腹腔注射人淋巴细胞建立人肝癌PBL-SCID嵌合模型 被引量：7

1

作者 黄嘉凌 刘燕艳 +3 位作者 刘然义 方壮伟 申权 吕明德 《中华肝胆外科杂志》 CAS CSCD 2005年第2期121-124,共4页

目的探索建立人肝癌PBL-SCID嵌合模型的方法.方法 C57/BL SCID小鼠腹腔注射健康志愿者外周血淋巴细胞(huPBL)2×107(1.0 ml),同时右腋部皮下注射5×105(0.2 ml)HepG2细胞.第2、4周鼠尾取血ELISA法测定人IgG含量,用流式细胞仪分... 目的探索建立人肝癌PBL-SCID嵌合模型的方法.方法 C57/BL SCID小鼠腹腔注射健康志愿者外周血淋巴细胞(huPBL)2×107(1.0 ml),同时右腋部皮下注射5×105(0.2 ml)HepG2细胞.第2、4周鼠尾取血ELISA法测定人IgG含量,用流式细胞仪分析小鼠外周血单个核细胞中人淋巴细胞比例.4周MTT法测定小鼠脾细胞对HepG2细胞的杀伤能力,免疫组化检测小鼠脾脏中人淋巴细胞的存在.结果模型成瘤率为100%,成瘤潜伏期12～18 d.2、4周时小鼠血中人IgG 分别达69.8 μg/ml、125.9 μg/ml,人淋巴细胞占单核细胞的比例分别为10.5%和3.5%.4周时免疫组化检测出人淋巴细胞分布于小鼠脾脏中,小鼠脾细胞对HepG2细胞的杀伤力为20.3%.处死动物,常规病理切片见肿瘤生长.结论 SCID小鼠腹腔注射人淋巴细胞、皮下注射肝癌细胞可建立人肝癌PBL-SCID嵌合模型. 展开更多

关键词 人淋巴细胞 小鼠 SCID 嵌合模型 人肝癌 腹腔注射 HepG2细胞 动物 BL 脾细胞

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人/山羊造血干细胞嵌合模型的分子检测 被引量：1

2

作者 陈美珏 颜景斌 +3 位作者 方彧聃 任兆瑞 肖艳萍 黄淑帧 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第12期634-637,共4页

目的　使用分子生物学技术对人 /山羊造血干细胞嵌合模型进行检测。方法　从 11只胚胎期移植了人造血干细胞的山羊外周血中分别抽提DNA和总RNA ,然后分别对 11只山羊DNA进行人CD3 4 基因、GPA基因、SRY基因的PCR扩增 ,对其中 5只山羊的... 目的　使用分子生物学技术对人 /山羊造血干细胞嵌合模型进行检测。方法　从 11只胚胎期移植了人造血干细胞的山羊外周血中分别抽提DNA和总RNA ,然后分别对 11只山羊DNA进行人CD3 4 基因、GPA基因、SRY基因的PCR扩增 ,对其中 5只山羊的人CD3 4 基因及另 6只山羊的GPA基因表达进行了RT PCR检测 ,并用人α 微卫星序列片段作为探针对 8只实验山羊DNA进行了Southernblot杂交 ,同时还用人Y染色体探针进行荧光原位杂交 (FISH)。结果　经PCR检测 ,所有 11只实验山羊的DNA中均可扩增出人CD3 4 基因和GPA基因 ,5只实验山羊的DNA中可扩增出人SRY基因。South ernblot、RT PCR和FISH的结果亦均显示阳性。结论　通过分子检测证实人造血干细胞已在山羊体内存活。用该方法对人 /山羊造血干细胞嵌合模型进行检测是可行的。 展开更多

关键词 造血干细胞 嵌合模型 分子检测

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SCID-hu小鼠在HBV感染研究中的应用 被引量：1

3

作者 赵琪 吴超 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2007年第10期1110-1114,共5页

