蛋白质层析用离子交换和疏水作用层析介质的发展概况 被引量：6

1

作者 浦宇 王芝祥 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期975-982,共8页

层析是蛋白质纯化的关键技术之一 ,作为层析技术的核心———层析介质一直以来是层析技术研究的一个热点。近年来 ,越来越多的新型层析介质被开发出来 ,如粒度均匀的交联多糖、人工合成的大孔聚合物、触角型吸附剂、软胶包裹在硬胶表面... 层析是蛋白质纯化的关键技术之一 ,作为层析技术的核心———层析介质一直以来是层析技术研究的一个热点。近年来 ,越来越多的新型层析介质被开发出来 ,如粒度均匀的交联多糖、人工合成的大孔聚合物、触角型吸附剂、软胶包裹在硬胶表面等介质。主要介绍应用较为广泛的IEC和HIC介质的组成、特性及其在蛋白质纯化中的应用 ,还研究了与HIC技术相关的两种新技术 :亲硫层析和疏水电荷诱导层析 (HCIC) ,重点介绍了HCIC的介质及其应用 ,同时也讨论了在蛋白质纯化中应用的三相纯化策略 (富集、中间纯化和精制 )。结合我国的实际情况 。 展开更多

关键词 离子交换层析 疏水作用层析 层析介质 蛋白质层析技术

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一种新型的琼脂糖疏水层析介质开发及其在重组乙肝表面抗原(CHO-HBsAg)分离纯化中的应用 被引量：5

2

作者 王阳木 闭静秀 +6 位作者 赵岚 周卫斌 李岩 黄永东 张焱 林海 苏志国 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期278-284,共7页

以粒径均一的国产高交联度快速流琼脂糖为基质,采用活化、交联等步骤合成了针对分离纯化CHO-HBsAg的3C间臂的丁基琼脂糖疏水介质,通过控制丁基配基密度提高分离HBsAg的纯化倍数和回收率,获得了纯化倍数约20、HBsAg回收率约80%的介质。... 以粒径均一的国产高交联度快速流琼脂糖为基质,采用活化、交联等步骤合成了针对分离纯化CHO-HBsAg的3C间臂的丁基琼脂糖疏水介质,通过控制丁基配基密度提高分离HBsAg的纯化倍数和回收率,获得了纯化倍数约20、HBsAg回收率约80%的介质。评估了合成介质的理化性质,流速为500cm/h时柱压力小于0.06MPa,表明介质具有较高的机械强度和良好的流动性能,介质经过酸、碱、变性剂等处理后化学性质稳定。将介质合成工艺进一步放大到2L介质/批,应用到HBsAg分离纯化的三步层析整和工艺中,结果表明,批量合成的疏水介质,HBsAg回收率与进口介质相当,HBsAg终产品纯度在95%以上,符合国家药典要求。最后考察了介质合成批次间的配基密度的可控性和单批次合成介质的重复使用性,结果表明,合成工艺和介质的重复性能满足产业化要求,这种成本低的介质有望替代目前工业生产广泛使用的进口疏水介质。 展开更多

关键词 疏水作用层析 层析介质 重组乙肝病毒表面抗原 纯化

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C_(18)-硅胶的原位合成及其作为常压层析介质在紫杉醇分离纯化中的应用 被引量：3

3

作者 张志强 王云山 +1 位作者 田桂莲 苏志国 《化学反应工程与工艺》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期281-285,共5页

以氯铂酸为催化剂 ,采用原位法合成了造价低廉、性能稳定的 C1 8-反相层析介质。考察了原位法第二步反应中催化剂、反应时间及反应温度等对介质合成的影响。将合成的 C1 8-硅胶应用于紫杉醇的常压层析提纯 ,可使紫杉醇的纯度从 2 7%提高... 以氯铂酸为催化剂 ,采用原位法合成了造价低廉、性能稳定的 C1 8-反相层析介质。考察了原位法第二步反应中催化剂、反应时间及反应温度等对介质合成的影响。将合成的 C1 8-硅胶应用于紫杉醇的常压层析提纯 ,可使紫杉醇的纯度从 2 7%提高到 95%以上 ,回收率大于 90 %。 展开更多

