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中国七个地区1998-2005年急性腹泻住院患儿中星状病毒感染研究 被引量：46
1
作者 方肇寅 孙亚萍 +6 位作者 叶新华 王慧 章青 段招军 Xi Jiang Duncan Steele Roger Glass 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期673-676,共4页
目的研究中国5岁以下腹泻住院患儿中星状病毒感染的流行病学特点,确定流行毒株血清型。方法选择国内7个地区收集5岁以下腹泻住院患儿粪便标本,应用酶联免疫或PCR方法检测星状病毒,对星状病毒阳性标本应用RT-PCR方法分型并经测序确证。结... 目的研究中国5岁以下腹泻住院患儿中星状病毒感染的流行病学特点,确定流行毒株血清型。方法选择国内7个地区收集5岁以下腹泻住院患儿粪便标本,应用酶联免疫或PCR方法检测星状病毒,对星状病毒阳性标本应用RT-PCR方法分型并经测序确证。结果1998-2005年在7个地区的凋查点共收集1668份急性腹泻粪便标本,检测出星状病毒阳性标本91份,平均检出率为5．5％;病例全年均有发生,发病高峰主要集中在10月份到次年1月份;95％患儿年龄在2岁以下,其中以9-11月龄儿童发病最多,检出率为7.4％,12-17月龄、6-8月龄、0-6月龄儿童的检出率依次为6．1％、5.6％、5．6％。确定型别的49份标本中45份为HAstV-1型,1例为HAstV-3型,2例为HAstV-5型,1例为HAstV-8型。结论星状病毒是中国婴幼儿病毒性腹泻的重要病原之一,流行毒株以1型为主,同时存在多个型别的散在流行。 展开更多
关键词 星状病毒 巢式逆转录聚合酶链反应 流行病学
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非小细胞肺癌患者淋巴结、外周血及骨髓微转移分子诊断在肺癌外科治疗中的作用 被引量：13
2
作者 周清华 宫友陵 +8 位作者 覃扬 孙芝琳 孙泽芳 刘伦旭 王允 李潞 刘建余 朱文 步宏 《中国肺癌杂志》 CAS 2001年第6期435-439,共5页
目的　探讨检测肺癌患者区域淋巴结、外周血和骨髓中微转移在肺癌外科治疗中的临床意义 ,以及区域淋巴结、外周血和骨髓肺癌微转移三者之间的相关性。方法　应用巢式RT PCR技术 ,对 2 9例肺癌患者和 1 1例肺良性病变患者的淋巴结、外周... 目的　探讨检测肺癌患者区域淋巴结、外周血和骨髓中微转移在肺癌外科治疗中的临床意义 ,以及区域淋巴结、外周血和骨髓肺癌微转移三者之间的相关性。方法　应用巢式RT PCR技术 ,对 2 9例肺癌患者和 1 1例肺良性病变患者的淋巴结、外周血和骨髓中CK1 9基因mRNA表达进行联合检测。结果　本实验建立的巢式RT PCR技术的敏感性可达到 1 0 - 6。术前 1 0例患者检测到外周血微转移 ,6例患者检测到骨髓肺癌微转移 ,1 0 1枚纵隔淋巴结中 5 5枚检测到肺癌微转移。肺癌患者淋巴结、外周血和骨髓中微转移阳性检出率分别为 5 4 .5 %、3 4 .5 %和 2 0 .7% ,三者之间存在显著正相关 (P <0 .0 5 ) ,外周血和骨髓微转移与肺癌组织学类型、细胞分化程度及P TNM分期均存在密切关系 (P <0 .0 5或P <0 .0 1 )。结论　RT PCR法是一种特异性 ,敏感性均较高的肿瘤微转移检测方法 ;检测CK1 9mRNA表达应用于肺癌微转移的分子诊断有助于选择外科手术适应证 。 展开更多
关键词 肺肿瘤 微转移 细胞角蛋白 巢式逆转录聚合酶链反应 外科手术适应证 NSCLC
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前列腺癌患者外周血DD3 mRNA的检测及临床意义 被引量：11
3
作者 陈占国 陶志华 +6 位作者 陈晓东 李澄棣 李湘斌 杨建荣 温秀姝 林晓梅 朱燕英 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期489-491,共3页
目的　探讨检测前列腺癌(PC)患者外周血DD3mRNA在诊断和治疗监测中的意义。方法　用巢式逆转录聚合酶链反应(nRT PCR)检测44例不同分期PC患者和30例良性前列腺增生(BPH)患者及18名健康男性志愿者外周血中DD3mRNA,并进行对比分析。结果　... 目的　探讨检测前列腺癌(PC)患者外周血DD3mRNA在诊断和治疗监测中的意义。方法　用巢式逆转录聚合酶链反应(nRT PCR)检测44例不同分期PC患者和30例良性前列腺增生(BPH)患者及18名健康男性志愿者外周血中DD3mRNA,并进行对比分析。结果　BPH患者和健康男性志愿者外周血中DD3mRNA均阴性;未治疗PC组外周血DD3mRNA100%阳性(11 /11),而经内分泌治疗PC组阳性率30. 3% ( 10 /33 ),两组差异有统计学意义(P<0. 01 )。结论　外周血DD3mRNA是PC诊断和内分泌治疗监测的良好指标,有望成为PC特异性肿瘤标志物。 展开更多