乙型肝炎病毒由于其特殊的嗜肝性,不易在其他动物模型重现其感染过程．SCID小鼠作为一种先天性T,B细胞双重缺陷动物,为异种移植研究提供了极大的帮助．随着SCID-hu模型的出现,人们通过移植人肝细胞、人外周血淋巴细胞等各种方法建立人... 乙型肝炎病毒由于其特殊的嗜肝性,不易在其他动物模型重现其感染过程．SCID小鼠作为一种先天性T,B细胞双重缺陷动物,为异种移植研究提供了极大的帮助．随着SCID-hu模型的出现,人们通过移植人肝细胞、人外周血淋巴细胞等各种方法建立人鼠嵌合模型,让其感染乙型肝炎病毒,来研究乙型肝炎的发病机制．嵌合模型模拟了疾病在人体内的过程,据此所得的研究结果具有更强的说服力． 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 SCID-hu小鼠 嵌合模型

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间期荧光原位杂交技术检测人/山羊嵌合模型 被引量：1

4

作者 肖艳萍 陈美珏 +2 位作者 盛敏 杨华 黄淑帧 《中华医学遗传学杂志》 EI CAS CSCD 2003年第2期147-150,共4页

目的　建立一种高度灵敏特异的间期荧光原位杂交 (interphasefluorescenceinsituhybridiza tion ,IFISH )技术 ,以检测人 /山羊嵌合模型中低比例的人细胞。方法　采用人特异Y染色体卫星DNA探针CEPY和 17号染色体卫星DNA探针p17H8对两头... 目的　建立一种高度灵敏特异的间期荧光原位杂交 (interphasefluorescenceinsituhybridiza tion ,IFISH )技术 ,以检测人 /山羊嵌合模型中低比例的人细胞。方法　采用人特异Y染色体卫星DNA探针CEPY和 17号染色体卫星DNA探针p17H8对两头移植人男性造血干细胞 (hematopoieticstemcell,HSC)的人 /山羊嵌合模型、1头正常阴性山羊和 1名正常人男性的外周血进行IFISH分析。为评价FISH检测效率的正确性 ,将正常人男性与正常阴性山羊细胞按 1/10 0、1/5 0 0和 1/10 0 0混合进行IFISH分析。并确定一套信号计数规则 ,以保证方法稳定可靠。结果　人 /山羊混合细胞中人细胞阳性率与原比例相近。人细胞阳性率平均值为正常人男性 98 60 % (CEPY)和 10 0 0 0 % ( p17H8)、正常阴性山羊为 0、人 /山羊嵌合模型为 0 .2 3 % (CEPY)和 0 11% ( p17H8)。结果表明人 /山羊嵌合模型中有低比例的人细胞存在 ,且为男性细胞。结论　本研究建立的IFISH技术高度灵敏特异 ,能真实反映检测细胞的比例 ,为人 /山羊嵌合模型中低比例的人细胞检测提供了直观、灵敏、特异的途径。 展开更多

关键词 间期荧光原位杂交 造血干细胞 人 山羊 嵌合模型

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免疫学

5

作者 方舫 《中国医学文摘（基础医学）》 CSCD 2005年第2期103-107,共5页

0500705 人／鼠嵌合模型中人重组α-病毒疫苗的免疫学作用评价，0500706 HLA—C和HLA—G基因真核细胞双表达载体的克隆及鉴定分析，0500707 死亡结构域沉默子参与两型TNF—α胞毒效应机制的研究，0500708 人PD—L2基因克隆及其在大肠杆... 0500705 人／鼠嵌合模型中人重组α-病毒疫苗的免疫学作用评价，0500706 HLA—C和HLA—G基因真核细胞双表达载体的克隆及鉴定分析，0500707 死亡结构域沉默子参与两型TNF—α胞毒效应机制的研究，0500708 人PD—L2基因克隆及其在大肠杆菌中的表达，0500709 口蹄疫病毒VP1蛋白在酵母中的表达及免疫原性分析。 展开更多

关键词 免疫学作用 基因克隆 双表达载体 口蹄疫病毒 病毒疫苗 嵌合模型 鉴定分析 真核细胞 效应机制

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Fah^(-/-)Rag2^(-/-)IL2Rg^(-/-)小鼠肝脏原位异种重建模型的建立及其评价