关键词 层析介质 原位合成 C18-硅胶 紫杉醇 抗癌药

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一种纤维素/钛白粉阳离子交换扩张床吸附剂 被引量：4

4

作者 雷引林 林东强 +1 位作者 姚善泾 朱自强 《浙江大学学报（工学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第9期1409-1412,共4页

为了使得扩张床吸附技术更好地用于蛋白质分离,提出一种含有羧甲基阳离子交换基团的扩张床吸附剂. 采用了反相悬浮热再生法,将超细钛白粉包埋于再生纤维素骨架之中,制备成均质型纤维素/钛白粉复合微球;再以复合微球作为扩张床吸附基质,... 为了使得扩张床吸附技术更好地用于蛋白质分离,提出一种含有羧甲基阳离子交换基团的扩张床吸附剂. 采用了反相悬浮热再生法,将超细钛白粉包埋于再生纤维素骨架之中,制备成均质型纤维素/钛白粉复合微球;再以复合微球作为扩张床吸附基质,用环氧氯丙烷交联后与一氯乙酸反应,得到羧甲基阳离子交换型扩张床吸附剂;测定了吸附剂在扩张床中的扩张特性和蛋白质吸附性能.结果表明,该吸附剂具有良好的扩张床膨胀和吸附性能,每升吸附剂的溶菌酶饱和吸附容量达98.7 g,扩张床中蛋白质穿透曲线形状与填充床基本相似,每升吸附剂的10%穿透吸附容量可达到69.3 g溶菌酶. 展开更多

关键词 扩张床吸附 层析介质 阳离子交换 纤维素 蛋白质

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混合模式色谱介质的制备及其在蛋白分离纯化中的应用 被引量：2

5

作者 王仕杰 薛彦晓 +4 位作者 靳海波 何广湘 潘天予 柏张傲 张荣月 《当代化工研究》 2022年第4期1-6,共6页

随着生物制药技术的迅速发展,生物制品的制备规模和质量要求的提高对下游分离纯化工艺提出了新的要求。如何通过分离纯化手段快速获得目标产物并进一步降低成本是现代生物分离技术研究的热点问题。混合模式色谱技术是一种高效的分离纯... 随着生物制药技术的迅速发展,生物制品的制备规模和质量要求的提高对下游分离纯化工艺提出了新的要求。如何通过分离纯化手段快速获得目标产物并进一步降低成本是现代生物分离技术研究的热点问题。混合模式色谱技术是一种高效的分离纯化方法,一般兼有多种作用模式,并且其蛋白结合量高、选择性好、洗脱条件温和、具有耐盐吸附等多种特性,可减少对料液的预处理操作,从而提高分离效率,降低生产成本。因此,该技术被广泛应用于蛋白质的分离纯化及相关领域中。本文对混合模式色谱技术的发展历程、分离机理、基质、配基类型及其在蛋白分离纯化中的应用等方面进行阐述,对当前混合模式介质的制备及其应用中存在的问题进行概括,希望能够为该项技术在生物制品制备生产中的应用提供一些参考。 展开更多

关键词 混合模式色谱 层析介质 蛋白纯化 液相色谱

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逆体积排阻色谱法在评价色谱介质孔径结构方面的应用 被引量：3

6

作者 池伟亚 侯恒磊 +3 位作者 康红艳 齐莉 靳海波 张荣月 《精细化工》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1320-1326,1428,共8页

介绍了影响层析介质分离纯化效果的结构参数。总结了测定色谱介质孔径结构常用的方法,如压汞法、氮气吸附法、小角X射线散射法、电镜观察法(SEM和TEM)和逆体积排阻色谱法(ISEC)。介绍了ISEC的基本原理及其涉及到的探针类型。对ISEC相关... 介绍了影响层析介质分离纯化效果的结构参数。总结了测定色谱介质孔径结构常用的方法,如压汞法、氮气吸附法、小角X射线散射法、电镜观察法(SEM和TEM)和逆体积排阻色谱法(ISEC)。介绍了ISEC的基本原理及其涉及到的探针类型。对ISEC相关理论,尤其是溶质半径、色谱理论和体积排阻色谱法(SEC)随机理论进行了重点阐述。比较了ISEC的优缺点。介绍了ISEC在评价介质孔径结构中的应用,对ISEC的应用前景进行了展望。 展开更多