关键词 MRNA 外周血 前列腺癌患者 临床意义 检测 良性前列腺增生(BPH) 巢式逆转录聚合酶链反应 特异性肿瘤标志物 治疗监测 健康男性 BPH患者 内分泌治疗 对比分析 志愿者 PC 阳性率 统计学 诊断 C组
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乳腺癌患者外周血SBEM-mRNA和CD44V6-mRNA的检测及其临床意义 被引量：9
4
作者 杨华伟 刘剑仑 +2 位作者 曹骥 杨南武 苏建家 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期382-385,共4页
目的:寻找乳腺癌血道微小转移的肿瘤标志物,以利于早期发现乳腺癌的转移。方法:用巢式逆转录聚合酶链反应(Nested-RT-PCR)技术,检测67例乳腺癌、16例乳腺良性肿瘤及20例健康志愿者外周静脉血中的乳腺小粘蛋白(sm allbreastepithelialm u... 目的:寻找乳腺癌血道微小转移的肿瘤标志物,以利于早期发现乳腺癌的转移。方法:用巢式逆转录聚合酶链反应(Nested-RT-PCR)技术,检测67例乳腺癌、16例乳腺良性肿瘤及20例健康志愿者外周静脉血中的乳腺小粘蛋白(sm allbreastepithelialm ucin--SBEM)m RNA和CD44V6-m RNA。结果:SBEM-m RNA在健康志愿者、乳腺良性肿瘤患者外周血中均为阴性;67例乳腺癌患者外周血中SBEM-m RNA表达率为50.7%(34/67),在乳腺癌患者的临床分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期中SBEM-m RNA表达率分别为25%(2/8)、45.8%(11/24)、43.75%(7/16)、73.7%(14/19),在Ⅳ期乳腺癌患者外周血中SBEM-m RNA的检出率73.7%(14/19)明显高于其他各组(P<0.05﹚。SBEM-m RNA的表达与患者年龄、原发癌灶大小、病理类型、ER和PR的状态无关(P>0.05);在乳腺癌、乳腺良性肿瘤及健康志愿者外周静脉血中的CD44V6-m RNA的检出率为55/67(82.1%)、12/16(75%)、14/20(70%)。结论:SBEM-m RNA特异表达于乳腺癌患者的外周血,有可能作为检测乳腺癌血道微小转移的指标,SBEM-m RNA阳性提示血循环中有乳腺癌细胞,预示着有血源性转移的可能,SBEM-m RNA可能成为诊断乳腺癌和判断预后的一个指标;而CD44V6-m RNA能否作为乳腺癌微小转移的标志物尚需进一步探讨。 展开更多
关键词 巢式逆转录聚合酶链反应 乳腺癌 乳腺小粘蛋白mRNA CD44V6-mRNA
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应用巢式逆转录聚合酶链反应检测鱼类病毒性出血性败血症病毒(VHSV) 被引量：10
5
作者 倪穗 余晓巍 +3 位作者 王建平 雷爱莹 曾地刚 吴雄飞 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期489-493,共5页
参照鱼类病毒性出血性败血症病毒序列,根据PCR引物设计的原则,设计巢式PCR引物,采用巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,对如何快速检测鱼类病毒性出血性败血症病的方法进行了较为系统的研究,并对RT-PCR的反应条件进行了优化。结果表明... 参照鱼类病毒性出血性败血症病毒序列,根据PCR引物设计的原则,设计巢式PCR引物,采用巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,对如何快速检测鱼类病毒性出血性败血症病的方法进行了较为系统的研究,并对RT-PCR的反应条件进行了优化。结果表明,巢式RT-PCR扩增获得279bp的特异性片断,阴性对照无扩增条带。巢式RT-PCR扩增出的特异性片段经测序分析,结果证实与报道的序列完全一致。该方法最低可检测出0.1pg的鱼类病毒性出血性败血症病毒RNA。初步建立了VHSV的巢式RT-PCR检测方法,该方法灵敏、特异,可为VHSV的检测提供一个快速、有效的手段。 展开更多
关键词 病毒性出血性败血症病毒 巢式逆转录聚合酶链反应 检测