6

作者 张蒙 周琪 胡正 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1358-1365,共8页

目的:构建猪-小鼠肝细胞嵌合模型,探讨猪肝细胞在无T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤细胞(NK细胞)介导排斥条件下的移植及再生的相关条件,评估猪肝细胞在异种受体中的定居、增殖和功能因子分泌情况,为提高猪源化小鼠模型中猪肝细胞的重... 目的:构建猪-小鼠肝细胞嵌合模型,探讨猪肝细胞在无T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤细胞(NK细胞)介导排斥条件下的移植及再生的相关条件,评估猪肝细胞在异种受体中的定居、增殖和功能因子分泌情况,为提高猪源化小鼠模型中猪肝细胞的重建效率提供依据。方法:采用脾脏内注射法将猪肝细胞移植至Fah^(-/-)Rag2^(-/-)IL2Rg^(-/-)(FRG)小鼠体内,构建移植模型。将16只FRG小鼠随机分为对照组、空白对照组、实验组和绿色荧光蛋白(GFP)基因实验组,每组4只。空白对照组小鼠停止给予2-(2-硝基-4-三氟甲基苯甲酰基)-1,4-环己二酮(NTBC),监测体质量;对照组4只小鼠注射猪肝细胞,移植前1周停止给予NTBC,移植后监测体质量,当体质量下降20%时,给予NTBC 3 d;实验组小鼠注射猪肝细胞,移植前1周停止给予NTBC,移植后监测体质量,当体质量下降20%时,给予NTBC 3 d;GFP基因实验组小鼠注射携带GFP基因猪肝细胞,移植前1周停止给予NTBC,移植后监测体质量,当体质量下降20%时,给予NTBC 3 d。观察各组小鼠体质量、生存情况。检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,流式细胞术检测各组小鼠外周血中CD19+、CD3+和NK1.1+细胞表达情况,ELISA法检测各组小鼠血清中猪白蛋白表达水平,免疫组织化学法检测各组小鼠猪肝细胞再生效率。结果:与剪碎后再以胶原酶消化的方式比较,两步灌注法消化过程更温和、对细胞损伤更小,细胞活性可以达到92%。停止给予NTBC后,对照组小鼠体质量进行性降低,生命活力逐渐降低。连续停药第28天小鼠开始出现死亡现象。小鼠肝组织中出现肝细胞肿大、细胞浆疏松透亮和细胞核溶解等不可逆细胞损伤。空白对照组小鼠停药后血清中ALT水平逐渐升高。对照组停药小鼠重新给予NTBC后,体质量逐渐恢复至正常水平。流式细胞术,停止给予NTBC后,小鼠外周血中CD19+、CD3+和NK1.1 展开更多

关键词 肝细胞异种移植 Fah 肝细胞 猪-小鼠肝细胞嵌合模型 免疫缺陷小鼠

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let-7e嵌合小鼠模型的建立和表型分析

7

作者 孙迪 夏菲 +2 位作者 杨燚 陈火 张进平 《东南大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2015年第5期696-704,共9页

目的:探讨微小RNA let-7e在淋巴细胞分化发育中的作用。方法:构建let-7e过表达嵌合小鼠模型,研究let-7e对淋巴组织中T细胞、B细胞、树突状细胞(DC)、髓系来源的抑制性细胞(MDSC)发育的影响;通过流式细胞仪检测MDSC的细胞增殖和细胞凋亡... 目的:探讨微小RNA let-7e在淋巴细胞分化发育中的作用。方法:构建let-7e过表达嵌合小鼠模型,研究let-7e对淋巴组织中T细胞、B细胞、树突状细胞(DC)、髓系来源的抑制性细胞(MDSC)发育的影响;通过流式细胞仪检测MDSC的细胞增殖和细胞凋亡,初步探讨let-7e促使MDSC增多的机制。结果:嵌合小鼠模型检测结果显示:过表达let-7e后B细胞减少,浆细胞样DC(p DC)、经典DC(c DC)增多,而T细胞及亚群比例没有变化;同时,骨髓和脾脏中的MDSC比例升高,其凋亡水平明显降低,但其增殖没有改变。结论:let-7e参与了淋巴细胞的分化和发育;let-7e可以通过抑制细胞凋亡促进MDSC的增多。 展开更多