关键词 逆体积排阻色谱法 层析介质 孔径结构 测定方法

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层析介质的寿命与层析介质的清洗验证 被引量：3

7

作者 樊丰林 《生物产业技术》 2009年第1期78-86,共9页

近20～30年中．生物技术在中国得到了迅猛的发展。随着生物制药技术的发展，生物药物的质量越来越得到重视。生物药物从研究到上市，其过程主要包括实验室成果转化、临床试验、由患者广泛应用。药物研发成功的关键是药物的有效性，同时... 近20～30年中．生物技术在中国得到了迅猛的发展。随着生物制药技术的发展，生物药物的质量越来越得到重视。生物药物从研究到上市，其过程主要包括实验室成果转化、临床试验、由患者广泛应用。药物研发成功的关键是药物的有效性，同时药物的安全性则更为重要。因此在严格确保高质量的同时，确保其有效性及工艺的稳定性显得尤为重。 展开更多

关键词 层析介质 生物药物 验证 清洗 寿命 生物技术 制药技术 成果转化

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大孔聚合物层析介质孔结构对蛋白载量的影响 被引量：3

8

作者 李恒 王少云 +10 位作者 方嘉璇 赵岚 靳海波 何广湘 郭晓燕 谷庆阳 郝思雯 热孜亚 支伟杰 于洪斌 张荣月 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2018年第12期2673-2678,共6页

分别以甲基丙烯酸缩水甘油酯和乙二醇二甲基丙烯酸酯作为功能单体和交联剂,采用悬浮聚合方法制备了大孔聚合物微球.考察了致孔剂组成对微球的孔径、比表面积的影响,并用聚乙烯亚胺将微球衍生为阴离子交换层析介质,考察了微球结构与蛋白... 分别以甲基丙烯酸缩水甘油酯和乙二醇二甲基丙烯酸酯作为功能单体和交联剂,采用悬浮聚合方法制备了大孔聚合物微球.考察了致孔剂组成对微球的孔径、比表面积的影响,并用聚乙烯亚胺将微球衍生为阴离子交换层析介质,考察了微球结构与蛋白载量之间的关系.结果表明,微球孔径尺寸随着致孔剂中不良溶剂用量[V(良溶剂)/V(不良溶剂)=1∶1～1∶3. 5]的增加而增大,而比表面积则呈相反趋势.离子交换容量(0. 11～0. 27 mmol/m L)与比表面积(4～38 m2/g)呈正相关,对应的蛋白静态结合载量亦呈正比关系.在所考察的孔径范围(301～1524 nm)内,蛋白动态结合载量先减少后保持稳定,即当孔径超过410 nm后,蛋白动态载量值保持在13 mg/m L不变,表明介质孔径超过此数值后蛋白载量不再受介质的比表面积影响.此外,以乙肝病毒表面抗原分子(HBs Ag,22 nm)为探针分子,利用激光共聚焦显微镜观察了该分子在微球内部的分布,结果表明,在该孔径考察范围内,HBs Ag均能完全扩散至微球内部. 展开更多

关键词 大孔聚合物微球 层析介质 蛋白载量 高通量

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层析介质使用寿命缩小模型的建立和确认 被引量：3

9

作者 杨红艳 隋礼丽 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第6期894-896,共3页

在现代生物制药工艺路线中,层析是最常用的一种技术手段。层析技术所需要的层析介质是药品监管的重点项目之一,其中层析介质的使用寿命(使用次数)必须经研究确认,并经药品监管部门审核和批准。在缩小模型上进行前瞻性研究是被广泛接受... 在现代生物制药工艺路线中,层析是最常用的一种技术手段。层析技术所需要的层析介质是药品监管的重点项目之一,其中层析介质的使用寿命(使用次数)必须经研究确认,并经药品监管部门审核和批准。在缩小模型上进行前瞻性研究是被广泛接受的层析介质使用寿命的研究方法。本文就层析介质使用寿命缩小模型的建立和确认作一简要综述。 展开更多