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人结肠癌细胞裸鼠肝转移模型及其血中CK20 mRNA表达的研究 被引量：7
6
作者 陆飞 沈洪薰 +3 位作者 陈瑞新 钱晶晶 陈莉 陈玉泉 《南通医学院学报》 2002年第1期22-23,26,共3页
目的 :建立人结肠癌裸鼠肝转移模型 ,检测血中 CK2 0 m RNA表达 ,应用于结肠癌肝转移的防治研究。方法 :BAL B/ C裸鼠 12只 ,腹腔内注射戊巴比妥钠麻醉 ,经脾脏注入指数生长期的人结肠癌低分化腺癌细胞悬液( L S174 t) 0 .1m l,含细胞数... 目的 :建立人结肠癌裸鼠肝转移模型 ,检测血中 CK2 0 m RNA表达 ,应用于结肠癌肝转移的防治研究。方法 :BAL B/ C裸鼠 12只 ,腹腔内注射戊巴比妥钠麻醉 ,经脾脏注入指数生长期的人结肠癌低分化腺癌细胞悬液( L S174 t) 0 .1m l,含细胞数 1× 10 6 个 ,切除脾脏 ,喂养 2 0天后 ,建立人结肠癌裸鼠肝转移模型。随后 ,心脏采血检测血中 CK2 0 m RNA表达 ,处死裸鼠观察腹腔内肿瘤生长和肝转移癌灶数目及大小 ,作病理组织学检查。采用巢式逆转录聚合酶链反应 ( RT- PCR)法 ,检测裸鼠血中 CK2 0 m RNA表达。结果 :12只裸鼠均建立人结肠癌裸鼠肝转移模型 ,无1只死亡。初期活跃如常体形无改变 ,10天后裸鼠出现消瘦、精神差 ,摄食量减少。裸鼠尸解肝脏表面均有灰白色转移癌结节形成 ,其它脏器未发现转移癌灶。病理组织学示肝转移癌灶具有人结肠癌低分化腺癌特征。血中 CK2 0 m RNA均阳性表达。结论 :经脾脏注入 L S174 t细胞悬液可建立人结肠癌裸鼠肝转移模型 ,裸鼠血中 CK2 0 m RNA阳性表达 ,证实血中存在着结肠癌细胞 ,是形成肝转移灶的条件。 展开更多
关键词 LS174t细胞株 肝转移 裸鼠 CK20MRNA 巢式逆转录聚合酶链反应 结肠癌
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肝癌病人外周血及骨髓AFP mRNA的检测及意义 被引量：9
7
作者 黄东胜 傅佩芬 +2 位作者 郑树森 梁廷波 谢海洋 《中华肝胆外科杂志》 CAS CSCD 2002年第3期154-158,共5页
目的　通过检测AFPmRNA在肝细胞性肝癌 (hepatocellularcarcinoma ,HCC)病人外周血和骨髓中的表达 ,探讨AFPmRNA作为HCC微转移指标的可能性。方法　建立敏感的巢式逆转录聚合酶链反应体系 (Nested RT PCR) ,检测 71例HCC、36例肝硬化、... 目的　通过检测AFPmRNA在肝细胞性肝癌 (hepatocellularcarcinoma ,HCC)病人外周血和骨髓中的表达 ,探讨AFPmRNA作为HCC微转移指标的可能性。方法　建立敏感的巢式逆转录聚合酶链反应体系 (Nested RT PCR) ,检测 71例HCC、36例肝硬化、9例肝血管瘤、11例肝转移瘤、30例正常对照外周血AFPmRNA和 19例HCC、15例血液病骨髓AFPmRNA。结果　 71例HCC外周血中 38例AFPmRNA表达阳性 (5 3 5 %) ,肝硬化、肝血管瘤、肝转移瘤和正常对照均为阴性。HCC外周血AFPmRNA检出率与血清AFP值无明显相关 (P >0 0 5 ) ,而与肿瘤大小、门静脉癌栓、肝内转移、肝外转移等临床参数有明显相关 (P <0 0 5 )。 19例HCC骨髓中 9例AFPmRNA表达阳性 (4 7 4 %) ,15例血液病为阴性。骨髓AFPmRNA检出率与血清AFP值、肝内转移无明显相关 (P>0 0 5 ) ,与肿瘤大小、门静脉癌栓、肝外转移明显相关 (P <0 0 5 )。外周血和骨髓AFPmRNA的表达呈一致性 (P <0 0 5 )。结论　血循环AFPmRNA可作为HCC微转移的早期检测指标。HCC病人外周血和骨髓AFPmRNA的表达与复发转移显著相关 ,且HCC病人外周血和骨髓AFPmRNA的表达呈一致性 ,联合检测有助于提高结论的可靠性。 展开更多
关键词 巢式逆转录聚合酶链反应 AFP mNRA 外周血 骨髓 肝细胞癌 肿瘤转移
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乳腺癌患者外周血SBEM mRNA的检测及其临床意义 被引量：8
8
作者 杨华伟 曹骥 +6 位作者 杨南武 刘剑仑 张传珉 陈建思 洪坚善 蒋奕 苏建家 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第7期842-845,共4页
