贵州遵义地区山羊Borna病毒P24基因片段的检测 被引量：7

1

作者 王长明 徐平 +1 位作者 葛均江 郭振元 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期149-151,共3页

目的探讨贵州遵义及周边地区山羊博尔纳病病毒(BDV)感染状况。方法采用荧光定量套式逆转录酶聚合酶链反应(FQ-nRT-PCR)检测了300只山羊外周血单个核细胞(PBMC)中BDVP24基因片段。对阳性产物进行基因序列测定,氨基酸顺序,及同源性分析。... 目的探讨贵州遵义及周边地区山羊博尔纳病病毒(BDV)感染状况。方法采用荧光定量套式逆转录酶聚合酶链反应(FQ-nRT-PCR)检测了300只山羊外周血单个核细胞(PBMC)中BDVP24基因片段。对阳性产物进行基因序列测定,氨基酸顺序,及同源性分析。结果300只山羊PBMC中2只检出BDVP24基因阳性片段。山羊BDVP24基因片段阳性率为0.67(。BDVP24基因片段测序结果与GenBank提供的strainV毒株比较同源性为96.51%,有3个位点出现一致性沉寂突变,与BDV/MDCK毒株比较同源性为96.51%,有3个位点出现一致性沉寂突变,与C6BV毒株比较同源性为96.51%,有3个位点出现一致性沉寂突变,但所编码的氨基酸没有改变。结论贵州遵义及周边部分地区山羊存在BDV自然感染。 展开更多

关键词 博尔纳病病毒 巢式逆转录荧光定量pcr BDV P24基因 山羊

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水中活的非可培养状态痢疾志贺菌荧光定量PCR检测方法研究 被引量：8

2

作者 孙宗科 张伟 +4 位作者 鲁波 郑萍 王友斌 丁培 陈西平 《环境与健康杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期590-592,共3页

目的建立活的非可培养（viable but noncuhurable state，VBNC）状态痢疾志贺菌逆转录荧光定量PCR（reverse transcription quantitative PCR，RT—qPCR）检测方法。方法低温寡营养诱导痢疾志贺菌进入VBNC状态，用平板计数法和荧光显微... 目的建立活的非可培养（viable but noncuhurable state，VBNC）状态痢疾志贺菌逆转录荧光定量PCR（reverse transcription quantitative PCR，RT—qPCR）检测方法。方法低温寡营养诱导痢疾志贺菌进入VBNC状态，用平板计数法和荧光显微镜检法确定细菌的可培养数和活菌数，以痢疾志贺菌的志贺毒素基因stx（GenBank：M19437）、侵袭性毒力基因ipaH（GenBank：NC_007607）为目的基因设计引物，提取RNA进行RT—qPCR检测，研究检出限并建立标准曲线，用加标于环境水体中的志贺菌水样进行方法验证。结果建立处于VBNC状态的痢疾志贺菌RT—qPCR检测技术，检测时间少于6h，复杂环境水体中每500恤l水样可培养的痢疾志贺菌检出限为1—5cfu，VBNC状态的痢疾志贺菌3～25cfu。结论该方法检测快速，可实现对VBNC状态志贺菌的检测，可用于复杂水样的直接检测，适用于水体污染调查和应急反应时快速筛查志贺菌。 展开更多