关键词 骨髓嵌合模型 let-7e 免疫表型 髓系来源的抑制性细胞 细胞凋亡

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HIV-1感染人源化小鼠模型的建立与鉴定

8

作者 夏巍 周艳 +4 位作者 龚睿 谢芳 郭晓萍 周立 冯勇 《口岸卫生控制》 2019年第3期22-29,共8页

目的通过经尾静脉或腹腔两种方式给NOD/SCID小鼠注射正常人外周血单核细胞(PBMCs)的方式,来探究对于建立HuPBMCs-NOD/SCID人鼠嵌合模型两种移植方式建模效果的比较,随后对该模型进行HIV病毒感染的鉴定。方法将9只雌性NOD/SCID小鼠给予... 目的通过经尾静脉或腹腔两种方式给NOD/SCID小鼠注射正常人外周血单核细胞(PBMCs)的方式,来探究对于建立HuPBMCs-NOD/SCID人鼠嵌合模型两种移植方式建模效果的比较,随后对该模型进行HIV病毒感染的鉴定。方法将9只雌性NOD/SCID小鼠给予亚致死剂量全身照射后,分为3组,实验Ⅰ组:3只雌性NOD/SCID小鼠,腹腔注射0.5 mLPBMC细胞悬液;实验Ⅱ组:3只雌性NOD/SCID小鼠,尾静脉注射0.2mLPBMC细胞悬液;实验Ⅲ组:3只雌性NOD/SCID小鼠,注射0.2mLRPMI 1640细胞培养液,作为Ⅰ组及Ⅱ组的实验对照。通过观察移植细胞后小鼠的存活时间与生活状态,并施以流式细胞技术鉴定小鼠眼眶外周血中CD45^+、CD4^+、CD8^+等人源化细胞的比例。另取4只NOD/SCID小鼠进行腹腔移植3天后,腹腔注射HIV感染的PBMCs细胞并以未移植的NOD/SCID小鼠作为对照,在感染后第5wk采集小鼠眼眶血,流式细胞技术及免疫荧光定量PCR方法分别检测其CD45^+、CD4^+、CD8^+等人源化细胞的比例及病毒滴度。结果两种方式注射正常人PBMC细胞至小鼠内2~10周后,实验组小鼠体内均检测到人源化免疫细胞的浸润,各细胞比例随小鼠移植时间而增加;但相比尾静脉注射,腹腔注射鼠内人源性免疫细胞比例明显较高;此外二种移植方式小鼠存活时间均达10wk,即成功建立HuPBMCs-NOD/SCID人鼠嵌合模型。随后对该人鼠嵌合模型进行腹腔注射HIV感染的PBMC,第5周免疫荧光定量PCR能检测到病毒滴度,发现病毒滴度上升,同时结合流式细胞技术分析随着病毒滴度上升,CD45^+分子比例下降且CD4^+/CD8^+<1。结论应用尾静脉或腹腔注射正常人外周血单个核细胞(PBMCs)的方法,均可建立人PBMCs-NOD/SCID人鼠嵌合模型;但我们发现相比尾静脉注射方式,腹腔注射对于建立HuPBMCs-NOD/SCID人鼠嵌合模型有着明显的优势。同时通过腹腔注射HIV感染的PBMC至该模型,HIV病毒可以成功地被感染。这为艾滋� 展开更多

关键词 人外周血单个核细胞 NOD/SCID小鼠 HuPBMCs-NOD/SCID人鼠嵌合模型 HIV

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用于乙型肝炎病毒相关研究的人源化嵌合肝脏小鼠模型应用进展

9

作者 沈磊 张思航 +1 位作者 周太成 韦嘉 《山东医药》 CAS 2023年第8期91-94,共4页

人源化嵌合肝脏小鼠模型是一类具有肝损伤及免疫缺陷特点的小鼠模型。该小鼠模型体内携带人肝细胞,成功攻克了由于乙型肝炎病毒(HBV)宿主范围狭窄导致的HBV易感动物模型缺乏问题。近年来,随着各种人源化嵌合肝脏小鼠模型的逐渐完善,使得... 人源化嵌合肝脏小鼠模型是一类具有肝损伤及免疫缺陷特点的小鼠模型。该小鼠模型体内携带人肝细胞,成功攻克了由于乙型肝炎病毒(HBV)宿主范围狭窄导致的HBV易感动物模型缺乏问题。近年来,随着各种人源化嵌合肝脏小鼠模型的逐渐完善,使得HBV相关动物研究的顺利开展成为可能。从Alb-uPA嵌合肝脏小鼠模型、Alb-rtTA/TRE-uPA嵌合肝脏小鼠模型、FRG嵌合小鼠模型到TK-NOG嵌合小鼠模型、人源化双嵌合小鼠模型逐渐克服了宿主物种限制和疾病建模方面的障碍。人源化双嵌合小鼠模型同时具备人免疫系统及人肝细胞,在HBV免疫机制研究及疫苗研发中具有极大的应用前景。了解不同人源化嵌合肝脏小鼠模型的制作情况、适用情况及优缺点,可为相关研究中HBV易感动物模型的选择提供参考。 展开更多

