定β-1,3-1,4-葡聚糖酶的酶活力,研究重组酿酒酵母(S.cerevisiae)菌株SC-βG分泌表达的重组β-1,3-1,4-葡聚糖酶的部分酶学性质,并与出发菌株枯草芽孢杆菌(B.subtilis)表达的原始酶的性质进行比较。结果表明,重组酶保持了... 用刚果红法测定β-1,3-1,4-葡聚糖酶的酶活力,研究重组酿酒酵母(S.cerevisiae)菌株SC-βG分泌表达的重组β-1,3-1,4-葡聚糖酶的部分酶学性质,并与出发菌株枯草芽孢杆菌(B.subtilis)表达的原始酶的性质进行比较。结果表明,重组酶保持了与原始酶相同的底物专一性。重组酶的最适反应温度为35℃,而原始酶为55℃。重组酶的热稳定性也发生了改变,40℃热处理20min只保留63.4%的最初酶活力,但温度再升高时对热处理敏感度降低,70℃的热处理20min仍保留45.9%的最初酶活力;而原始酶50℃时稳定,60℃以上的热处理酶活力损失很大。与原始酶相比,重组酶的最适pH值下降为pH5.0,而原始酶为pH6.5;相比原始酶在pH7.0有最大稳定性,重组酶在pH5.5时有最大稳定性。重组β-1,3-1,4-葡聚糖酶的最适反应条件与原始酶相比更接近啤酒的实际生产条件。 展开更多
关键词 工业酿酒酵母 Β-1 3-1 4-葡聚糖酶 酶学性质
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稳定遗传的染色体组合整合酿酒酵母重组菌株的构建 被引量:2
19
作者 左颀 赵心清 +3 位作者 刘海军 胡世洋 马中义 白凤武 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期669-673,共5页
染色体整合表达可获得稳定遗传的基因工程菌,是工业酿酒酵母育种的重要手段。pAUR135整合载体是抗生素标记基因可循环使用的载体,添加特定的同源臂后可构建在酵母染色体上稳定遗传的菌株。目前对酵母菌的分子育种常需要对多个基因进行... 染色体整合表达可获得稳定遗传的基因工程菌,是工业酿酒酵母育种的重要手段。pAUR135整合载体是抗生素标记基因可循环使用的载体,添加特定的同源臂后可构建在酵母染色体上稳定遗传的菌株。目前对酵母菌的分子育种常需要对多个基因进行过表达,利用pAUR135载体可将不同基因分别整合在不同染色体或相同染色体的不同位点,这种组合整合表达方法可对不同基因的表达强度比例进行调节,构建表型优化的工业酿酒酵母菌株。本研究以木糖代谢途径基因为例,构建了3个pAUR135整合载体,将3个木糖代谢基因依次整合到工业酿酒酵母染色体的不同位点,获得了染色体组合整合表达的代谢工程菌株。与将这3个基因整合在同一个位点的对照重组菌株相比,染色体组合整合的重组菌株木糖利用率提高了24.4%–35.5%。多基因染色体组合整合方法从新的角度对工业酵母进行代谢工程改造,所获得的工程菌株不带有任何外来基因和选择标记,可以保持性状的稳定,是工业酿酒酵母分子育种的新方法。 展开更多
关键词 同源重组 pAUR135整合载体 工业酿酒酵母 染色体组合整合
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自絮凝工业酒精酵母营养缺陷型的筛选和鉴定 被引量:1
20
作者 李倩 赵心清 +3 位作者 贺雷雨 张秋美 李宁 白凤武 《工业微生物》 CAS CSCD 2009年第5期44-48,共5页
运用紫外诱变方法成功获得了自絮凝酵母的营养缺陷型突变体,并且优化了诱变方法,证明了通过紫外诱变也可获得自絮凝酵母的营养缺陷型突变体。实验证明,较低的致死率更容易获得突变体,利用制霉菌素的富集可明显减少非缺陷型背景。本实验... 运用紫外诱变方法成功获得了自絮凝酵母的营养缺陷型突变体,并且优化了诱变方法,证明了通过紫外诱变也可获得自絮凝酵母的营养缺陷型突变体。实验证明,较低的致死率更容易获得突变体,利用制霉菌素的富集可明显减少非缺陷型背景。本实验获得了组氨酸和尿嘧啶营养缺陷型各一株,其中组氨酸缺陷型菌株失去絮凝特性,而尿嘧啶缺陷型保持了良好的絮凝特性。继代实验表明,二株突变体均可以稳定遗传。并利用交配型PCR方法证明了絮凝酵母及其两株突变体与其酿酒酵母亲本类似,均为交配型杂合体。 展开更多
关键词 絮凝酵母 工业酒精酵母 营养缺陷型 紫外诱变 交配型
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