关键词 痢疾志贺菌 活的非可培养状态 逆转录荧光定量pcr

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RNA逆转录荧光定量PCR检测食源性沙门菌 被引量：6

3

作者 张弛 褚庆华 +3 位作者 杨捷琳 孟瑾 韩奕奕 包建强 《中国卫生检验杂志》 CAS 2011年第2期284-286,289,共4页

目的:针对活的沙门菌,建立快速检测的方法。方法:以沙门菌OmpC基因RNA为检测对象,针对其设计荧光定量PCR引物和探针,摸索合适的反应体系和反应条件,同时以沙门菌及其亲缘关系较近的对照菌株进行特异性实验,以PCR产物克隆质粒和沙门菌纯... 目的:针对活的沙门菌,建立快速检测的方法。方法:以沙门菌OmpC基因RNA为检测对象,针对其设计荧光定量PCR引物和探针,摸索合适的反应体系和反应条件,同时以沙门菌及其亲缘关系较近的对照菌株进行特异性实验,以PCR产物克隆质粒和沙门菌纯培养物梯度稀释进行灵敏度实验,最终建立食源性沙门菌快速检测逆转录实时荧光PCR方法。结果:所设计的S-F/S-R引物和S-Probe探针能有效地将沙门菌与其他亲缘关系较近的肠杆菌科细菌如金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、志贺菌等区分开来。该方法对沙门菌纯培养物梯度稀释后的检测下限为<10 CFU/25 ml。同时,将建立的RNA逆转录荧光定量PCR检测方法与DNA荧光定量检测方法进行比较,DNA荧光定量PCR灵敏度仅为103 CFU/ml,远低于逆转录荧光定量PCR,且逆转录荧光定量PCR针对RNA进行检测,与活的沙门菌相关联,准确度更高。结论:建立沙门菌逆转录荧光定量PCR检测技术,具有特异、灵敏、快捷的特点,适用于食品中沙门菌的快速检测。 展开更多

关键词 沙门菌 RNA 逆转录荧光定量pcr

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新疆伊犁地区动物脑组织博尔纳病病毒p24基因片段的检测 被引量：2

4

作者 何丰 冯裕星 +9 位作者 孙后超 胡子成 徐红波 徐鸣明 展群岭 胡永波 金戈 张英英 李雷雷 谢鹏 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期31-35,共5页

目的了解新疆伊犁地区动物脑博尔纳病病毒（Borna disease virus，BDV）感染现状，分析该病毒的种系来源，预防我国BDV大规模暴发流行。方法采用巢式逆转录实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—RT-PCR）的方法，对新疆地区200匹马、75头驴和... 目的了解新疆伊犁地区动物脑博尔纳病病毒（Borna disease virus，BDV）感染现状，分析该病毒的种系来源，预防我国BDV大规模暴发流行。方法采用巢式逆转录实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—RT-PCR）的方法，对新疆地区200匹马、75头驴和100只牧羊犬脑组织标本进行BDVp24基因片段的检测。并对阳性标本进行BDV p40基因片段扩增电泳，同时排除GFP—p24和pMD-19质粒污染，最后克隆测序，进行基因同源性和氨基酸序列分析并分析BDV种系发生。结果3例伊犁马、4例伊犁驴和9例牧羊犬的脑组织标本BDV p24检测阳性，阳性率分别为1．5％、5．3％、9．0％；BDV p40基因片段检测和质粒标准品GFP—p24、pMD-19检测均为阴性；BDV pPA扩增产物序列与He／80株的同源性为100％。结论新疆伊犁地区马、驴和狗可能存在BDV脑内的自然感染，该地区BDV流行株与He／80株存在同源性。 展开更多

关键词 博尔纳病病毒 巢式逆转录荧光定量pcr 脑组织 新疆伊犁地区

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宁夏地区绵羊博尔纳病病毒自然感染状况研究 被引量：1

5

作者 刘建 马彦 +1 位作者 王振海 谢鹏 《宁夏医科大学学报》 2010年第1期26-29,32,I0003,共6页

目的探讨中国宁夏地区绵羊博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)的自然感染状况,并分析比较中国宁夏地区绵羊自然感染BDVp24基因序列与国外人和动物来源BDV分离株及其标准株StrainV和He/80的同源性。方法采用巢式逆转录荧光定量PCR(FQ... 目的探讨中国宁夏地区绵羊博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)的自然感染状况,并分析比较中国宁夏地区绵羊自然感染BDVp24基因序列与国外人和动物来源BDV分离株及其标准株StrainV和He/80的同源性。方法采用巢式逆转录荧光定量PCR(FQ-nRT-PCR技术)检测了中国宁夏地区268例绵羊PBMCs中BDVp24基因片段,对阳性标本FQ-PCR产物进行基因序列测定,测序结果应用BLAST软件以及DNAsist5.0软件对测序结果分析,与国外人与动物来源的BDV分离株以及标准株StrainV和He/80进行序列比较。结果268例中4例绵羊外周血BDVp24基因片段阳性,阳性率为1.49%;测序分析结果表明,宁夏地区绵羊感染的BDVp24的核苷酸序列与马源性病毒株H3575同源性最近,同源性为98.84%(85/86),与标准株StrainV和He/80同源性为94.19%和100%。并且它们编码的氨基酸序列相同。结论宁夏地区绵羊中可能存在动物源性的BDV自然感染,该地区感染的BDVp24核苷酸序列与马源性病毒株H3575、标准株StrainV和He/80存在高度的同源性,其感染来源可能相同亦或存在相互之间感染的可能。 展开更多