背景与目的乳腺癌患者的死亡原因几乎均为肿瘤远处转移。目前乳腺癌诊断尚无公认的特异性标志物,本文旨在探讨特异性的乳腺癌标志物─乳腺小粘蛋白(smallbreastepithelialmucin,SBEM)在乳腺癌外周血的表达及其意义。方法用巢式逆转录聚... 背景与目的乳腺癌患者的死亡原因几乎均为肿瘤远处转移。目前乳腺癌诊断尚无公认的特异性标志物,本文旨在探讨特异性的乳腺癌标志物─乳腺小粘蛋白(smallbreastepithelialmucin,SBEM)在乳腺癌外周血的表达及其意义。方法用巢式逆转录聚合酶链反应(Nested-RT-PCR)技术检测67例乳腺癌、16例乳腺良性肿瘤及20例健康志愿者外周静脉血中的SBEMmRNA的表达情况。结果SBEMmRNA在健康志愿者及乳腺良性肿瘤患者外周血中表达均为阴性;67例乳腺癌患者外周血中SBEMmRNA表达率为50.7%(34/67),在乳腺癌患者的临床分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期中SBEMmRNA表达率分别为25.0%(2/8)、45.8%(11/24)、43.8%(7/16)和73.7%(14/19),在Ⅳ期乳腺癌患者外周血中SBEMmRNA的检出率明显高于其他各期(P<0.05)。SBEMmRNA的表达与患者年龄、原发癌灶大小、病理类型、ER和PR的状态无关(P>0.05)。结论SBEMmRNA特异表达于乳腺癌患者的外周血,有可能作为判断乳腺癌血道微小转移的指标之一。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 肿瘤转移 巢式逆转录聚合酶链反应 乳腺小粘蛋白 MRNA 外周血 诊断
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巢式逆转录多聚酶链反应检测大肠癌外周血中CK20m RNA 被引量：7
9
作者 陈瑞新 王志伟 +3 位作者 邵苏吉 徐青 沈洪薰 陈玉泉 《南通医学院学报》 2001年第1期14-16,共3页
目的 :研究大肠癌患者外周血中 CK 2 0 m RNA作为大肠癌细胞微转移的标志。方法 :巢式逆转录多聚酶反应 (RT- PCR)法。结果 :CK2 0 m RNA巢式 RT- PCR最低可检测到每 5 ml血液中仅存 5个结肠癌细胞的存在 ;大肠癌组 32例 ,外周血中 CK 2... 目的 :研究大肠癌患者外周血中 CK 2 0 m RNA作为大肠癌细胞微转移的标志。方法 :巢式逆转录多聚酶反应 (RT- PCR)法。结果 :CK2 0 m RNA巢式 RT- PCR最低可检测到每 5 ml血液中仅存 5个结肠癌细胞的存在 ;大肠癌组 32例 ,外周血中 CK 2 0 m RNA阳性率 5 6 .2 6 % (18/32 ) ;对照组中 CK 2 0 m RNA均为阴性。结论 :CK 2 0m RNA巢式 RT- PCR可作为大肠癌细胞微转移的敏感而特异的检测方法。 展开更多
关键词 大肠癌 外周血 细胞角蛋白20 mRNA 巢式逆转录聚合酶链反应
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FHIT基因异常与消化道恶性肿瘤 被引量：3
10
作者 于红刚 余保平 +2 位作者 罗和生 于皆平 孙来宝 《中华消化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第10期596-598,共3页
目的　探讨消化道恶性肿瘤细胞中三联脆组 (fragilehistidinetriad ,FHIT)基因的异常转录情况。方法　应用巢式逆转录聚合酶链反应 (nestedRT PCR)对 96例消化道恶性肿瘤 ( 2 1例食管癌、4 3例胃癌和 3 2例结肠癌 )及相应的癌旁组织 ,1... 目的　探讨消化道恶性肿瘤细胞中三联脆组 (fragilehistidinetriad ,FHIT)基因的异常转录情况。方法　应用巢式逆转录聚合酶链反应 (nestedRT PCR)对 96例消化道恶性肿瘤 ( 2 1例食管癌、4 3例胃癌和 3 2例结肠癌 )及相应的癌旁组织 ,18例正常组织FHIT基因cDNA片断进行扩增。结果　在3 3 .3 %的食管癌组织 ,5 1.2 %的胃癌组织和 3 1.3 %的结肠癌组织中检出异常FHIT转录 ,而在相应的食管、胃、结肠癌旁组织中FHIT异常转录检出率分别为 4 .8%、2 0 .9%和 9.4 % ,二者差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;18例正常组织中未见FHIT异常转录。结论　食管癌、胃癌和结肠癌组织FHIT基因的异常转录可能与消化道恶性肿瘤的发生、发展有关。 展开更多
