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米曲霉RIB40高效同源重组和尿苷/尿嘧啶营养缺陷型菌株的构建 被引量：4
1
作者 高育青 张豪杰 +2 位作者 张丹凤 潘裕添 张峰 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2023年第1期200-207,共8页
目的:以米曲霉RIB40为出发菌株,构建具有高同源重组效率的营养缺陷型菌株。方法:首先通过同源重组技术和5-氟乳清酸(5-Fluoroorotic Acid,5-FOA)对尿苷/尿嘧啶营养缺陷的筛选作用,获得AopyrG基因缺失的米曲霉RIB40。然后利用烟曲霉Afpyr... 目的:以米曲霉RIB40为出发菌株,构建具有高同源重组效率的营养缺陷型菌株。方法:首先通过同源重组技术和5-氟乳清酸(5-Fluoroorotic Acid,5-FOA)对尿苷/尿嘧啶营养缺陷的筛选作用,获得AopyrG基因缺失的米曲霉RIB40。然后利用烟曲霉AfpyrG基因替换Aoku70得到ΔAoku70敲除菌株,再通过5-FOA的筛选作用使得ΔAoku70菌株基因组发生自身环化,丢失AfpyrG基因。最后为了检验ΔAoku70ΔAopyrG菌株的可用性,将编码红色荧光蛋白的mCherry基因敲入至双突变菌株的组蛋白H2B基因上,并通过激光共聚焦显微镜观察红色荧光蛋白质的亚细胞定位。结果:通过AopyrG和Aoku70的双基因敲除,获得了高同源重组效率的营养缺陷型菌株ΔAoku70ΔAopyrG。用激光共聚焦观察到红色荧光蛋白定位于细胞核,表明ΔAoku70ΔAopyrG菌株可用于米曲霉的基因改造。结论:ΔAoku70ΔAopyrG菌株可作为一个高同源重组效率的营养缺陷型出发菌株用于今后米曲霉RIB40的遗传改良。 展开更多
关键词 米曲霉 RIB40 尿苷/尿嘧啶营养缺陷型 pyrG KU70 荧光定位
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米曲霉3.042尿苷/尿嘧啶营养缺陷型遗传转化体系的构建 被引量：5
2
作者 毕付提 史亚楠 +3 位作者 张久祎 王静然 薛鲜丽 王德培 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2021年第3期189-195,共7页
米曲霉对潮霉素等多种抗生素不敏感,对其基因改造有一定困难。该研究以米曲霉3.042为出发菌株,建立pyrG筛选标记遗传转化体系。首先,分别运用紫外诱变法和左右臂同源重组法破坏米曲霉自身的pyrG基因,在含有5-氟乳清酸和尿苷/尿嘧啶的培... 米曲霉对潮霉素等多种抗生素不敏感,对其基因改造有一定困难。该研究以米曲霉3.042为出发菌株,建立pyrG筛选标记遗传转化体系。首先,分别运用紫外诱变法和左右臂同源重组法破坏米曲霉自身的pyrG基因,在含有5-氟乳清酸和尿苷/尿嘧啶的培养基平板进行筛选,最终两种方法分别获得性状稳定的尿苷/尿嘧啶营养缺陷型突变株米曲霉O11和米曲霉g-1。随后以缺陷型突变株为出发菌株,利用农杆菌转化法转入包含pyrG回补标记的质粒,其中米曲霉g-1突变株获得原养型的回补菌株,紫外诱变法获得的缺陷型突变菌株米曲霉O11未能恢复为原养型。研究表明米曲霉3.042 pyrG基因大片段缺失的缺陷型菌株,可直接以自身pyrG基因作为选择标记进行遗传改造。 展开更多
关键词 米曲霉3.042 尿苷/尿嘧啶营养缺陷型 紫外诱变 根癌农杆菌介导的转化法 pyrG
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