关键词 BORNA病病毒 感染 巢式逆转录荧光定量pcr

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肝癌组织HNF4αmRNA定量检测方法的建立与初步应用

6

作者 张伟 董政 +4 位作者 孔慧芳 张百龙 毛威 高旭东 荣义辉 《实用肝脏病杂志》 CAS 2017年第3期302-306,共5页

目的建立一种定量检测肝细胞癌(HCC)组织肝细胞核因子4α(HNF4α)m RNA的方法。方法取手术获得的HCC组织16例,提取总RNA,逆转录PCR扩增获得全长HNF4αm RNA对应c DNA产物,经TA克隆后,测序确认。根据获得序列,设计检测HNF4αm RNA引物及... 目的建立一种定量检测肝细胞癌(HCC)组织肝细胞核因子4α(HNF4α)m RNA的方法。方法取手术获得的HCC组织16例,提取总RNA,逆转录PCR扩增获得全长HNF4αm RNA对应c DNA产物,经TA克隆后,测序确认。根据获得序列,设计检测HNF4αm RNA引物及MGB荧光探针。以体外转录HNF4αm RNA为标准品,建立一步法逆转录荧光定量PCR检测方法,同时设定β-actin m RNA为内参对照,最终计算得到组织HNF4αm RNA水平。采用免疫组化染色检测HNF4α蛋白表达,比较HNF4αm RNA水平与HNF4α蛋白表达的对应结果。结果 HCC组织HNF4αm RNA定量标准曲线斜率为-3.237,相关系数r值达0.994,β-actin m RNA定量标准曲线斜率为-3.037,相关系数r值为0.996,表明建立的方法可用于检测HNF4αm RNA定量(V-4α值),16例HCC组织HNF4αm RNA与HNF4α蛋白表达结果呈一致性对应关系。结论我们初步成功建立了定量检测HCC组织HNF4αm RNA水平方法,其意义还需要进一步研究。 展开更多

关键词 肝细胞癌 肝细胞核因子4Α 逆转录荧光定量pcr法

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豚鼠结肠黑变病模型中原癌基因c-myc、K-ras和p53差异表达的实验研究 被引量：8

7

作者 程一乘 郁强 +1 位作者 刘薇 刘仍海 《癌症进展》 2020年第1期22-25,共4页

目的研究豚鼠结肠黑变病模型(MC)结肠组织中原癌基因c-myc、K-ras和p53的表达相对正常组织的差异,探讨MC与结肠癌变的关系。方法采用大黄灌胃法建立豚鼠MC模型,逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测豚鼠结肠组织中c-myc、K-ras和p... 目的研究豚鼠结肠黑变病模型(MC)结肠组织中原癌基因c-myc、K-ras和p53的表达相对正常组织的差异,探讨MC与结肠癌变的关系。方法采用大黄灌胃法建立豚鼠MC模型,逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测豚鼠结肠组织中c-myc、K-ras和p53 mRNA的表达水平,比较模型组和正常对照组豚鼠结肠组织中c-myc、K-ras、p53 mRNA的相对表达量。结果模型组豚鼠结肠组织中c-myc mRNA的相对表达量明显高于正常对照组(P﹤0.01);模型组豚鼠结肠组织中K-ras mRNA的相对表达量略高于正常对照组,p53 mRNA的相对表达量略低于正常对照组,但差异均无统计学意义(P﹥0.05)。结论MC豚鼠结肠组织中原癌基因c-myc的表达明显上调,提示MC具有向结肠癌演变的潜能。 展开更多

关键词 原癌基因 结肠黑变病 逆转录实时荧光定量pcr 结肠癌

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葡萄浆果内坏死病毒RT-q PCR检测技术建立及其在葡萄砧木中的时空分布规律