关键词 消化道肿瘤 FHIT基因 抑癌基因 巢式逆转录聚合酶链反应
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巢式PCR诊断儿科患者鼻病毒感染的探讨 被引量：6
11
作者 赵林清 钱渊 +2 位作者 朱汝南 邓洁 王芳 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期154-156,共3页
目的了解儿科急性呼吸道感染的病毒病原,建立快速、敏感、特异的检测鼻病毒（HRV）的方法.方法根据已发表的HRV的核苷酸序列设计巢式PCR引物,并用多种呼吸道病毒的标准毒株确定方法的特异性.收集2002年11月至2003年10月的急性呼吸道感... 目的了解儿科急性呼吸道感染的病毒病原,建立快速、敏感、特异的检测鼻病毒（HRV）的方法.方法根据已发表的HRV的核苷酸序列设计巢式PCR引物,并用多种呼吸道病毒的标准毒株确定方法的特异性.收集2002年11月至2003年10月的急性呼吸道感染患儿标本771例,应用巢式PCR方法检测标本中有无HRV基因片段.结果特异性检测结果显示仅HRV cDNA有预期大小的片段扩增.771例标本中HRV总检出例数为148例（148/771）,占19.2%;HRV阳性检出率在咽炎患儿中达到53.3%（8/15）,喉炎患儿43.8%（7/16）,支气管炎患儿为28.7%（29/101）,其他如急性扁桃体炎、急性肺炎等患儿也有较高的HRV阳性检出率.在2002年11月以及2003年8-10月HRV检测阳性率较高（21.6%～32.6%）,尤其在2003年9月份HRV检测阳性率最高,达到32.6%;2003年3-7月HRV阳性标本所占百分率较平稳,在16.0%～19.1%之间.结论建立的巢式RT-PCR可以检测到儿科呼吸道感染患儿标本中的鼻病毒基因片段;HRV是北京婴幼儿急性呼吸道感染的重要病毒病原之一. 展开更多
关键词 鼻病毒 巢式逆转录聚合酶链反应
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食管癌患者外周血中CK19mRNA、CYFRA21-1、TPS联合检测的临床意义 被引量：5
12
作者 俞军 周晓明 +1 位作者 何晓松 戴美红 《实用老年医学》 CAS 2009年第6期464-466,469,共4页
目的评价食管癌患者外周血中微转移基因标记物细胞角蛋白19(CK19)mRNA和细胞角蛋白片段21-1(CYFRA21-1)、组织多肽特异性抗原(TPS)联合测定的临床价值。方法取48例食管癌患者术前外周血标本,应用巢式逆转录聚合酶链反应法(nested-PCR)... 目的评价食管癌患者外周血中微转移基因标记物细胞角蛋白19(CK19)mRNA和细胞角蛋白片段21-1(CYFRA21-1)、组织多肽特异性抗原(TPS)联合测定的临床价值。方法取48例食管癌患者术前外周血标本,应用巢式逆转录聚合酶链反应法(nested-PCR)检测外周血单个核细胞CK19 mRNA的表达,同时采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定患者血清CYFRA21-1和TPS水平。结果食管癌患者外周血中CK19 mRNA和血清CYFRA21-1和TPS的阳性检出率分别为52.1%、83.3%和66.7%。联合检测CK19 mRNA、CYFRA21-1和TPS在食管癌患者中的阳性表达,发现其与患者肿瘤细胞分化程度、浸润深度、临床分期及有无淋巴结转移和远处转移等有相关性(P<0.05或P<0.01)。结论在食管癌患者的随访中开展外周血中CK19 mRNA和血清CYFRA21-1和TPS的联合检测可提高食管癌微转移的检出率,以及时监控患者的病情。 展开更多
关键词 食管癌 细胞角蛋白19 细胞角蛋白片段21—1 组织多肽特异性抗原 巢式逆转录聚合酶链反应 酶联免疫吸附法
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复方参七汤在人结肠癌细胞株裸鼠肝转移中的应用 被引量：5
13
作者 陆飞 蔡兵 沈洪薰 《南通医学院学报》 2004年第1期47-49,52,共4页