关键词 层析介质 使用寿命 缩小模型

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逆体积排阻层析法测定层析介质的孔径分布 被引量：3

10

作者 沈醉 林东强 姚善泾 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第4期867-874,共8页

针对层析介质的孔径分析,基于刚性球状分子进入柱状孔的假设,分别采用高斯正态分布和对数正态分布描述孔径分布,利用简化的单孔分配因子模型,建立了孔径分布函数和分配因子Kd的关联,通过体积排阻层析实验测定系列标准物的Kd,从而拟合得... 针对层析介质的孔径分析,基于刚性球状分子进入柱状孔的假设,分别采用高斯正态分布和对数正态分布描述孔径分布,利用简化的单孔分配因子模型,建立了孔径分布函数和分配因子Kd的关联,通过体积排阻层析实验测定系列标准物的Kd,从而拟合得到孔径分布信息,建立了逆体积排阻层析法。以葡聚糖作为分子大小的标准物,测定了5种典型层析介质(SP Sepharose FAST FLOW、Q Sepharose FAST FLOW、ToyopearlDEAE-650M、Streamline DEAE和Sephadex G-150)的Kd,计算和比较了不同介质的孔径分布,分析了介质的可吸附孔表面积等结构参数,证实了逆体积排阻层析法分析层析介质孔径分布的可行性和实用性。 展开更多

关键词 逆体积排阻层析 层析介质 孔径分布 分配因子

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下游工艺开拓中如何系统地筛选离子交换层析介质 被引量：1

11

《生物工程进展》 CSCD 1998年第2期55-59,共5页

下游层析工艺开拓中，选择层析介质最重要的因素包括纯度、动力载量和凝胶的使用寿命。本文作者示范了介质的动力载量及其回收率的重要区别。

关键词 下游层析 离子交换 层析介质 蛋白质纯化

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最新层析介质的发展

12

《生物工程进展》 CSCD 1995年第2期53-55,共3页

最新层析介质的发展ＮｅｉｌＢａｒｎｅｓ博士瑞典ＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｔｅｃｈ公司层析技术在其发展历史上有过许多有意义的进展，与其它科学一样，其新发展的技术引入速度也逐年有增加的趋势。解决分离的问题虽然并不是新的问题... 最新层析介质的发展ＮｅｉｌＢａｒｎｅｓ博士瑞典ＰｈａｒｍａｃｉａＢｉｏｔｅｃｈ公司层析技术在其发展历史上有过许多有意义的进展，与其它科学一样，其新发展的技术引入速度也逐年有增加的趋势。解决分离的问题虽然并不是新的问题，然而，分离效果却是越来越有效了。... 展开更多

关键词 色谱法 层析介质

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小肽为配基的亲和层析介质纯化干扰素α-2a的研究

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作者 高利增 王雪梅 +3 位作者 王立成 孙晓莉 李惟 王丽萍 《中国实验诊断学》 北大核心 2010年第4期533-535,共3页

关键词 干扰素Α-2A 层析介质 纯化 亲和 配基 小肽 免疫调节作用 核酸序列分析

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新型人血白蛋白分离介质吸附性能及重组人血白蛋白分离

14

作者 葛程童 褚文宁 +1 位作者 姚善泾 林东强 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第3期492-499,共8页