8

作者 张英 原青云 +3 位作者 任芳 胡国君 范旭东 董雅凤 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第14期2771-2780,共10页

【背景】葡萄浆果内坏死病毒(grapevine berry inner necrosis virus,GINV)是近年来在中国报道的一种正单链RNA病毒,该病毒发生普遍且危害严重。高灵敏的检测技术是病毒田间监测和无病毒苗木培育的关键。【目的】建立灵敏度较高的GINV... 【背景】葡萄浆果内坏死病毒(grapevine berry inner necrosis virus,GINV)是近年来在中国报道的一种正单链RNA病毒,该病毒发生普遍且危害严重。高灵敏的检测技术是病毒田间监测和无病毒苗木培育的关键。【目的】建立灵敏度较高的GINV逆转录实时荧光定量PCR(reverse transcription real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测体系;明确不同葡萄砧木对GINV的敏感性;明确GINV在寄主植株中的时空分布规律,为该病毒的监测预警提供技术支撑。【方法】根据GenBank已登录GINV的复制酶(replicase,RP)、移动蛋白(movement protein,MP)和外壳蛋白(coat protein,CP)基因保守序列设计6套引物,通过常规RT-PCR和RT-qPCR筛选特异性强、扩增效果好的引物。再通过对退火温度和引物浓度等反应条件的优化建立GINV的SYBR Green I染料法RT-qPCR检测体系,并进一步对该技术的灵敏度、特异性和田间适用性进行评价。将GINV接种到贝达、SO4、101-14、140R和1103P 5种葡萄砧木上进行症状观察和病毒检测,以筛选GINV敏感性较高的指示植物。基于所建立的RT-qPCR技术对接种GINV葡萄砧木的不同生长时期、不同部位样品进行GINV检测,从而明确GINV在不同葡萄砧木的时空分布规律。【结果】建立了GINV SYBR Green I染料法RT-qPCR检测技术体系,其最佳引物为GINVRPYGF2/R2,最佳引物浓度为300 nmol·L^(-1),最佳退火温度为58.4℃。该技术对GINV的检测特异性强,其检测灵敏度达常规RT-PCR的1 000倍。症状观察结果表明贝达感染GINV的症状最为严重,表现为叶片系统性坏死,而其他砧木叶片仅表现褪绿斑驳和环斑症状。RT-qPCR检测结果表明GINV在EL27时期(坐果期)的相对含量最高,5个品种间的病毒相对含量在EL12(花序分明期)和EL27时期间无显著差异,EL31时期(果实增大期)的贝达与SO4、101-14、140R和1103P的病毒相对含量存在显著差异;GINV的相对含量在不同组织部位存在较大差� 展开更多

关键词 葡萄浆果内坏死病毒 逆转录实时荧光定量pcr 葡萄砧木 时空分布

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尼帕病毒Taqman qRT-PCR检测方法的建立 被引量：4

9

作者 王浩 麻粉莲 +3 位作者 王超 黄益曼 郭琼 郑丽舒 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期371-376,共6页

尼帕病毒(NiV)是一种高致病性人畜共患病原体,可引起人类致死性脑炎和严重的呼吸系统疾病,目前尚无有效的抗NiV药物和疫苗,建立NiV检测方法十分必要。建立针对尼帕病毒N基因的Taqman qRT-PCR检测方法,应用于样本尼帕病毒检测及定量。针... 尼帕病毒(NiV)是一种高致病性人畜共患病原体,可引起人类致死性脑炎和严重的呼吸系统疾病,目前尚无有效的抗NiV药物和疫苗,建立NiV检测方法十分必要。建立针对尼帕病毒N基因的Taqman qRT-PCR检测方法,应用于样本尼帕病毒检测及定量。针对尼帕病毒N基因保守区域设计引物和探针,建立Taqman qRT-PCR检测方法,评价该检测方法灵敏度、特异性和可重复性,并应用此方法进行样本检测。本研究建立的Taqman qRT-PCR检测方法可以特异性的检测尼帕病毒,检测灵敏度为10~2拷贝/μL,标准曲线线性范围为1.0×10~9~1.0×10~2拷贝/μL,可重复性较好,能够有效检出尼帕病毒马来西亚病毒株和孟加拉病毒株,可用于样本尼帕病毒的检测及定量。 展开更多