关键词 人源化嵌合肝脏小鼠模型 乙型肝炎病毒 动物模型

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异种肝细胞移植进展 被引量：2

10

作者 刘菲 刘雁冰 +1 位作者 陈锡美 赵中辛 《国际消化病杂志》 CAS 2007年第1期27-30,共4页

肝细胞移植是治疗严重肝脏疾病的有效方法。在动物实验中,已证明猪肝细胞移植可改善急性肝衰竭大鼠的预后。但肝细胞移植尤其是异种肝细胞移植还有一些关键问题有待解决。此文就当前异种肝细胞移植作一综述。

关键词 肝细胞移植 肝脏疾病 肝衰竭动物模型 免疫隔离技术 嵌合肝模型

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异种造血嵌合体模型的免疫耐受机制 被引量：1

11

作者 单飞 蔡振杰 +2 位作者 王晓武 胡军 胡巧侠 《第四军医大学学报》 北大核心 2002年第20期1864-1866,共3页

目的　在已建立的大鼠→兔异种造血嵌合体模型中 ,了解异种移植免疫耐受机制 .方法　通过直接、间接免疫荧光染色技术及补体介导的细胞毒试验等方法 ,检测大鼠MHC- 类分子阳性细胞以及体液免疫功能 .结果　检测出大鼠 MHC- 类分子阳... 目的　在已建立的大鼠→兔异种造血嵌合体模型中 ,了解异种移植免疫耐受机制 .方法　通过直接、间接免疫荧光染色技术及补体介导的细胞毒试验等方法 ,检测大鼠MHC- 类分子阳性细胞以及体液免疫功能 .结果　检测出大鼠 MHC- 类分子阳性细胞比例为 31.0 %～ 6 1.9% ,且此细胞体液免疫功能正常 ;同时在此模型中检测出有较高浓度的兔抗大鼠单个核细胞抗体存在 ,且受体补体功能正常 .结论　 1用我们所建立的方法进行异种骨髓移植是成功的 ;2在受体补体活性正常的嵌合体模型中大鼠单个核细胞与兔抗大鼠单个核细胞抗体出现的共存现象 (即适应 accom m- oda-tion) ,是形成此嵌合体的原因 . 展开更多

关键词 异种移植 大鼠 异种造血嵌合体模型 免疫耐受机制

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持久稳定的大鼠→小鼠造血嵌合体模型的建立

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作者 武小娟 李春富 +1 位作者 唐湘凤 石磊 《第四军医大学学报》 北大核心 2005年第24期2251-2254,共4页

目的建立持久稳定的造血嵌合体模型.方法将预处理后的SD大鼠经尾静脉注射BALB/c小鼠骨髓细胞,诱导形成特异性耐受的嵌合体SD大鼠.30d后,再将此嵌合体大鼠的骨髓反向移植给致死性照射后的BALB/c小鼠,监测小鼠的存活率,移植后30d做皮片移... 目的建立持久稳定的造血嵌合体模型.方法将预处理后的SD大鼠经尾静脉注射BALB/c小鼠骨髓细胞,诱导形成特异性耐受的嵌合体SD大鼠.30d后,再将此嵌合体大鼠的骨髓反向移植给致死性照射后的BALB/c小鼠,监测小鼠的存活率,移植后30d做皮片移植和混合淋巴细胞培养,观察小鼠嵌合率的变化.结果嵌合体模型小鼠仅有轻度移植物抗宿主病的表现,生存期明显延长,移植后嵌合率较稳定,移植皮片存活期延长,与对照组相比有显著性差异.结论通过输入嵌合体骨髓的方法可建立稳定持久的大鼠→小鼠嵌合体模型. 展开更多

关键词 嵌合体模型 全身照射 骨髓移植

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