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尾静脉大容量快速注射法介导的人凝血因子Ⅸ基因在小鼠肝内的高效表达 被引量：5
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作者 贺晨霞 冯登敏 +7 位作者 陈立 陈浩明 姚纪花 沈琦 卢大儒 薛京伦 吴文君 丁友法 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第5期447-451,共5页
尾静脉大容量快速注射裸质粒DNA能够介导外源基因在动物肝内高效表达,采用此方法将人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)表达质粒pCMV-hFⅨ2.2 mL于7 s内导入小鼠体内,hFⅨ在小鼠体内表达水平最高为2921 ng/mL(血浆).hFⅨ表达水平与裸质粒DNA注射剂量呈... 尾静脉大容量快速注射裸质粒DNA能够介导外源基因在动物肝内高效表达,采用此方法将人凝血因子Ⅸ(hFⅨ)表达质粒pCMV-hFⅨ2.2 mL于7 s内导入小鼠体内,hFⅨ在小鼠体内表达水平最高为2921 ng/mL(血浆).hFⅨ表达水平与裸质粒DNA注射剂量呈正相关,重复注射的hFⅨ表达水平偏低(最高1459 ng/mL).PCR检测发现小鼠多种器官中存在hFⅨ cDNA,RT-PCR和免疫组化切片检测表明,hFⅨmRNA和蛋白主要在肝脏中表达.转氨酶水平与病理切片检测表明,注射1 d后5％的肝脏细胞受到损伤,但在3～10 d内恢复.研究结果表明,尾静脉大容量快速注射法能够介导hFⅨ在小鼠体内高水平表达,为基因治疗研究提供了一项简便而实用的动物实验手段. 展开更多
关键词 尾静脉大容量快速注射法 人凝血因子Ⅸ 基因转移 裸质粒 基因表达 基因治疗 血友病
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在活体小鼠中筛选lZP3基因RNAi有效靶位点的研究 被引量：4
2
作者 庄淑珍 李菁菁 +1 位作者 郑耀虎 张富春 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期979-983,共5页
ZP3作为精子结合的靶对象在卵母细胞受精中起着关键作用,也因此而成为研究哺乳动物受精机理的焦点。本研究参照新疆草原兔尾鼠卵透明带3(zonapellucida3geneofLaguruslagurus,lZP3)的mRNA,选择了针对lZP3mRNA的3个区域合成寡聚核苷酸连... ZP3作为精子结合的靶对象在卵母细胞受精中起着关键作用,也因此而成为研究哺乳动物受精机理的焦点。本研究参照新疆草原兔尾鼠卵透明带3(zonapellucida3geneofLaguruslagurus,lZP3)的mRNA,选择了针对lZP3mRNA的3个区域合成寡聚核苷酸连接到干扰载体pGenesil-1上,构建了3个针对lZP3mRNA的重组干扰载体,和pCDNA3-lZP3表达载体采用脂质体法共转染Hela细胞以及通过尾静脉大容量快速注射法(Hydrodynamics-basedtransfectionmethod,HD法)共注射小鼠,半定量RT-PCR和real-timePCR检测Hela细胞和小鼠肝脏中lZP3mRNA的表达情况,以筛选干扰lZP3mRNA的有效靶位点。结果表明,通过HD法共注射干扰载体和表达载体后,外源基因mRNA在小鼠肝脏中的表达和共转染Hela细胞后在Hela细胞中的表达情况是一致的,有2个干扰载体可以有效干扰lZP3mRNA的表达。研究还说明,利用HD法以小鼠作为实验材料筛选RNA干扰的有效靶位点是一条切实可行的方法。 展开更多
关键词 RNA干扰 靶位点 共转染 尾静脉大容量快速注射法
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花花柴Na^+/H^+反向运输载体的表达和抗血清制备 被引量：2
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作者 郑耀虎 张霞 +1 位作者 张富春 曾幼玲 《植物生理学通讯》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期524-528,共5页
文章建立了检测耐盐植物功能基因抗体制备和蛋白表达的方法。
关键词 花花柴 Na^+/H^+反向运输载体 原核表达 尾静脉大容量快速注射法 抗血清
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