关键词 尼帕病毒 逆转录实时荧光定量pcr 核酸检测

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博尔纳病毒在宁夏的人和动物感染的检测 被引量：3

10

作者 刘建 马彦 +2 位作者 张颖 王振海 谢鹏 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期389-393,共5页

目的对临床VE患者以及其本人接触动物的检测,探讨BDV在宁夏地区的感染状况及感染机制,并分析BDV核酸和转化后的氨基酸序列,构建病毒种系发生的来源。方法应用巢式逆转录酶聚合酶链反应结合荧光定量PCR检测患者及其接触的动物的外周血单... 目的对临床VE患者以及其本人接触动物的检测,探讨BDV在宁夏地区的感染状况及感染机制,并分析BDV核酸和转化后的氨基酸序列,构建病毒种系发生的来源。方法应用巢式逆转录酶聚合酶链反应结合荧光定量PCR检测患者及其接触的动物的外周血单核细胞的p24和p40基因片段。对检测阳性标本进行连接测序,应用MEGA和DnaSP4.0软件对测序结果同国外的标准株HE80、H1766、strainV等进行核酸和氨基酸序列对比分析,并构建病毒基因的系统发生树。结果在60例VE患者及其接触的710绵羊中,PCR检测发现有3例阳性,阳性检出率5%;9头绵羊阳性,阳性检出率为1.27%。基因聚合分析显示人和动物BDV的核酸序列和编码氨基酸序列与德国马源性的HE80株同源性高达100%,重构基因系统发生树可见宁夏VE患者和牛羊BDV核苷酸序列与国外的标准株形成宁夏-德国-日本的混合支系,同时宁夏绵羊BDV序列也形成了一个独立的支系。结论宁夏地区人和牛羊存在BDV的自然感染,并且人的感染存在动物源性,其传染途径很可能是呼吸道的传播可能引起脑炎的非特异性的临床症状,病毒在种系发生中与德国马源性HE80株有极高的同源性,病毒可能由国外引入本土,不排除病毒株变异的可能,人和绵羊之间存在相互传染的可能。 展开更多

关键词 博尔纳病毒 感染 巢式逆转录实时荧光定量pcr

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大鼠死后管家基因mRNA稳定性及其时序性降解与PMI相关性研究 被引量：3

11

作者 刘志杰 董祖鑫 +2 位作者 路健 王英元 梁新华 《中国法医学杂志》 CSCD 2017年第5期448-452,共5页

目的研究脑组织及骨骼肌内β-actin、GAPDH、RPL32、PKG1、SDHA、RPL13、HPRT、TBP、YWHAZ死后稳定性及其相对表达量与死亡时间(PMI)的相关性。方法取健康成年SD大鼠33只,依据据死亡时间不同随机分为11组(0h、1h、3h、6h、12h、24h、2d... 目的研究脑组织及骨骼肌内β-actin、GAPDH、RPL32、PKG1、SDHA、RPL13、HPRT、TBP、YWHAZ死后稳定性及其相对表达量与死亡时间(PMI)的相关性。方法取健康成年SD大鼠33只,依据据死亡时间不同随机分为11组(0h、1h、3h、6h、12h、24h、2d、4d、8d、16d、24d),分别在各时间点取大鼠胫骨前肌及脑组织约50mg,提取各组织总RNA,利用RT-q PCR技术检测9种管家基因的m RNA相对表达量。运用ge Norm、Norm Finder和Best Keeper软件对基因稳定性进行评价,利用spss软件对内参标准化的m RNA指标进行回归分析。结果脑组织及骨骼肌中均为HPRT稳定性最高,适合用于本研究的内参基因。脑组织中SDHA、RPL32及TBP 3种指标的相对表达量变化与PMI有一定的线性关系。骨骼肌中m RNA指标相对表达量与PMI之间没有显著的相关性。结论脑组织及骨骼肌是较适宜推断晚期死亡时间的检材。脑组织中SDHA、RPL32及TBP 3种m RNA的相对表达量变化与PMI有一定的线性关系,有望成为推断PMI的辅助指标。 展开更多