针对毕赤酵母发酵液中分离重组人血白蛋白(rHSA),采用新型介质IAA-CYS,探讨HSA吸附性能,优化分离条件,实现rHSA高效分离。考察了不同pH和盐浓度下IAA-CYS介质对HSA的吸附,发现pH为4.5是最佳条件,HSA饱和吸附容量达到157.6 mg×mL^(-... 针对毕赤酵母发酵液中分离重组人血白蛋白(rHSA),采用新型介质IAA-CYS,探讨HSA吸附性能,优化分离条件,实现rHSA高效分离。考察了不同pH和盐浓度下IAA-CYS介质对HSA的吸附,发现pH为4.5是最佳条件,HSA饱和吸附容量达到157.6 mg×mL^(-1),盐浓度影响较小。测定了不同NaCl浓度和线性流速下IAA-CYS介质对HSA的动态载量,发现流速影响较大,合适流速为100 cm×h^(-1);盐浓度影响较小,无需对酵母发酵液进行稀释预处理,rHSA动态载量达48.3 mg×mL^(-1)。进一步优化了发酵液中分离rHSA,上样pH为4.5,上样流速为100 cm×h^(-1),上样量为38.6 mg×mL^(-1),在pH为5.0和质量浓度为400 mmol·L^(-1)的NaCl条件下淋洗,在pH为8.0和质量浓度为200 mmol·L^(-1)的NaCl条件下洗脱,rHSA纯度为90.1%,收率为88.6%。结果表明,IAA-CYS介质分离rHSA条件温和,耐盐性好,料液无需稀释预处理,过程简便高效,具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 人血白蛋白 层析介质 吸附性能 蛋白分离

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新型耐碱蛋白A介质的制备与性能

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作者 韦巍 黄永东 +7 位作者 赵岚 吴学星 朱天孝 李冬雪 靳海波 张荣月 苏志国 马光辉 《过程工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期609-616,共8页

以蛋白A结构中耐碱性更好的C区为基础,构建一种新型耐碱蛋白A,并偶联至琼脂糖基质,获得新型耐碱蛋白A亲和层析介质,分别用激光共聚焦显微镜和石英晶体微天平研究了人免疫球蛋白(h Ig G)与蛋白A介质的结合过程。结果表明,该介质具有较商... 以蛋白A结构中耐碱性更好的C区为基础,构建一种新型耐碱蛋白A,并偶联至琼脂糖基质,获得新型耐碱蛋白A亲和层析介质,分别用激光共聚焦显微镜和石英晶体微天平研究了人免疫球蛋白(h Ig G)与蛋白A介质的结合过程。结果表明,该介质具有较商品配基更高的结合力和稳定的再生性能,hIgG动态载量达62.0 mg/mL,40次再生操作后载量为初始载量的84%。该介质在抗体纯化领域具有较好的应用前景。 展开更多

关键词 耐碱蛋白A 层析介质 亲和层析 抗体纯化 动态载量

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肠道病毒71型灭活疫苗纯化用层析介质使用寿命的确定

16

作者 解庭波 杨明 +2 位作者 任彬 明平刚 陈晓琦 《国际生物制品学杂志》 CAS 2018年第4期162-165,共4页

目的探索肠道病毒71型灭活疫苗纯化用层析介质最佳使用次数。方法在规模化生产过程中，根据层析介质特性采用相应的清洗和消毒方式。在保证产品质量的前提下，综合考虑生产过程中相关参数及层析介质柱效，评估层析介质使用寿命。结果随... 目的探索肠道病毒71型灭活疫苗纯化用层析介质最佳使用次数。方法在规模化生产过程中，根据层析介质特性采用相应的清洗和消毒方式。在保证产品质量的前提下，综合考虑生产过程中相关参数及层析介质柱效，评估层析介质使用寿命。结果随着层析介质使用次数的增多，纯化运行过程中层析介质的压力存在上升趋势，表明出现了污染物的聚集；同时层析柱的每米理论塔板数降低、对称性因子偏离，表明污染物在层析介质中的聚集造成了填料分布不匀，导致分离效果下降。经过综合评估，将凝胶过滤层析介质和离子交换层析介质的纯化使用次数暂定为62和32次。结论初步确定了层析介质的使用寿命，为规模化生产中层析介质的使用和更换提供了理论依据。 展开更多

关键词 肠道病毒71型灭活疫苗 层析介质 使用寿命

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链球菌蛋白G免疫球蛋白结合域C3区串联体的表达、筛选与初步应用