目的 :建立人结肠癌细胞株裸鼠肝转移模型 ,研究复方参七汤对裸鼠肝转移的影响。方法 :对 2 4只BAL B/ C裸鼠 ,经脾脏注入指数生长期的人结肠癌 (低分化腺癌 )细胞悬液 (L s174 t) 0 .1ml,含细胞数 1× 10 6个 ,切除脾脏 ,分成实验... 目的 :建立人结肠癌细胞株裸鼠肝转移模型 ,研究复方参七汤对裸鼠肝转移的影响。方法 :对 2 4只BAL B/ C裸鼠 ,经脾脏注入指数生长期的人结肠癌 (低分化腺癌 )细胞悬液 (L s174 t) 0 .1ml,含细胞数 1× 10 6个 ,切除脾脏 ,分成实验组和对照组各 12只。实验组每天喂以含 0 .6 ml/ 2 0 g体重复方参七汤颗粒饲料 ,对照组裸鼠喂以颗粒饲料 ,记录裸鼠体重、神志、摄食。喂养 3周后 ,抽取各组裸鼠心脏血后处死 ,观察腹腔内肿瘤生长情况 ,检查肝转移癌灶数目 ,挖出各个癌结节并称重。标本作病理组织学检查 ,同时采用免疫组化 (SP)方法检测肿瘤转移抑制基因 nm2 3H1- NDPK表达 ;采用巢式逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)法 ,检测裸鼠血中 CK2 0 m RNA表达。结果 :(1)建立人结肠癌细胞株裸鼠肝转移模型 ,肝转移率 10 0 %。病理组织学证实肝转移癌细胞具有人结肠癌 (低分化腺癌 )特征。 (2 )实验组裸鼠实验前后体重增长 4 .12± 0 .5 3g,明显高于对照组 3.2 1± 0 .5 9g(P<0 .0 5 )。 (3)实验组裸鼠肝转移癌结节的数目 2 .4 2± 0 .99个 ,明显低于对照组 4 .17± 1.99个 (P<0 .0 5 )。(4 )实验组裸鼠肝转移癌重 6 3.6 7± 2 1.2 9m g,明显低于对照组 94 .32± 37.86 m g(P<0 .0 5 )。 (5 )实验组裸鼠肝转移癌重 展开更多
关键词 结肠癌 肝转移 裸鼠模型 nm23-H1 CK20 mRNA 巢式逆转录聚合酶链反应
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以MAGE A1-A6亚型基因mRNA为特异标记检测肺癌细胞 被引量：4
14
作者 唐艳 夏大文 +2 位作者 李亚荣 万敏 菜元本 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第21期2123-2125,共3页
目的探讨肺癌患者痰液及外周血中黑色素瘤抗原基因(MAGE)A1-A6亚型mRNA的表达及其对早期肺癌的诊断意义。方法应用巢式RT-PCR技术,对23例肺癌病人、8例肺良性病变者和10例健康人的痰液及外周血中MAGE A1-A6亚型基因的mRNA表达进行检测... 目的探讨肺癌患者痰液及外周血中黑色素瘤抗原基因(MAGE)A1-A6亚型mRNA的表达及其对早期肺癌的诊断意义。方法应用巢式RT-PCR技术,对23例肺癌病人、8例肺良性病变者和10例健康人的痰液及外周血中MAGE A1-A6亚型基因的mRNA表达进行检测。结果23例肺癌病人中7例检测到痰液脱落细胞中有MAGE A1-A6亚型基因mRNA表达,检出率30.4%(7/23);9例检测到外周血有表达,检出率39.1%(9/23);痰液和外周血肺癌细胞联合检出率为47.8%(11/23),大于痰液细胞学检查检出率17.4%(4/23)(P<0.05)。而肺良性病变者和健康人中均未检测到MAGEA1-A6亚型基因mRNA的表达。结论MAGE A1-A6亚型基因的mRNA可作为检测肺癌患者痰液和外周血癌细胞的标记物,两者联合检测有助于提高肺癌的检出率。 展开更多
关键词 肺肿瘤 黑色素瘤抗原基因 巢式逆转录聚合酶链反应
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巢式逆转录聚合酶链反应检测冠状病毒的研究 被引量：4
15
作者 温韬 邱道明 +6 位作者 黄德庄 郎振为 闫惠平 檀玉芬 张永宏 丁惠国 吴昊 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期443-445,共3页
目的 建立一种新的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)反应模式,以提高传染性非典型肺炎(SARS)冠状病毒检测的阳性率和研究病毒在机体的定位状态和致病机理。方法 采用两种RT-PCR反应模式检测SARS患者血浆、淋巴细胞、粪便以及肺组织中病毒核... 目的 建立一种新的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)反应模式,以提高传染性非典型肺炎(SARS)冠状病毒检测的阳性率和研究病毒在机体的定位状态和致病机理。方法 采用两种RT-PCR反应模式检测SARS患者血浆、淋巴细胞、粪便以及肺组织中病毒核酸。结果 和常规PCR方法相比,新的PCR反应模式能显著提高标本中病毒的检出率,差别有统计学意义;急性期SARS患者淋巴细胞中病毒阳性率较高(84.6％);血浆中病毒阳性率较低(11.5％)。结论 新RT-PCR反应模式可能有利于早期诊断、筛检SARS病原体;淋巴细胞中病毒的检出率较高,提示此类标本可用于SARS实验室诊断,对分析和阐明SARS的发病机制亦可能有一定的指导作用。 展开更多