关键词 法医病理学 死亡时间 逆转录-实时荧光定量pcr 管家基因

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八种灭活型病毒保存液对病毒核酸稳定性的影响 被引量：2

12

作者 杨怡 宋庆贺 +1 位作者 王霞 董莲华 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2021年第5期500-504,共5页

目的评价八种不同的灭活型病毒保存液对病毒核酸的保护效果。方法收集八种商业化的灭活型病毒保存液,分别将新冠病毒假病毒标准物质和禽流感病毒样本加入保存液中,同时设置2个对照组(生理盐水和磷酸盐缓冲液),在保存温度为24℃和37℃条... 目的评价八种不同的灭活型病毒保存液对病毒核酸的保护效果。方法收集八种商业化的灭活型病毒保存液,分别将新冠病毒假病毒标准物质和禽流感病毒样本加入保存液中,同时设置2个对照组(生理盐水和磷酸盐缓冲液),在保存温度为24℃和37℃条件下,保存时间为0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h,分别提取各保存液中的病毒核酸,采用逆转录荧光定量PCR(RT-qPCR)和逆转录数字PCR方法(RT-dPCR)检测病毒核酸的含量变化。结果四种商业化病毒保存液A、E、G、H在不同温度和时间条件下对病毒核酸的保存效果明显。另外四种保存液保护效果较差:保存液B和C在37℃条件下12 h后保存效果变差,保存液D的保存效果在24℃和37℃下6 h后均明显减弱;保存液F对病毒核酸没有任何保护作用。结论病毒保存液的保护效果差会导致核酸检测的假阴性,建议开展核酸检测时对使用的病毒保护液进行质量控制。 展开更多

关键词 病毒保存液 禽流感病毒 新型冠状病毒 假病毒标准物质 逆转录实时荧光定量pcr 逆转录数字pcr

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逆转录实时荧光定量PCR检测p73 mRNA在结肠癌的表达 被引量：1

13

作者 郭玮 莫惠芳 +2 位作者 周琰 赵瀛 潘柏申 《中国临床医学》 北大核心 2005年第3期520-521,共2页

目的:建立一种实时定量PCR方法检测p73mRNA的表达水平,探讨其与结肠癌发生、发展的可能关系。方法:采用SYBRGreenⅠ逆转录实时荧光定量PCR检测39例结肠癌组织和其癌旁组织中p73mRNA的表达。结果:p73基因在结肠癌肿瘤组织的表达水平高于... 目的:建立一种实时定量PCR方法检测p73mRNA的表达水平,探讨其与结肠癌发生、发展的可能关系。方法:采用SYBRGreenⅠ逆转录实时荧光定量PCR检测39例结肠癌组织和其癌旁组织中p73mRNA的表达。结果:p73基因在结肠癌肿瘤组织的表达水平高于其在癌旁组织的表达(P<0.01);表达水平与肿瘤的恶性程度、分化及淋巴结转移显著相关(P<0.05)。结论:p73的高表达可能与结肠癌的发生、发展及预后有联系。 展开更多

关键词 结肠癌 逆转录实时荧光定量pcr

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反转录实时荧光定量PCR用于检测白血病相关融合基因分型的性能及应用评价 被引量：2

14

作者 白园园 杨慧洁 +3 位作者 余坚 杨军军 郑晓群 陈占国 《中国卫生检验杂志》 CAS 2020年第1期4-8,共5页

目的评价反转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测白血病相关融合基因的性能,以确定临床使用该方法的可行性。方法采用RT-qPCR检测临床骨髓标本中的白血病相关融合基因BCR-ABL、PML-RARα及AML1-ETO的RNA,验证准确性、特异性、最低检出限、... 目的评价反转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测白血病相关融合基因的性能,以确定临床使用该方法的可行性。方法采用RT-qPCR检测临床骨髓标本中的白血病相关融合基因BCR-ABL、PML-RARα及AML1-ETO的RNA,验证准确性、特异性、最低检出限、精密度、抗干扰和融合基因亚型检出能力等性能指标,并对其临床应用进行初步评价。结果RT-qPCR检测白血病相关融合基因BCR-ABL、PML-RARα及AML1-ETO的阴阳性符合率为100%,特异性和准确性得到验证;该方法检测下限为100 copies/每反应,其批内和批间精密度CV值均<10%;精密度符合实验要求;胆红素、甘油三酯和血红蛋白对该方法无明显干扰作用;均能检出融合基因亚型;白血病患者治疗前融合基因表达为阳性,完全缓解、巩固、维持各期的相关融合基因表达均为阴性,此结果与疾病进展关系一致。结论采用RT-qPCR检测白血病相关融合基因试剂盒符合规定的性能指标,该检测方法具有较高的灵敏度和较好的准确性和重复性等优势,适合应用于临床。 展开更多