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作者 冯利利 杜夜星 +2 位作者 张强 李娇娇 夏海锋 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第4期885-892,共8页

筛选并制备高效结合抗体的重组蛋白G亲和层析介质。以链球菌蛋白G C3区为结构单元,拼接形成3、4、5、6个重复C3片段的串联体,分别克隆至PET21,并在E.coli BL21(DE3)中表达。经Ni^(2+)纯化的重组蛋白分别偶联至Purose 4 Fast Flow制备亲... 筛选并制备高效结合抗体的重组蛋白G亲和层析介质。以链球菌蛋白G C3区为结构单元,拼接形成3、4、5、6个重复C3片段的串联体,分别克隆至PET21,并在E.coli BL21(DE3)中表达。经Ni^(2+)纯化的重组蛋白分别偶联至Purose 4 Fast Flow制备亲和层析介质,比较介质的吸附情况,发现重组四串体对h IgG的吸附量最高,其静态饱和吸附量为66.79 mg×mL^(-1),动态吸附载量为35 mg×mL^(-1)介质,优于同类型商品介质。利用该介质分离纯化小鼠腹水和人血清中的IgG,纯度在95%左右,回收率不低于80%。 展开更多

关键词 抗体 链球菌蛋白G 层析介质 饱和吸附量

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稻壳纤维的柱层析性能研究

18

作者 钱俊青 郭爱芳 《功能高分子学报》 CAS CSCD 2000年第2期204-206,共3页

试验了稻壳纤维作为柱层析介质的性能 ,并制成亲和层析介质纯化脂肪酶。结果表明稻壳纤维层析过程为化学物理混合吸附过程 ,亲和层析性能良好 ,通过层析可将脂肪酶纯化 2倍 ,回收率达 81 .6%。适合较大规模层析分离。

关键词 稻壳纤维 亲和层析 脂肪酶 层析介质 纯化

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候选螨性口服液疫苗抗原标准化的初步研究

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作者 毛佐华 孙建华 +5 位作者 庄义军 何玉良 刘施巍 戴文斌 张风霞 李佩盈 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2003年第4期224-228,共5页

目的 为螨性疫苗及其原材料标准化的检测、质量的监控以及进一步开发提供相应的技术。方法 应用层析介质以及蛋白沉淀技术从螨代谢培养基中分离数种重要的以及国际公认的螨性分泌排泄致敏蛋白Dff F1、Dff F2、Der fⅡ和Der fⅢ,经临床... 目的 为螨性疫苗及其原材料标准化的检测、质量的监控以及进一步开发提供相应的技术。方法 应用层析介质以及蛋白沉淀技术从螨代谢培养基中分离数种重要的以及国际公认的螨性分泌排泄致敏蛋白Dff F1、Dff F2、Der fⅡ和Der fⅢ,经临床检验和放射性变应原吸附试验(RAST)等鉴定其免疫原性后,分别制备抗血清,再结合免疫学试验对疫苗制剂进行抗原的标准化分析。结果 4种成分除Dff F1外,均呈较强的变应原性,且与哮喘病人血清IgE显示出高结合率;火箭电泳峰清晰明了,ELISA的A值与对照组比较差异有显著性。结论 纯化的Dff F1、Dff F2、Der fⅡ和Der fⅢ致敏蛋白多克隆抗体结合免疫相关技术完全可以用于检测候选螨性疫苗口服液制剂中抗原的性质、含量等,以及进行标准化分析。 展开更多

关键词 粉尘螨 疫苗 哮喘 致敏原 层析介质 蛋白沉淀技术 皮内试验

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染料配基层析介质的合成及其纯化功能的研究

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作者 高昆玉 马星华 庄春荣 《大连理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 1989年第5期527-532,共6页

采用合成的１２个染料配基及催化偶联方法制成亲和层析介质，比较了不同结构的配基对碱性磷酸酶的选择纯化功能。配基中模仿天然辅酶杂环结构的三嗉环及两端的带电荷基团具有重要的功能作用。

关键词 染料 配基 层析介质 纯化 磷酸酯酶

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