关键词 巢式逆转录聚合酶链反应 检测 冠状病毒 淋巴细胞 传染性非典型肺炎
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乳腺小黏蛋白在检测乳腺癌患者外周血微转移中的意义 被引量：3
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作者 仲雷 张建国 +2 位作者 郭宝良 杨学伟 单明 《中华乳腺病杂志（电子版）》 CAS 2008年第1期24-27,共4页
目的探讨乳腺小黏蛋白(small breastepithelial mucin,SBEM)mRNA作为检测乳腺癌患者外周血微转移指标的临床意义。方法用巢式逆转录-聚合酶链反应(Nested-RT-PCR)法检测22例女性胃癌、16例结/直肠癌、107例乳腺癌、40例乳腺纤维腺瘤患者... 目的探讨乳腺小黏蛋白(small breastepithelial mucin,SBEM)mRNA作为检测乳腺癌患者外周血微转移指标的临床意义。方法用巢式逆转录-聚合酶链反应(Nested-RT-PCR)法检测22例女性胃癌、16例结/直肠癌、107例乳腺癌、40例乳腺纤维腺瘤患者和27例健康志愿者外周血中SBEM-mRNA的表达情况。结果107例乳腺癌患者外周血中SBEM-mRNA有57例表达,阳性率为53.27%,其余对照组中SBEM-mRNA表达均为阴性。两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。SBEM-mRNA的阳性表达与患者的淋巴结转移状况和TNM分期均有相关性(P均<0.01);而与患者的年龄、原发肿瘤大小、病理类型、ER、PR等无相关性(P>0.05)。结论SBEM-mRNA特异表达于乳腺癌患者的外周血,可能成为检测乳腺癌患者外周血中微转移和判断预后的指标之一。 展开更多
关键词 乳腺癌 微转移 巢式逆转录聚合酶链反应 SBEM—mRNA
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应用激光显微切割技术检测单个结肠细胞的基因表达 被引量：2
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作者 石欣 高乃荣 +2 位作者 胡浩霖 霍明东 汤文浩 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期310-312,共3页
目的 :探讨检测单个结肠细胞的基因表达的方法。方法 :应用激光显微切割技术 (lasermicrodissection)从冰冻切片上将单个结肠细胞切下 ,提取总RNA ,将RNA逆转录成cDNA ,采用巢式逆转录聚合酶链反应 (nestedRT PCR)检测mRNA的表达。结果 ... 目的 :探讨检测单个结肠细胞的基因表达的方法。方法 :应用激光显微切割技术 (lasermicrodissection)从冰冻切片上将单个结肠细胞切下 ,提取总RNA ,将RNA逆转录成cDNA ,采用巢式逆转录聚合酶链反应 (nestedRT PCR)检测mRNA的表达。结果 :在显微镜下用紫外激光显微切割机 ,将单个结肠细胞成功切下 ,提取RNA后 ,逆转录成cDNA ,经过巢式RT PCR扩增后 ,扩增产物在琼脂糖凝胶上清晰可见。结论 :联合应用激光显微切割和巢式RT 展开更多
关键词 激光显微切割 检测 结肠细胞 基因表达 巢式逆转录聚合酶链反应
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肝细胞癌患者外周血甲胎蛋白mRNA的检测及意义 被引量：2
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作者 曹骥 覃柳亮 +6 位作者 苏建家 李瑗 杨南武 谢伟敏 班克臣 欧超 莫钦国 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第1期53-56,共4页