关键词 融合基因 白血病 逆转录实时荧光定量pcr 性能评价

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偏肺病毒逆转录实时荧光定量PCR的建立及应用 被引量：1

15

作者 周杰英 林应标 +1 位作者 曹友德 段招军 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2016年第2期216-219,共4页

目的 建立偏肺病毒逆转录实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）,并检测临床样本,了解偏肺病毒感染患儿的临床流行病学特点.方法 针对保守基因F合成引物和探针,制备偏肺病毒转录RNA标准品并建立标准曲线,检测线性范围、最低检测限、重复... 目的 建立偏肺病毒逆转录实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）,并检测临床样本,了解偏肺病毒感染患儿的临床流行病学特点.方法 针对保守基因F合成引物和探针,制备偏肺病毒转录RNA标准品并建立标准曲线,检测线性范围、最低检测限、重复性、灵敏度和特异性.对采集自2010年12月至2011年11月兰州地区急性呼吸道疾病患儿的222份下呼吸道临床标本进行偏肺病毒筛查,同时对阳性标本进行常见呼吸道病毒的共感染筛查,并对偏肺病毒进行相关流行病学分析.结果 方法线性检测范围是10-108拷贝/μl,最低检测限是10拷贝/μl,曲线相关系数是1,扩增效率是91.62％,Ct值组内CV值小于2％.以传统PCR产物的测序结果为参照,逆转录实时荧光定量PCR的敏感性和特异性分别是100％和96.17％.偏肺病毒检出22例（9.46％）,其中男童13例（5.86％）,女童8例（3.60％）.春、夏、秋、冬的检出率分别是15.71％、0％、5.08％、11.11％.偏肺病毒载量与混合感染、疾病种类、临床症状差异均无统计学意义.结论 该方法是检测偏肺病毒灵敏度、特异性和重复性均较好的方法;偏肺病毒在兰州地区儿童呼吸道感染中占有重要地位,长期系统的监测具有重要意义. 展开更多

关键词 逆转录实时荧光定量pcr 偏肺病毒

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直接从家禽排泄物中检测和定量空肠弯曲杆菌的逆转录定量PCR方法研究

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作者 Bui X T 张锦秀 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第2期186-186,共1页

弯曲杆菌属是导致人类细菌性腹泻的主要原因,亟需一种快速而可靠地检测和定量该病原的方法。本研究建立了运用逆转录荧光定量PCR直接从鸡粪便中检测和定量空肠弯曲杆菌的方法,并将其与另一种基于DNA的荧光定量PCR方法和细菌培养方法进... 弯曲杆菌属是导致人类细菌性腹泻的主要原因,亟需一种快速而可靠地检测和定量该病原的方法。本研究建立了运用逆转录荧光定量PCR直接从鸡粪便中检测和定量空肠弯曲杆菌的方法,并将其与另一种基于DNA的荧光定量PCR方法和细菌培养方法进行比较。运用细菌培养和逆转录荧光定量PCR方法,可在5d后从人工或天然污染的粪便样品中检测到空肠弯曲杆菌。在使用细菌培养方法无法计数细胞时,逆转录荧光定量PCR亦无法检测到阳性扩增信号,而运用基于DNA的荧光定量PCR方法可以检测到死亡的或无法培养的弯曲杆菌细胞,即使在经过20d保存处理后所有被检测样品仍是阳性。这种直接从鸡粪便样品中检测和定量空肠弯曲杆菌的方法在检测环境弯曲杆菌中的应用还有待进一步研究。 展开更多

关键词 空肠弯曲杆菌 逆转录荧光定量pcr MRNA 鸡粪便 弯曲杆菌残留

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