目的：探讨肝细胞癌患者外周血中微小转移及其临床意义。方法：用巢式逆转录聚合酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ－ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测６５例肝细胞癌、２１例非肝癌的恶性肿瘤、２２例慢性乙型肝炎或肝硬化患者及２１例健康志愿者外周静脉... 目的：探讨肝细胞癌患者外周血中微小转移及其临床意义。方法：用巢式逆转录聚合酶链反应（Ｎｅｓｔｅｄ－ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测６５例肝细胞癌、２１例非肝癌的恶性肿瘤、２２例慢性乙型肝炎或肝硬化患者及２１例健康志愿者外周静脉血中的甲胎蛋白（ＡＦＰ）ｍＲＮＡ。结果： ＡＦＰ－ｍＲＮＡ在健康志愿者、非肝癌恶性肿瘤患者外周血中均为阴性；在肝细胞癌组外周血中ＡＦＰ－ｍＲＮＡ的检出率（６７．７％，４４／６５）明显高于慢性乙型肝炎或肝硬化组（９．１％，２／２２，Ｐ＜０．０１）。ＡＦＰ－ｍＲＮＡ检出率与临床分期、门静脉癌栓、肝外转移显著相关。经１年的随访发现治疗后外周血ＡＦＰ－ｍＲＮＡ阳性与肝癌患者预后有显著相关。在１２例血清ＡＦＰ＜２５μｇ／Ｌ的肝癌病人血中，７例（５８． ３％）可检出ＡＦＰ－ｍＲＮＡ。结论： ＡＦＰ－ｍＲＮＡ可作为血循环中有肝癌细胞或肝细胞的标志物，在肝癌患者，阳性预示有血源性转移的可能，可作为预测肝癌复发、转移的参考指标；并且ＡＦＰ－ｍＲＮＡ对血清ＡＦＰ阴性或低值的肝癌患者能起到补充诊断作用。 展开更多
关键词 巢式逆转录聚合酶链反应 甲胎蛋白 MRNA 肝细胞癌 外周血
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逆转录聚合酶链反应在艾滋病患者HIV-1毒株env基因的序列测定和亚型分析中的应用 被引量：3
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作者 王辉 李兵 +4 位作者 徐六妹 陆坚 李丽雄 胡毅文 周伯平 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期430-432,共3页
目的了解深圳地区艾滋病患者中Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)毒株各亚型的感染情况,及其不同亚型对患者疾病进程的影响。方法采用巢式逆转录聚合酶链反应(RTPCR)法对26例艾滋病患者血浆中的HIV-1毒株的env基因片段进行扩增,并对扩增片段... 目的了解深圳地区艾滋病患者中Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)毒株各亚型的感染情况,及其不同亚型对患者疾病进程的影响。方法采用巢式逆转录聚合酶链反应(RTPCR)法对26例艾滋病患者血浆中的HIV-1毒株的env基因片段进行扩增,并对扩增片段进行序列测定和分析,同时检测其CD4+细胞计数与血浆病毒载量。结果基因系统树显示深圳地区26例艾滋病患者的HIV-1毒株env基因序列,B亚型12例,其中1例与欧美B亚型序列十分接近,11例与中国云南B亚型序列十分接近;循环重组亚型AE(CRF01AE)13例,均与泰国AE亚型序列十分接近。比较B、AE亚型感染患者的CD4细胞计数与病毒载量之间的差异无统计学意义。结论深圳地区艾滋病患者中以HIV-1毒株以B亚型和循环重组亚型AE最常见,尚未观察到B、AE亚型对艾滋病进展的影响。 展开更多
关键词 HIV-1毒株 艾滋病患者 序列测定 ENV基因 亚型分析 巢式逆转录聚合酶链反应 Ⅰ型人类免疫缺陷病毒 CD4^+细胞计数 CD4细胞计数 深圳地区 血浆病毒载量 毒株env B亚型 E亚型 感染情况 疾病进程 不同亚型 基因片段 患者血浆
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用改良的巢式逆转录聚合酶链反应技术检测血中CK20mRNA 被引量：1
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作者 胡庆宏 易诚予 刘明圭 《实用临床医学（江西）》 CAS 2006年第12期27-28,共2页
目的建立一种简便、快速的检测血中微量大肠癌细胞CK20mRNA的方法。方法用改良的巢式逆转录聚合酶链反应技术检测血中大肠癌标准细胞株VoLo的CK20mRNA。结果浓度分别为1、10、100、1000个/mL的大肠癌标准细胞株LoVo的每份标本,均扩增出... 目的建立一种简便、快速的检测血中微量大肠癌细胞CK20mRNA的方法。方法用改良的巢式逆转录聚合酶链反应技术检测血中大肠癌标准细胞株VoLo的CK20mRNA。结果浓度分别为1、10、100、1000个/mL的大肠癌标准细胞株LoVo的每份标本,均扩增出了符合所设计片段大小的303bp的目的产物条带。结论用改良的巢式逆转录聚合酶链反应技术检测血中微量存在的大肠癌细胞CK20mRNA具有简便、快速、灵敏的优点,可以大力地推广于临床。 展开更多
关键词 细胞角蛋白20 大肠癌 逆转录聚合酶链反应 巢式逆转录聚合酶链反应
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